樊雪靜,劉紅玉*,遲玉杰
(東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150030)
大豆分離蛋白(soybean protein isolate,SPI)是天然乳化劑可以吸附在油水界面防止液滴的聚集,起到穩(wěn)定乳狀液的作用,常應(yīng)用于食品加工業(yè)。但應(yīng)用蛋白質(zhì)作為乳化劑時易受到溶液的pH值、離子強度等外界環(huán)境的影響,不利于提高乳狀液的穩(wěn)定性[1]。當(dāng)pH值達到等電點(約為4.8)時[2],由于靜電排斥作用,液面蛋白質(zhì)吸附層將減少而引起絮凝現(xiàn)象[3]。而酒水飲料大多數(shù)呈現(xiàn)酸性,從而限制了SPI在食品行業(yè)的應(yīng)用。
研究表明,帶相反電荷的蛋白質(zhì)與糖類在離子強度較低(0.4 mol/L)的條件下由于靜電吸引可以形成靜電復(fù)合物,改變SPI表面帶電情況,使之快速吸附到界面降低界面張力[4],提高乳化能力[5]。Grigoriev等[6]也證實了靜電復(fù)合物在酸性條件下仍然有較強的功能,因為糖改變了復(fù)合物表面電荷與界面層厚度,增加液滴的親水性和空間排斥力,從而改善乳狀液的穩(wěn)定性,且蛋白質(zhì)與糖靜電復(fù)合物的制備過程與糖基化反應(yīng)相比,更為廉價與便捷,故可廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)實踐。由于蛋白質(zhì)和糖在不同的pH值條件下會形成可溶性、液態(tài)凝聚性和不溶性3 種類型的復(fù)合物,且存在明顯的轉(zhuǎn)化區(qū),一般利用濁度法鑒定蛋白質(zhì)與糖的相互作用關(guān)鍵點pH值,并進行強度分析[7]。目前,利用蛋白質(zhì)與果膠、卡拉膠、阿拉伯膠等為代表的陰離子多糖的相互作用研究復(fù)合物在乳狀液中的應(yīng)用已有一些報道[8-10]。但有關(guān)蛋白質(zhì)與具有生理活性的非還原性寡糖相互作用構(gòu)建新型食品體系的研究鮮見報道。寡糖(水蘇糖和棉子糖)具有調(diào)節(jié)血脂、增加機體對礦物質(zhì)的吸收、預(yù)防肝損傷、改善過敏性皮炎的功效,常用于保健食品和制藥領(lǐng)域[11]。為此,通過控制蛋白質(zhì)與糖形成復(fù)合物的結(jié)構(gòu),開發(fā)新型功能性食品配料,探究蛋白質(zhì)與陰離子寡糖形成的可溶性靜電復(fù)合物對蛋白質(zhì)乳化性的影響,研制具有保健功效的天然乳化劑。
本研究將通過激光共聚焦顯微技術(shù)、Zeta電位和濁度的測定研究SPI與寡糖(棉子糖和水蘇糖)之間的靜電復(fù)合過程及相行為,闡述其作用機理,確定SPI與寡糖相互作用形成可溶性靜電復(fù)合物的條件,為蛋白質(zhì)與寡糖混合體系的復(fù)合提供進一步的理論補充;內(nèi)源熒光色譜法分析得出SPI與寡糖的相互作用程度;研究不同pH值條件下復(fù)合體系的乳化性及乳化穩(wěn)定性。為提高和擴展蛋白質(zhì)-寡糖體系的功能提供依據(jù),拓寬兩者的應(yīng)用范圍。
SPI、大豆寡糖(純度>98%) 鄭州春信生物科技有限公司;大豆油(食品級) 哈爾濱九三集團;十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS,分析純)美國Sigma公司;羅丹明B(分析純) 天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司。
ALC-310.3電子分析天平、pHS-3C精密pH計 北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司;DK-98-II電熱恒溫水浴鍋天津市泰斯特儀器有限公司;恒溫磁力攪拌器 常州國華電器有限公司;BME100L高剪切混合乳化機 啟東市長江機電有限公司;721分光光度計 上海元析儀器有限公司;TCS SP2激光共聚焦顯微鏡 德國Leica公司;F-4500熒光分光光度計 日本日立公司;Nano-ZS粒度電位分析儀 英國Malvern公司;GL-21M離心機上海市離心機械研究所。
1.3.1 樣品溶液的制備
準(zhǔn)確稱取100 g SPI、7.5 g寡糖分別溶于2 000 mL和1 000 mL蒸餾水中,配制成SPI質(zhì)量濃度為5 g/100 mL、寡糖質(zhì)量濃度為0.75 g/100 mL的儲液,在室溫下磁力攪拌3 h使可溶物充分溶解后放入4 ℃冰箱中水化過夜。取60 mL SPI儲液與40 mL寡糖儲液充分混合,得到SPI質(zhì)量濃度為3 g/100 mL、寡糖為0.3 g/100 mL的SPI-寡糖復(fù)合溶液。取60 mL SPI儲液稀釋至100 mL得到3 g/100 mL的SPI溶液。調(diào)節(jié)SPI溶液、SPI-水蘇糖和SPI-棉子糖復(fù)合溶液pH值分別為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0和10.0,并將樣品溶液于90 ℃水浴鍋中加熱處理0.5 h。加熱后劇烈振蕩樣品并迅速使其冷卻至室溫,得到不同pH值條件下的樣品溶液[12]。
1.3.2 緩沖液的配制
配制0.1 mol/L的pH 3.0~6.0的檸檬酸-磷酸二氫鈉緩沖液、pH 7.0~9.0的Tris-HCl緩沖液、pH 10.0的甘氨酸-HCl緩沖液。
1.3.3 Zeta電位的測定
分別取100 μL不同pH值處理的樣品溶液用對應(yīng)pH值緩沖液(0.1 mol/L)稀釋50 倍,利用馬爾文粒度電位分析儀對溶液中粒子所帶電荷量進行測定。
1.3.4 SPI與SPI-寡糖復(fù)合體系的微觀結(jié)構(gòu)觀察
采用激光共聚焦顯微鏡觀測樣品溶液的微觀結(jié)構(gòu)。采用袁楊[12]的方法,稍作改進。觀測前,分別取各樣品溶液1 mL稀釋6 倍,得到SPI質(zhì)量濃度為0.5 g/100 mL的樣液,然后在新鮮配制的樣品溶液中加入20 μL 0.2%的羅丹明B熒光染料,用于標(biāo)記蛋白質(zhì),樣品充分混勻。取20 μL樣品于載玻片,蓋好蓋玻片,確保樣品中沒有起泡,采用×40物鏡觀測。
1.3.5 濁度的滴定分析
將不同pH值條件下的樣品倒入比色皿中,以蒸餾水作空白,利用分光光度計測定樣品在600 nm波長處的吸光度。
1.3.6 內(nèi)源熒光光譜分析
參照Tang Chuanhe等[13]的方法,稍作改進。分別取100 μL不同pH值的樣品用對應(yīng)pH值的緩沖液(0.1 mol/L)稀釋5 0 倍,激發(fā)波長為2 8 0 n m,發(fā)射波長為300~500 nm,狹縫寬度均為5 nm,電壓為700 mV。
1.3.7 溶解度的測定
將SPI溶液及SPI-寡糖復(fù)合溶液靜置數(shù)分鐘,待沉淀完全后取其上清液10 mL于4 000 r/min離心20 min,吸取5 mL上清液,采用Folin-酚法[14]測定上清液中蛋白質(zhì)含量,按式(1)計算其溶解度:
1.3.8 乳化性及乳化穩(wěn)定性的測定
采用Pearce等[15]的方法并稍加改進。取不同pH值條件處理的樣品溶液與其1/4體積的大豆油混合,10 000 r/min均質(zhì)1 min后,分別在均質(zhì)0、10 min時取樣200 μL,用0.1 g/100 mL SDS溶液稀釋50 倍,以SDS溶液為空白,測定500 nm波長處的吸光度,以0 min的吸光度(A0)表示乳化性,10 min內(nèi)的乳化穩(wěn)定性按式(2)計算:
式中:A0為0 min的吸光度;ΔT為時間差/min;ΔA為ΔT內(nèi)的吸光度差值。
每個樣品進行3 次重復(fù)實驗,通過SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理分析,采用Origin 8.0軟件作圖,顯著性水平為P<0.05。
表1 不同pH值條件下SPI、SPI-水蘇糖、SPI-棉子糖復(fù)合溶液相行為Table1 Phase behavior of SPI, and SPI-stachyose and SPI-raf fi nose mixtures as a function of pH
圖1 pH值對SPI溶液、SPI-水蘇糖、SPI-棉子糖復(fù)合溶液Zeta電位的影響Fig.1 Effect of pH on Zeta potential of SPI, and SPI-stachyose and SPI-raff i nose mixed solution
由表1可知,SPI與寡糖復(fù)合物水溶液在不同pH值條件下分別表現(xiàn)出澄清、半透明、渾濁、部分相分離和完全相分離5 種相行為。在pH 3.0~10.0范圍內(nèi),寡糖溶液呈澄清透明狀態(tài),較為穩(wěn)定;SPI溶液則由半透明狀態(tài)逐漸出現(xiàn)部分相分離,隨后至完全相分離(pH 5.0),再逐漸變?yōu)榘胪该鳡顟B(tài);SPI-水蘇糖、SPI-棉子糖2 種復(fù)合溶液同SPI溶液情況類似,但在pH值為4.0時就出現(xiàn)了完全相分離現(xiàn)象。上述結(jié)論與袁楊[12]的研究結(jié)果類似。
圖1則從Zeta電位角度分析了出現(xiàn)上述變化的原因。由靜電DLVO膠體溶液理論[16]可知,當(dāng)Zeta電位升高時,溶液斥力位能增加,分子熱運動所需克服的能壘加大,溶液變得穩(wěn)定,同時Zeta電位還能表征溶液性質(zhì)。隨著pH值從3.0升高至10.0,水蘇糖溶液Zeta電位由-21.18 mV降至-35.66 mV,棉子糖溶液Zeta電位由-24.89 mV降至-37.13 mV。即寡糖在廣泛的pH值范圍內(nèi)帶有強負(fù)電荷,靜電排斥力有效防止寡糖分子的聚集[12]。SPI屬于兩性電解質(zhì),分子側(cè)鏈上帶有許多極性和非極性基團。隨著pH值的升高,SPI溶液的Zeta電位由30.2 mV降至-32.8 mV,等電點為4.9,即當(dāng)SPI溶液Zeta電位絕對值較小時,SPI分子表面所帶的同性電荷較少,分子間靜電斥力減少而相互聚集,降低溶液穩(wěn)定性[17],發(fā)生相分離。當(dāng)pH值由3.0增加至10.0時,SPI-水蘇糖復(fù)合溶液體系的Zeta電位由13.2 mV降至-32.9 mV,等電點約為3.9;SPI-棉子糖復(fù)合溶液體系的Zeta電位由9.83 mV降至-33.98 mV,等電點約為3.7。與SPI溶液相比,2 種復(fù)合溶液等電點均降低,且在等電點處均發(fā)生相分離。研究表明當(dāng)體系中SPI與糖類帶相反電荷時,會發(fā)生靜電吸引[18],所以在酸性條件下,帶正電的SPI分子與帶負(fù)電的寡糖可能相互吸引,形成靜電復(fù)合物從而降低體系的Zeta電位值,且當(dāng)pH值低于SPI-寡糖復(fù)合溶液等電點時,SPI所帶的正電荷多于寡糖所帶的負(fù)電荷,不能完全中和,形成的靜電復(fù)合物仍帶有正電荷,此時體系Zeta電位值為正。當(dāng)pH值高于SPI-寡糖復(fù)合溶液的等電點而小于7.0時,所有溶液均呈負(fù)電狀態(tài),但SPI-寡糖復(fù)合溶液的Zeta電位值仍然明顯高于寡糖溶液、低于SPI溶液,說明體系中SPI分子所帶的正電荷與寡糖發(fā)生靜電吸引,但SPI所帶正電荷不足以完全中和寡糖所帶的負(fù)電荷,因此Zeta電位為負(fù)值。當(dāng)pH值大于7.0時,SPI分子表面所帶負(fù)電荷增多,與寡糖以互相排斥作用增加,不易形成靜電復(fù)合物[19]。故對于SPI-寡糖混合體系,復(fù)合物的形成發(fā)生在pH值為3.0~7.0的范圍內(nèi),當(dāng)pH值為3.0~5.0時,可能形成凝聚物,出現(xiàn)部分甚至完全相分離,而pH值為6.0~7.0時,可能形成可溶性復(fù)合物,呈半透明狀態(tài)。
圖2 不同pH值條件下SPI、SPI-水蘇糖和SPI-棉子糖的微觀結(jié)構(gòu)Fig.2 Microstructure of SPI, and SPI-stachyose and SPI-raff i nose complexes as a function of pH
圖2 顯示在不同pH值條件下,SPI、SPI-寡糖復(fù)合溶液的激光共聚焦顯微圖像。圖中發(fā)亮區(qū)域為羅丹明B所標(biāo)記的SPI富集區(qū)域,黑色區(qū)域為寡糖富集區(qū)域或水相。由圖2可知,在pH 4.0~5.0條件下,SPI分子逐漸出現(xiàn)大范圍的聚集,pH 6.0時聚集體開始變小,這是由于SPI在等電點處脫水縮合作用引起的[12]。SPI-水蘇糖和SPI-棉子糖復(fù)合溶液體系的顯微圖較為類似,pH 3.0~5.0的范圍內(nèi)出現(xiàn)不同程度的凝聚現(xiàn)象,pH 4.0時聚集程度最大,這是由于寡糖的加入與SPI發(fā)生靜電相互作用,使得等電點左移,這與圖1反映的情況一致。當(dāng)pH 6.0時,SPI-寡糖復(fù)合體系中粒子均勻分散??梢园l(fā)現(xiàn),pH值為6.0時SPI-寡糖可以形成可溶性復(fù)合物,與相同條件下的SPI溶液相比,復(fù)合物能夠均勻分散在體系中,即寡糖的加入提高了SPI在偏酸性條件下的溶解性和穩(wěn)定性。
圖3 pH值對SPI、SPI-水蘇糖、SPI-棉子糖復(fù)合溶液濁度的影響Fig.3 Effect of pH on turbidity of SPI, and SPI-stachyose and SPI-raff i nose mixed solutions
濁度是因樣品的吸收或顆粒的散射而造成透射光的衰減,可以反映粒子的大小,表征溶液體系中顆粒的聚集程度和穩(wěn)定性。在蛋白質(zhì)和糖類的復(fù)合體系中,用濁度和Zeta電位相結(jié)合分析體系的穩(wěn)定性[12]及復(fù)合物的形成過程[20]。圖3反映了不同pH值條件下SPI溶液和SPI-寡糖復(fù)合溶液濁度的變化。隨著pH值的升高,3 種溶液體系的濁度都呈現(xiàn)先升高再降低的趨勢。當(dāng)pH值為5.0時,SPI溶液濁度為2.390,因接近SPI等電點,SPI發(fā)生變性聚集。當(dāng)pH值繼續(xù)升高,濁度下降,說明SPI分子逐漸溶解。SPI-水蘇糖和SPI-棉子糖復(fù)合溶液的濁度有著類似的變化趨勢,并且相對比SPI溶液,其濁度的最大值均向酸性pH值偏移,當(dāng)pH值為4.0時,SPI-水蘇糖和SPI-棉子糖溶液的濁度分別呈現(xiàn)最大值為2.155和2.178,由圖1可知,在pH 3.5~4.0之間,SPI-水蘇糖和SPI-棉子糖復(fù)合溶液體系發(fā)生了Zeta電位值由正變負(fù)的反轉(zhuǎn),此時SPI-寡糖靜電復(fù)合物達到電荷中性,由自身結(jié)合的趨勢,分子間進一步復(fù)合形成凝聚物。當(dāng)pH值繼續(xù)升高至6.0的過程中,濁度均急劇下降,說明到達臨界點pHψ值,聚合物開始解離形成可溶性靜電復(fù)合物,均勻分散在溶液中;直到pH值達到臨界點pHc值,復(fù)合物由于SPI與寡糖帶有相同的電荷而發(fā)生結(jié)構(gòu)上的崩塌[21-22],SPI與寡糖不發(fā)生靜電相互作用[19]。
圖4 pH值對SPI溶液(A)、SPI-水蘇糖復(fù)合溶液(B)、SPI-棉子糖復(fù)合溶液(C)熒光光譜的影響Fig.4 Effect of pH on fl uorescence spectra of SPI solution (A), SPI-stachyose mixed solution (B), and SPI-raf fi nose mixed solution (C)
應(yīng)用熒光光譜法研究蛋白質(zhì)分子與其他小分子等相互作用是較為常用的一種手段,蛋白質(zhì)分子中的色氨酸(Trp)在受到激發(fā)后具有發(fā)射較強內(nèi)源熒光的能力,其他小分子加入后,蛋白質(zhì)的熒光強度將會發(fā)生變化[23]。由圖4A所示,隨著pH值逐漸升高,SPI溶液的熒光強度呈現(xiàn)先減小后增大的趨勢。pH值從3.0升高到5.0的過程中,SPI熒光強度從488降低到94.4,當(dāng)pH值升高到10.0時,熒光強度增大到861.6??赡苁怯捎趐H值為5.0左右時,SPI變性發(fā)生聚集,Trp在SPI內(nèi)部的疏水基團中[24]。當(dāng)pH值低于等電點時,SPI分子部分聚集,少量的Trp殘基處于極性環(huán)境中,熒光強度有所增加;高于等電點時,隨著pH值的升高,尤其在堿性條件下,SPI肽鏈展開,越來越多的Try殘基暴露,熒光強度增強。由圖4B、C可知,當(dāng)pH值為4.0時,SPI-水蘇糖和SPI-棉子糖2 種復(fù)合溶液的熒光強度分別為79.92和74.6,遠(yuǎn)低于SPI溶液的299.8,可能因為SPI與寡糖形成的靜電聚合物為內(nèi)源Try殘基提供了疏水環(huán)境[25],降低了熒光強度。但隨著pH值的逐漸升高,SPI-寡糖復(fù)合溶液的熒光強度逐漸增加,越來越接近SPI的熒光強度,可能是因為在堿性條件下SPI分子所帶負(fù)電荷的增加,與寡糖難以形成靜電復(fù)合物,這與前人的報道結(jié)果類似[26]。
圖5 pH值對SPI、SPI-水蘇糖、SPI-棉子糖復(fù)合溶液溶解度的影響Fig.5 Effect of pH on solubility of SPI, and SPI-stachyose and SPI-raff i nose complexes
SPI的溶解度是其與溶劑相互作用平衡的熱力學(xué)表現(xiàn)形式,是發(fā)揮乳化性的前提。當(dāng)SPI與糖類物質(zhì)發(fā)生相互作用后,可以在一定程度上改善SPI的部分功能性質(zhì)。由圖5可知,當(dāng)pH值從3.0升高到5.0時,SPI溶液的溶解度逐漸下降,并在pH 5.0處達到最低,這是因為在等電點附近,SPI分子之間的靜電排斥力最小,且SPI與水分子之間的作用力很小[27],因此溶解度最低;隨著pH值的升高,SPI分子所帶的負(fù)電荷增多,分子間的排斥力增大,水化作用增強,且SPI空間結(jié)構(gòu)逐漸展開,伴隨其亞基之間二硫鍵的斷裂,溶解度增大[28]。隨著pH值的改變,SPI-水蘇糖和SPI-棉子糖復(fù)合溶液體系的溶解度變化趨勢類似,寡糖的引入使得SPI的等電點向左偏移,而且在等電點左右兩側(cè)的pH值條件下,復(fù)合溶液體系的溶解度均增大,且均大于SPI溶液。當(dāng)pH值為6.0左右時,SPI-水蘇糖和SPI-棉子糖復(fù)合溶液的溶解度達到最大,分別為74.1%和70.6%。這可能是由于SPI與寡糖發(fā)生靜電相互作用形成可溶性復(fù)合物,增加了粒子的親水性,使得復(fù)合物分子表面容易形成水化層,另一方面,寡糖的引入從空間上保護了SPI,防止SPI聚集[29],從而增加其溶解度。當(dāng)pH值繼續(xù)增大,SPI-寡糖復(fù)合溶液的溶解度逐漸降低,與SPI溶解度接近。可能是由于SPI與寡糖的靜電相互作用逐漸減弱造成的[19]。
圖6 pH值對SPI、SPI-水蘇糖、SPI-棉子糖復(fù)合溶液乳化性的影響Fig.6 Effects of pH values on emulsif i cation of SPI, SPI-stachyose and SPI-raff i nose composite solution
圖7 pH值對SPI、SPI-水蘇糖、SPI-棉子糖復(fù)合溶液乳化穩(wěn)定性的影響Fig.7 Effect of pH on emulsion stability of SPI, SPI-stachyose and SPI-raff i nose mixed solutions
由圖6和圖7可知,pH值為SPI等電點4.9時,SPI乳化性和乳化穩(wěn)定性均最小,離開等電點后,乳化性和乳化穩(wěn)定性增大。尤其是隨著pH值的增加,SPI乳化性和乳化穩(wěn)定性都顯著增加,當(dāng)pH值為9.0時達到最大值,其乳化性為0.572±0.009,乳化穩(wěn)定性為(4.42±0.021)%。由于在堿性條件下,受到OH-的影響,羧基去質(zhì)子化,—COO-增多,電荷排布改變,分子間的靜電斥力增加。當(dāng)pH值為10.0時,乳化性和乳化穩(wěn)定性均開始下降,可能是由于溶液中的—COO-趨于穩(wěn)定,乳化性反而有所下降[30]。寡糖與SPI分子靜電吸引,使得SPI-水蘇糖和SPI-棉子糖靜電復(fù)合溶液的等電點分別向左偏移至3.7和3.9,因此在pH值為4.0時,復(fù)合物不僅溶解度降低,而且乳化性和乳化穩(wěn)定性也達到最低值。當(dāng)遠(yuǎn)離等電點時,乳化性和乳化穩(wěn)定性均有所提高。當(dāng)pH值為6.0時,SPI-水蘇糖和SPI-棉子糖復(fù)合溶液的乳化性達到最大值,分別為0.687±0.021和0.637±0.010;乳化穩(wěn)定性也均為最大值,分別為(5.81±0.08)%和(5.40±0.06)%。由于在弱酸性條件下,寡糖與SPI形成可溶性靜電復(fù)合物,親水性羥基的引入改變了SPI分子表面的親水親油平衡值,有利于SPI在乳化過程中在油-水界面重排,降低界面張力,在一定程度上提高了SPI的乳化性;同時由于SPI-寡糖復(fù)合物所帶的凈負(fù)電荷增多[31],乳狀液中粒子間的排斥作用大于吸引作用,粒子不易聚結(jié),因此乳化穩(wěn)定性也得以提高[32]。隨著pH值的升高,乳化性和乳化穩(wěn)定性均逐漸降低,且在堿性條件下,復(fù)合溶液的乳化性和乳化穩(wěn)定性逐漸接近于SPI溶液??赡苁怯捎赟PI與寡糖的靜電相互作用減弱造成的,這與溶解度的變化趨勢一致。
通過Zeta電位、激光共聚焦顯微鏡以及濁度的測定,發(fā)現(xiàn)SPI與寡糖可以與水蘇糖和棉子糖靜電相互作用使得等電點從4.9分別減小到3.7和3.9,并且在酸性條件下可以形成靜電復(fù)合物,且在pH值為6.0時開始形成可溶性靜電復(fù)合物。內(nèi)源熒光光譜掃描發(fā)現(xiàn),當(dāng)SPI與寡糖發(fā)生靜電相互作用后,熒光強度降低,且靜電相互作用越大降低程度越大。同時發(fā)現(xiàn)SPI與寡糖發(fā)生靜電相互作用形成可溶性復(fù)合物后,其溶解度、乳化性和乳化穩(wěn)定性均相應(yīng)提高。當(dāng)pH值為6.0時,SPI-水蘇糖和SPI-棉子糖復(fù)合溶液的溶解度達到最大,分別為74.1%和70.6%,與SPI相比分別提高了81.17%和72.62%;乳化性分別為0.687±0.021和0.637±0.010,與SPI相比分別提高了50.66%和39.69%;乳化穩(wěn)定性分別為(5.81±0.08)%和(5.40±0.06)%,與SPI相比分別提高了132.40%和116.00%。綜上所述,SPI與寡糖在pH 6.0的條件下較大程度形成可溶性靜電復(fù)合物,具有良好的溶解性和乳化性質(zhì)。
[1] DICKINSON E. Flocculation of protein-stabilized oil-in-water emulsions[J]. Colloids Surfaces B∶ Biointerfaces, 2010, 81(1)∶ 130-140. DOI∶10.1016/j.colsurfb.2010.06.033.
[2] HOFLAND G W, DE RIJKE A, THIERING R, et al. Isoelectric precipitation of soybean protein using carbon dioxide as a volatile acid[J]. Journal of Chromatography B∶ Biomedical Sciences and Applications, 2000, 743(1/2)∶ 357-368. DOI∶10.1016/S0378-4347(00)00259-0.
[3] DICKINSON E. Interfacial structure and stability of food emulsions as affected by protein-polysaccharide interactions[J]. Soft Matter, 2008,4(5)∶ 932-942. DOI∶10.1039/B718319D.
[4] KLEIN M, ASERIN A, SVITOV I, et al. Enhanced stabilization of cloudy emulsions with gum Arabic and whey protein isolate[J].Colloids Surfaces B∶ Biointerfaces, 2010, 77(1)∶ 75-81. DOI∶10.1016/j.colsurfb.2010.01.008.
[5] KHALLOUFI S, CORREDIG M, GOFF H D, et al. Flaxseed gums and their adsorption on whey protein-stabilized oil-inwater emulsions[J]. Food Hydrocolloids, 2008, 23(3)∶ 611-618.DOI∶10.1016/j.foodhyd.2008.04.004.
[6] GRIGORIEV D O, MILLER R. Mono- and multilayer covered drops as carriers[J]. Current Opinion in Colloid & Interface Science, 2008,14(1)∶ 48-59. DOI∶10.1016/j.cocis.2008.03.003.
[7] VINAYAHAN T, WILLIAMS P A, PHILLIPS G. Electrostatic interaction and complex formation between gum Arabic and bovine serum albumin[J]. Biomacromolecules, 2012, 11(12)∶ 3367-3374.DOI∶10.1021/bm100486p.
[8] CHO Y H, MCCLEMENTS D J. Theoretical stability maps for guiding preparation of emulsions stabilized by protein-polysaccharide interfacial complexes[J]. Langmuir, 2009, 25(12)∶ 6649-6657.DOI∶10.1021/la8006684.
[9] 熊拯, 黃貴秋. 大豆分離蛋白-陰離子多糖復(fù)合體系起泡性能研究[J]. 農(nóng)業(yè)機械, 2011(17)∶ 61-64. DOI∶10.16167/j.cnki.1000-9868.2011.17.018.
[10] 郭興鳳, 熊拯, 王延青, 等. SPI-陰離子多糖復(fù)合體系乳化穩(wěn)定性研究[J]. 河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版), 2010, 31(3)∶ 32-34.DOI∶10.16433/j.cnki.issn1673-2383.2010.03.007.
[11] 楊秀芳, 陳梅, 馬養(yǎng)民. 大豆低聚糖功能及其應(yīng)用[J]. 糧食與油脂,2010(5)∶ 8-11. DOI∶10.3969/j.issn.1008-9578.2010.05.003.
[12] 袁楊. 食物蛋白與殼聚糖相互作用及其在食品體系的應(yīng)用研究[D].廣州∶ 華南理工大學(xué), 2014.
[13] TANG C H, YANG X Q, CHEN Z, et al. Physicochemical and structural characteristics of sodium caseinate biopolymers induced by microbial transglutaminase[J]. Journal of Food Biochemistry, 2005,29(4)∶ 402-421. DOI∶10.1111/j.1745-4514.2005.00038.x.
[14] MU L X, ZHAO M M, YANG B, et al. Effect of ultrasonic treatment on the graft reaction between soy protein isolate and gum acacia and on the physicochemical properties of conjugates[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry, 2010, 58(7)∶ 4494-4499.DOI∶10.1021/jf904109d.
[15] PEARCE K N, KINSELLA J E. Emulsifying properties of proteins∶evaluation of a turbidimetric technique[J]. Journal of Agricultural &Food Chemistry, 1978, 26(3)∶ 716-723. DOI∶10.1021/jf60217a041.
[16] SANTANDER-ORTEGA M J, PEULA-GARCIA J M, GOYCOOLEA F M, et al. Chitosan nanocapsules∶ effect of chitosan molecular weight and acetylation degree on electrokinetic behaviour and colloidal stability[J]. Colloids Surfaces B∶ Biointerfaces, 2011, 82(2)∶ 571-580.DOI∶10.1016/j.colsurfb.2010.10.019.
[17] WONG B T, DAY L, AUGUSTIN M A. Deamidated wheat protein-dextran Maillard conjugates∶ effect of size and location of polysaccharide conjugated on steric stabilization of emulsions at acidic pH[J]. Food Hydrocolloids, 2012, 25(6)∶ 1424-1432. DOI∶10.1016/j.foodhyd.2011.01.017.
[18] HERLANT M. Effect of Arabic gum, xanthan gum and orange oil contents on ζ-potential, conductivity, stability, size index and pH of orange beverage emulsion[J]. Colloids & Surfaces A∶ Physicochemical &Engineering Aspects, 2008, 315(1/2/3)∶ 47-56. DOI∶10.1016/j.colsurfa.2007.07.007.
[19] 謝晶晶, 章軼鋒, 李玉輝, 等. 大豆分離蛋白與甜菜果膠靜電復(fù)合過程的研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2013, 34(13)∶ 58-62. DOI∶10.13386/j.issn1002-0306.2013.13.031.
[20] MEKHLOUFI G, SANCHEZ C, RENARD D, et al. pH-Induced structural transitions during complexation and coacervation of betalactoglobulin and acacia gum[J]. Langmuir, 2015, 21(1)∶ 386-394.DOI∶10.1021/la0486786.
[21] NIU F, SU Y, LIU Y, et al. Ovalbumin-gum arabic interactions∶ effect of pH, temperature, salt, biopolymers ratio and total concentration[J].Colloids and Surfaces B∶ Biointerfaces, 2014, 113(3)∶ 477-482.DOI∶10.1016/j.colsurfb.2013.08.012.
[22] RU Q, WANG Y, LEE J, et al. Turbidity and rheological properties of bovine serum albumin/pectin coacervates∶ effect of salt concentration and initial protein/polysaccharide ratio[J]. Carbohydrate Polymers,2012, 88(3)∶ 838-846. DOI∶10.1016/j.carbpol.2012.01.019.
[23] KIM D, PARK J, KIM J, et al. Flavonoids as mushroom tyrosinase inhibitors∶ a fl uorescence quenching study[J]. Journal of Agricultural &Food Chemistry, 2016, 54(3)∶ 935-941. DOI∶10.1021/jf0521855.
[24] GAUCHE C, BARRETO P L M, BORDIGNON-LUIZ M T.Effect of thermal treatment on whey protein polymerization by transglutaminase∶ implications for functionality in processed dairy foods[J]. LWT-Food Science and Technology, 2010, 43(2)∶ 214-219.DOI∶10.1016/j.lwt.2009.08.009.
[25] 李菊芳. 磷脂-大豆蛋白復(fù)合物形成機理及其理化、功能特性研究[D].北京∶ 中國農(nóng)業(yè)大學(xué), 2014.
[26] BATTAL Y B, TOPUZOGULLARI M, MUSTAFAEVA Z. The fl uorescence study of interaction between bovine serum albumin and polyacrylic acid[J]. Journal of Fluorescence, 2009∶ 1-11. DOI∶10.1007/s10895-009-0484-9.
[27] TADPITCHAYANGKOON P, PARK J W, YONGSAWATDIGUL J.Conformational changes and dynamic rheological properties of fish sarcoplasmic proteins treated at various pHs[J]. Food Chemistry, 2010,121(4)∶ 1046-1052. DOI∶10.1016/j.foodchem.2010.01.046.
[28] 魏冬旭, 江連洲, 王辰, 等. pH值對大豆11S球蛋白結(jié)構(gòu)和表面疏水性的影響[J]. 食品科學(xué), 2015, 36(11)∶ 1-5. DOI∶10.7506/spkx1002-6630-201511001.
[29] NIU F, DONG Y, SHEN F, et al. Phase separation behavior and structural analysis of ovalbumin-gum Arabic complex coacervation[J]. Food Hydrocolloids, 2015, 43∶ 1-7. DOI∶10.1016/j.foodhyd.2014.02.009.
[30] 鄧塔, 李軍生, 閻柳娟, 等. 大豆蛋白乳化性的研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2013, 34(2)∶ 90-93. DOI∶10.13386/j.issn1002-0306.2013.02.039.
[31] YIN B, DENG W, XU K, et al. Stable nano-sized emulsions produced from soy protein and soy polysaccharide complexes[J]. Journal of Colloid and Interface Science, 2012, 380(1)∶ 51-59. DOI∶10.1016/j.jcis.2012.04.075.
[32] SALMINEN H, WEISS J. Electrostatic adsorption and stability of whey protein-pectin complexes on emulsion interfaces[J].Food Hydrocolloids, 2014, 35(1): 410-419. DOI:10.1016/j.foodhyd.2013.06.020.