趙麗麗，文輝強(qiáng)，韓凌霞，趙　麗，彭一良，李淑蘭*

(1.哈爾濱師范大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，哈爾濱　150025； 2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，哈爾濱　150001)

畜禽的生理常數(shù)以及血液生化指標(biāo)是診斷疾病和反映機(jī)體動(dòng)物健康狀況的重要依據(jù)，也是畜禽飼養(yǎng)、繁殖、保護(hù)和疾病防治的參考指標(biāo)[1]。近年，關(guān)于不同品種雞的生理及血液生化指標(biāo)的研究報(bào)道較多，但多數(shù)集中在某一個(gè)年齡段的測(cè)定，如成年徐海雞[2]、矮腳系新疆拜城油雞[3]、灰胸竹雞[4]、鹽津?yàn)豕请u[5]等，還有一些是改變食物組成和環(huán)境條件對(duì)雞血清生化指標(biāo)影響的研究，如飼料添加劑[6]、尿素和硫酸銅[7]、棉籽餅[8]、不同添加水平小球藻[9]對(duì)雞血液生理生化指標(biāo)影響的報(bào)道。對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不同年齡的血液生化指標(biāo)的報(bào)道相對(duì)較少，主要見(jiàn)于貴妃雞[10]、SD大鼠[11]、大耳白兔[12]、BWEL-SPF種雞[13]和鱘魚(yú)[14]等。而對(duì)于隔離環(huán)境百級(jí)凈化條件下飼養(yǎng)的SJ5-SPF雞不同周齡常用生理參數(shù)以及血液生化指標(biāo)測(cè)定的研究未見(jiàn)報(bào)道。本文以4周齡、20周齡、25周齡和40周齡的雌雄SJ5-SPF雞為研究對(duì)象，測(cè)定其生理參數(shù)以及血液生化指標(biāo)的正常值，為禽類(lèi)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，同時(shí)也為其疾病診斷和飼養(yǎng)管理等提供一些基礎(chǔ)性資料。

1　材料和方法

1.1　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SJ5-SPF雞，4 周(病毒攻毒期)、20周(性成熟前期)、25周(性成熟后期)、40 周(產(chǎn)蛋高峰期)4個(gè)周齡，每個(gè)周齡雌雄各20 只。4周體重[雌(209.15±18.28)g，雄(226.60±20.60)g]，20周體重[雌(1214.75±114.39)g，雄(1666.50±108.21)g]，25周體重[雌(1537.70±134.49)g，雄(1925.20±95.56)g]，40周體重[雌(1517.15±150.70)g，雄(1852.75±200.79)g]。由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供[SCXK(黑)2017-005]，在哈爾濱師范大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院完成[SYXK(黑)2017-009]。SJ5-SPF雞飼養(yǎng)在隔離環(huán)境中，凈化級(jí)別為百級(jí)凈化，環(huán)境為全人工控制，溫度20℃～25℃，濕度40%～60%，產(chǎn)蛋期光照時(shí)間每天為16 h，非產(chǎn)蛋期光照時(shí)間每天為8 h。

1.2　主要儀器

貝克曼庫(kù)爾特 UniCel DxC 600 Synchron 全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)產(chǎn))；臺(tái)式低速離心機(jī) TD5(湖南產(chǎn))；多道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng) RM6240C(成都儀器廠)。

4)以上試驗(yàn)均為在干燥的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下完成，在井下濕度超過(guò)90%的環(huán)境中，木墊板對(duì)錨桿工作荷載的影響將會(huì)大幅增加，可進(jìn)一步進(jìn)行井下現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境下的試驗(yàn)研究。

1.3　實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1取血

SJ5-SPF雞禁食12 h后，將雞翅根部用酒精棉球消毒，用一次性使用血樣采集針從翅根部靜脈采血，將血樣采集到一次性使用真空采血管內(nèi)(5 mL), 采完血后放入37℃溫箱靜置大約0.5 h，然后3500 r/min離心20 min，離心后淡黃色的上清液即為血清。

1.3.2生理指標(biāo)的測(cè)定

采用RM6240C多道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)測(cè)定其生理指標(biāo)共5項(xiàng)，包括體溫(T)、呼吸頻率(R)、心率(HR)、舒張壓(DBP)和收縮壓(SBP)。

1.3.3血液生化指標(biāo)的測(cè)定

將1.3.1中，離心所得的血清用貝克曼庫(kù)爾特 UniCel DxC 600 Synchron 全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血液生化指標(biāo)共19項(xiàng)，包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、總蛋白(TP)、球蛋白(GLB)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TB)、直接膽紅素(DB)、間接膽紅素(IBIL)、葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)、膽固醇(TCH)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、鉀(K)、鈉(Na)、鈣(Ca)。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)果

2.1　生理指標(biāo)的測(cè)定

不同周齡間，4周齡與20、25、40周齡的SJ5-SPF雞體溫、呼吸頻率、心率、舒張壓和收縮壓5項(xiàng)指標(biāo)比較差異有顯著性。不同性別中，只有體溫在4個(gè)周齡的雌、雄之間差異無(wú)顯著性。舒張壓只在40周齡有極顯著性差異。雌、雄間心率只在40周齡差異無(wú)顯著性。呼吸頻率和收縮壓雌、雄間在4個(gè)周齡均有顯著性差異。(見(jiàn)表1)

2.2　血液生化指標(biāo)的測(cè)定

組間相比雌性只有谷丙轉(zhuǎn)氨酶差異無(wú)顯著性(P> 0.05)，雄性僅有谷丙轉(zhuǎn)氨酶和葡萄糖差異無(wú)顯著性，其余生化指標(biāo)均有顯著性差異(P< 0.05)；雌雄之間相比，谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素、葡萄糖、尿素氮和鈉只有1個(gè)周齡差異有顯著性(P< 0.05)，乳酸脫氫酶、總蛋白、球蛋白、白蛋白和肌酐在2個(gè)周齡差異有顯著性(P< 0.05)，堿性磷酸酶、甘油三酯和鈣在3個(gè)周齡差異有顯著性(P< 0.05)，而膽固醇和鉀在4個(gè)周齡均有顯著性差異(P< 0.05)。(見(jiàn)表2)

3　討論

3.1　生理參數(shù)

動(dòng)物生理參數(shù)以及血液生化指標(biāo)的測(cè)定能夠反應(yīng)動(dòng)物的生理狀態(tài)和健康狀況，對(duì)動(dòng)物正常生理狀態(tài)和飼養(yǎng)管理具有指導(dǎo)意義[15]。已有研究報(bào)道[10]，貴妃雞的體溫、呼吸頻率和心率隨著周齡的變大而略有降低的趨勢(shì)，SJ5-SPF 雞體溫在各周齡之間差異不大，呼吸頻率在4周齡時(shí)顯著大于其余三個(gè)周齡，心率在四個(gè)周齡間差異有顯著性，這一結(jié)果與貴妃雞的都不同。

表1　4 周、20周、25 周和 40 周 SJ5-SPF 雞生理指標(biāo)測(cè)定結(jié)果(n=20)

注：A～D表示均值由大到小，相同性別的不同周齡之間進(jìn)行比較，字母相同表示差異無(wú)顯著性(P> 0.05)，字母不相同表示差異有顯著性(P< 0.05)；與雌性同周齡比較，△P< 0.05，△△P< 0.01。下同。

Note. A-D indicate the order of mean values from large to small. Within the same sex, values with the same superscript letters mean non-significant difference(P> 0.05), values with the same superscript letters are significantly different (P< 0.05). Compared with the females of the same age,△P< 0.05,△△P< 0.01. The same below.

表2　4周、20周、25周和40周SJ5-SPF雞血液生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果(n=20)

3.2　血液生化指標(biāo)

血液是構(gòu)成有機(jī)體內(nèi)環(huán)境的重要組成部分，內(nèi)環(huán)境的變化可導(dǎo)致血液組成成分或性質(zhì)發(fā)生特征性的變化[16]。堿性磷酸酶(ALP)在成骨過(guò)程中起一定作用，根據(jù)胡雄飛[17]研究顯示4周齡SD大鼠ALP含量顯著高于其余三個(gè)周齡，本文SJ5-SPF雞血清ALP與上述SD大鼠的研究結(jié)果一致，即4周齡也同樣高于其它三個(gè)周齡，SD大鼠屬于哺乳類(lèi)，而SPF雞屬于鳥(niǎo)類(lèi)，二者之所以相同，是由ALP的作用決定的，研究表明，血清中的ALP主要由成骨細(xì)胞和肝臟合成分泌，是反映骨代謝的重要指標(biāo)。在骨代謝旺盛時(shí)，成骨細(xì)胞活躍，ALP 分泌量增加，存在于成骨細(xì)胞的周?chē)捌浔砻妫瑯O易釋入血中，出現(xiàn)血清ALP 活性上升。ALP在成骨過(guò)程中水解磷酸酯，為羥磷灰石的沉積提供必需的磷酸，同時(shí)水解焦磷酸鹽，解除其對(duì)骨礦物質(zhì)形成的抑制作用，在骨骼鈣化中起關(guān)鍵作用，故未成熟動(dòng)物的血清ALP活性較成熟動(dòng)物高[18]，又有文獻(xiàn)報(bào)道[19]，SD大鼠性成熟期為出生后60 d左右(即8周許)，而SJ5-SPF雞性成熟期大約為20周左右，因此4周齡無(wú)論對(duì)于SD大鼠還是SJ5-SPF雞都屬于幼年期，也就是未成年期，此期骨代謝旺盛，成骨細(xì)胞活躍，ALP分泌量增加。

谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)主要來(lái)源于肝臟，GGT增高通常反映肝臟脂肪的沉積和內(nèi)臟性肥胖[20]。文中數(shù)據(jù)顯示40周齡SJ5-SPF雞GGT雄性值顯著高于雌性，與成年的四川白兔GGT雄性高于雌性的研究結(jié)果一致[21]，說(shuō)明雄性肝臟分泌谷氨酰轉(zhuǎn)移酶的能力較雌性強(qiáng)。

谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)是存在于動(dòng)物肝細(xì)胞中催化氨基酸與酮酸之間氨基轉(zhuǎn)移的一類(lèi)酶，在氨基酸的分解和合成中起重要作用，本研究測(cè)得40周齡SJ5-SPF雞的谷草轉(zhuǎn)氨酶含量雌、雄之間存在差異，即雄性高于雌性，這與成年徐海雞[2]的報(bào)道一致。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)雖然存在于許多組織中，但臨床上主要作為肝功能的診斷指標(biāo)。ALT主要存在于肝細(xì)胞漿內(nèi)，催化L-丙氨酸和α-同戊二酸二者之間可逆的氨基轉(zhuǎn)換，在糖異生及氨基酸代謝中有主要作用。本研究表明SJ5-SPF雞ALT肝酶與糖代謝水平的相關(guān)性研究在4個(gè)周齡差異無(wú)顯著性與梅里斯山羊的孕期、哺乳期及不同生理狀態(tài)下差異無(wú)顯著性的研究結(jié)果一致[22]。說(shuō)明這兩個(gè)物種在不同周齡以及不同生理狀態(tài)下氨基酸的代謝水平相當(dāng)。

乳酸脫氫酶(LDH)是糖無(wú)氧酵解及糖異生的重要酶系之一。根據(jù)Akrami等[14]研究發(fā)現(xiàn)，4個(gè)年齡段的鱘魚(yú)乳酸脫氫酶測(cè)量值雌性均高于雄性，而4個(gè)周齡的SJ5-SPF雞乳酸脫氫酶測(cè)量值雄性均高于雌性。這說(shuō)明鱘魚(yú)雄性體內(nèi)糖的分解代謝以有氧分解為主，而SJ5-SPF雞則與此相反，即雌性體內(nèi)糖的分解以有氧代謝為主，上述兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雌、雄間與乳酸脫氫酶相關(guān)的分解代謝能力存在一定差別，差別的原因還有待于進(jìn)一步探討。

根據(jù)SPF級(jí)SD大鼠的研究結(jié)果[11]表明總蛋白含量最高的時(shí)期是24周，而本研究所顯示SJ5-SPF雞數(shù)據(jù)總蛋白含量最高在40周，這可能與不同種類(lèi)動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需求及物質(zhì)代謝能力有關(guān)。本研究結(jié)果表明，20周、25周SJ5-SPF雄雞白蛋白和球蛋白均顯著或極顯著低于雌雞，這與紅腹錦雞[23]、鹽津?yàn)豕请u[5]、灰胸竹雞[4]的研究結(jié)果一致，在一定程度上，反映了雌、雄雞之間肝臟等臟器的代謝情況。

25周SJ5-SPF雞的總膽紅素測(cè)量值比成年的暗腹雪雞和海蘭褐雞[24]低，直接膽紅素值比暗腹雪雞和海蘭褐雞的高，由此可得出SJ5-SPF雞間接膽紅素含量比暗腹雪雞、海蘭褐雞含量低。

本研究測(cè)得的20周、25周、40周SJ5-SPF雞的葡萄糖含量雌、雄間差異無(wú)顯著性，這與白腹錦雞[25]研究結(jié)果一致，與成體鹽津?yàn)豕请u[5]、拉薩白雞[26]中雄雞葡萄糖含量顯著大于雌雞的研究結(jié)果不同。

膽固醇在體內(nèi)的主要生理作用是形成膽酸、構(gòu)成細(xì)胞膜、合成激素，甘油三酯含量的高低反映了脂類(lèi)的吸收和代謝狀況。本研究表明25周和40周的膽固醇、甘油三酯2項(xiàng)指標(biāo)雌、雄間差異有顯著性，且雌性大于雄性，這與鹽津?yàn)豕请u[5]、白腹錦雞[25]研究結(jié)果一致，其原因可能與母雞產(chǎn)蛋的蛋黃中膽固醇含量高和公雞的脂肪分解能力較強(qiáng)在體內(nèi)沉積較少有關(guān)。

血液中肌酐是肌肉代謝的產(chǎn)物，本實(shí)驗(yàn)測(cè)得25周和40周SJ5-SPF雄雞肌酐含量低于雌雞，這與成體鹽津?yàn)豕请u[5]、白腹錦雞[25]的研究結(jié)果不一致，其差異產(chǎn)生的原因可能與雞的品種有關(guān)。40周SJ5-SPF雞的尿素氮雌、雄間差異有顯著性，且雌雞高于雄雞，這與成體紅腹錦雞[23]的研究結(jié)果相同，這說(shuō)明禽類(lèi)物種在血液的生化指標(biāo)上具有一定的相似性。

Ca2+、Na+、K+等離子的濃度對(duì)判斷體內(nèi)滲透壓、血液pH、肌肉的正常興奮性等都具有重要作用[21]。SJ5-SPF雞的K+含量在4個(gè)周齡中雌、雄之間差異有顯著性，Ca2+在4、25和40周齡中雌雄之間差異有顯著性，Na+只在4周齡間差異有顯著性。其原因可能與不同年齡、性別動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需求及物質(zhì)代謝能力有關(guān)。

綜上所述，SJ5-SPF雞不同周齡的常用生理參數(shù)以及血液生化的各種指標(biāo)與年齡和性別都有關(guān)，通過(guò)對(duì)SJ5-SPF雞在不同周齡以及同周齡不同性別生理參數(shù)以及血液生化各項(xiàng)指標(biāo)的正常值的測(cè)定，為使用SPF級(jí)禽類(lèi)實(shí)驗(yàn)研究的科研工作者提供重要的參考數(shù)據(jù)，同時(shí)也為國(guó)家禽類(lèi)數(shù)據(jù)庫(kù)的建立補(bǔ)充資料。