陳艷昕，劉慶濱，黃江梅，周穎，肖芳

(河北秦皇島市第一醫(yī)院,a 病理科，b 普外科，066000)

·論著·

雙向調(diào)節(jié)蛋白、轉(zhuǎn)錄因子E2啟動(dòng)子結(jié)合因子1、白細(xì)胞介素6的表達(dá)與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性

陳艷昕a，劉慶濱b，黃江梅a，周穎a，肖芳a

(河北秦皇島市第一醫(yī)院,a 病理科，b 普外科，066000)

[摘要]目的觀察結(jié)直腸癌患者的雙向調(diào)節(jié)蛋白(AREG)、轉(zhuǎn)錄因子E2啟動(dòng)子結(jié)合因子1(E2F-1)、白細(xì)胞介素6(IL-6)的表達(dá)情況，并分析其臨床意義。方法選取在住院接受治療的結(jié)直腸癌患者為研究對(duì)象，同時(shí)選取同期住院接受治療的結(jié)腸息肉患者作為對(duì)照。觀察兩組患者AREG、轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、IL-6的表達(dá)，比較不同臨床病理特征結(jié)直腸癌患者的AREG、轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、IL-6的表達(dá)，分析影響AREG、轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、IL-6表達(dá)的因素。結(jié)果結(jié)直腸癌患者的AREG、IL-6水平，轉(zhuǎn)錄因子E2F-1陽性表達(dá)率高于結(jié)直腸息肉組；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分型為黏液腺癌、TNM分期為Ⅲ期+Ⅳ期的結(jié)直腸癌患者的AREG、IL-6水平，轉(zhuǎn)錄因子E2F-1陽性表達(dá)率較高；回歸分析結(jié)果顯示組織學(xué)分型和TNM分期是影響表達(dá)的因素。結(jié)論結(jié)直腸癌患者的AREG、IL-6水平，轉(zhuǎn)錄因子E2F-1陽性表達(dá)率較高，相關(guān)因子的表達(dá)與結(jié)直腸癌的組織學(xué)分型和TNM分期具有一定的相關(guān)性。

[關(guān)鍵詞]結(jié)直腸癌；雙向調(diào)節(jié)蛋白；E2F1轉(zhuǎn)錄因子；白細(xì)胞介素6

結(jié)直腸癌(CRC)發(fā)病率高、死亡率逐年上升，是目前世界上最常見的惡性腫瘤之一[1]，根據(jù)世界癌癥組織數(shù)據(jù)顯示2017年結(jié)直腸癌的新發(fā)病例達(dá)到132 700例，其中70 080例是男性患者，是男性第五大常見惡性腫瘤，女性患者有62 620例，同樣也是女性第三大常見惡性腫瘤，是世界第四大常見惡性腫瘤之一[2-4]。我國(guó)結(jié)直腸癌的病死率約為11.11/10萬，占全國(guó)惡性腫瘤病死率的第5位[5]。由于結(jié)直腸癌傳統(tǒng)手術(shù)治療難以達(dá)到徹底根治的效果，且患者術(shù)后生存率比較低，嚴(yán)重地威脅到了患者的生活質(zhì)量，分子生物學(xué)研究為結(jié)直腸癌的治療提供了新的途徑，為此本文從分子生物學(xué)水平來探究結(jié)直腸癌發(fā)病機(jī)制，觀察結(jié)直腸癌患者的雙向調(diào)節(jié)蛋白(AREG)、轉(zhuǎn)錄因子E2啟動(dòng)子結(jié)合因子1(E2F-1)、白細(xì)胞介素6(IL-6)的表達(dá)情況，并分析其臨床意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2015年8月至2017年7月在我院接受治療的結(jié)直腸癌患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡≥18周歲；(2)通過腸鏡檢查確診為結(jié)直腸癌；(3)無其他部位原發(fā)腫瘤者；排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床資料不全者；(2)合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入研究對(duì)象250例，其中直腸癌者110例，左、右半結(jié)腸及乙狀結(jié)腸癌140例；男150例，女100例，年齡范圍52～78歲，年齡(65.3±6.3)歲；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者88例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者162例；組織學(xué)分型：管腺癌155例，黏液腺癌95例；TNM分期：Ⅰ期+Ⅱ期150例，Ⅲ期+Ⅳ期100例；腫瘤大?。?5 cm為165例，≥5 cm為85例。選取同期在我院接受治療的結(jié)腸息肉患者作為對(duì)照，納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18歲且無腫瘤疾病者，共納入250例，男145例，女105例；年齡范圍54～75歲，年齡(65.4±5.4)歲。本項(xiàng)研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)評(píng)審?fù)ㄟ^，且參與本項(xiàng)研究的患者均簽署知情同意書。

1.2 方法 進(jìn)行血樣采集，提前叮囑患者空腹8 h以上，次日清晨使用一次性真空干燥采血管采取兩組患者靜脈血3 mL，在4 ℃冰箱內(nèi)自然沉降過夜，次日3000 g，離心15 min，吸取上清，置于-80 ℃冰箱內(nèi)保存。

使用ELISA方法檢測(cè)兩組患者血清中AREG和轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、IL-6的表達(dá)，嚴(yán)格按照AREG、E2F-1、IL-6檢測(cè)試劑盒(武漢博士德生物技術(shù)有限公司)的說明書進(jìn)行操作。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者AREG、轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、IL-6表達(dá)情況的比較 結(jié)直腸癌患者的AREG、IL-6水平，轉(zhuǎn)錄因子E2F-1陽性表達(dá)率高于結(jié)直腸息肉組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 兩組患者AREG、轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、IL-6表達(dá)情況的比較

注：AREG為雙向調(diào)節(jié)蛋白，E2F-1為E2啟動(dòng)子結(jié)合因子1，IL-6為白細(xì)胞介素6，下表同

2.2 不同臨床病理特征的患者AREG、轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、IL-6表達(dá)情況的比較有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分型為黏液腺癌、TNM分期為Ⅲ期+Ⅳ期的結(jié)直腸癌患者的AREG、IL-6水平，轉(zhuǎn)錄因子E2F-1陽性表達(dá)率較高。見表2。

2.3 影響結(jié)直腸癌患者AREG、轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、IL-6表達(dá)的因素 將單因素分析有意義的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、組織學(xué)分型和TNM分期作為因變量，將結(jié)直腸癌患者AREG、IL-6水平，轉(zhuǎn)錄因子E2F-1陽性表達(dá)作為自變量，進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示組織學(xué)分型和TNM分期是影響表達(dá)的因素。見表3～5。

表3 結(jié)直腸癌患者AREG表達(dá)的影響因素分析

表4 結(jié)直腸癌患者E2F-1表達(dá)的影響因素分析

表2 不同臨床病理特征的患者AREG、轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、IL-6表達(dá)情況的比較

表5 結(jié)直腸癌患者IL-6表達(dá)的影響因素分析

3 討論

結(jié)直腸癌(結(jié)腸癌和直腸癌)是胃腸道中最常見的惡性腫瘤之一[6]，早期癥狀不明顯，隨著疾病的發(fā)展，患者將合并腹瀉、便秘、便血等癥狀，還可能出現(xiàn)腹痛、晚期貧血、體質(zhì)量減輕等局部癥狀。結(jié)直腸癌發(fā)病率和致死率僅次于胃癌、食管癌和原發(fā)性肝癌[7]。結(jié)腸直腸癌的發(fā)生與基因、飲食、家族病史、吸煙、喝酒等因素有關(guān)，現(xiàn)代人飲食有許多偏向低纖高脂的精致飲食，以致結(jié)腸直腸癌的發(fā)病率逐年提高。由于近年來分子遺傳學(xué)理論的不斷發(fā)展以及分子生物學(xué)診斷水平的提高，人們對(duì)結(jié)直腸癌有了新的認(rèn)識(shí)，臨床開始從DNA突變、染色體異常，癌基因的激活、抑癌基因失去功能等方向探究結(jié)直腸癌的致病機(jī)理[8-9]。本組研究將選用AREG、E2F-1、IL-6等細(xì)胞因子來探究結(jié)直腸癌的可能致病機(jī)理。

微效基因AREG 是一種位于人的4號(hào)染色體的長(zhǎng)臂上具有雙功能生長(zhǎng)調(diào)節(jié)作用的糖蛋白，具有激活成纖維細(xì)胞的增殖，抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤和其他腺瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)等功能[10]。其功能主要表現(xiàn)為編碼雙調(diào)蛋白，屬于表皮生長(zhǎng)因子EGF家族成員之一[11-13]?，F(xiàn)已證明，AREG基因在正常組織中不表達(dá)或者微量表達(dá)，但在癌組織中是高表達(dá)的[14]。有文獻(xiàn)[15]報(bào)道，AREG基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞的增殖有雙向調(diào)節(jié)作用，但是目前還未見有文獻(xiàn)報(bào)道AREG 基因的表達(dá)與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展有直接關(guān)系。

轉(zhuǎn)錄因子E2F-1是細(xì)胞周期轉(zhuǎn)錄因子E2F的家族成員之一，它能參與多種病理、生理過程的調(diào)節(jié)。同時(shí)該物質(zhì)還具有癌基因和抑癌基因的功能。在直腸癌的診斷中具有很重要的指導(dǎo)作用。IL-6是一種細(xì)胞因子，屬于白細(xì)胞介素的一種，它的靶細(xì)胞種類多樣，它能調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化,在機(jī)體的抗感染免疫反應(yīng)中有重要的作用。本研究通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)AREG、轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、IL-6的表達(dá)水平可有效反映出結(jié)直腸癌患者進(jìn)展情況，同時(shí)還可提示患者預(yù)后，或可作為結(jié)直腸癌進(jìn)展及預(yù)后評(píng)估指標(biāo)。

本次對(duì)于分子生物學(xué)相關(guān)指標(biāo)的研究，具有下列幾個(gè)方面的重要意義：(1)能夠?yàn)榻Y(jié)直腸癌的診斷學(xué)的提供新的研究方向；(2)能夠?yàn)榻Y(jié)直腸癌的發(fā)病原因的研究提供基礎(chǔ)，并為后續(xù)臨床藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)提供治療靶點(diǎn)。因此本文選取我院收治的結(jié)直腸癌患者作為研究對(duì)象進(jìn)行深入性探究，對(duì)照組采用結(jié)腸息肉患者，檢查兩組患者的分子生物學(xué)相關(guān)指標(biāo)，結(jié)直腸癌患者的AREG、IL-6水平，轉(zhuǎn)錄因子E2F-1陽性表達(dá)率高于結(jié)直腸息肉組；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分型為黏液腺癌、TNM分期為Ⅲ期+Ⅳ期的結(jié)直腸癌患者的AREG、IL-6水平，轉(zhuǎn)錄因子E2F-1陽性表達(dá)率較高；將單因素分析有意義的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、組織學(xué)分型和TNM分期作為因變量，將結(jié)直腸癌患者AREG、IL-6水平，轉(zhuǎn)錄因子E2F-1陽性表達(dá)作為自變量，進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示組織學(xué)分型和TNM分期是影響表達(dá)的因素。本研究還發(fā)現(xiàn)AREG、轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、IL-6的表達(dá)水平與結(jié)直腸癌具有一定的相關(guān)性。

本研究的創(chuàng)新性在于深入研究了患者體內(nèi)AREG、轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、IL-6的表達(dá)水平在結(jié)直腸癌患者中的變化，具有非常重要的臨床意義。綜上所述，結(jié)直腸癌患者的AREG、轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、IL-6的表達(dá)水平較健康人群顯著地升高，在結(jié)直腸癌的診斷中提供了很好的研究方向。

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ThecorrelationbetweentheexpressionofAREG,transcriptionfactorE2F-1andIL-6andthedevelopmentofcolorectalcancer

ChenYanxin*，LiuQingbin，HuangJiangmei，ZhouYing，XiaoFang

(*DepartmentofPathology,QinhuangdaoFirstHospital,Qinhuangdao066000,China)

[Abstract]ObjectiveTo observe the expression of Two way regulatory protein (amphiregulin,AREG),transcription factor E2 promoter binding factor 1 (E2F-1),interleukin -6 (IL-6).in patients with colorectal cancer and to analyze its clinical significance.MethodsThe patients with colorectal cancer who were treated in our hospital from August 2015 to July in 2017 were selected as the subjects.Meanwhile,the patients with colon polyps who were treated in our hospital during the same period were selected as the control group.The expressions of AREG,transcription factor E2F-1 and IL-6 in two groups were observed.The expressions of AREG,transcription factor E2F-1 and IL-6 in different clinicopathological characteristics were compared,and the factors influencing AREG,transcription factor E2F-1 and IL-6 expression were analyzed.ResultsThe AREG and IL-6 levels of colorectal cancer patients and the positive expression rate of transcription factor E2F-1 were higher than those in the colorectal polyp group.The AREG and IL-6 levels of colorectal cancer patients with lymph node metastasis and histological type were mucinous adenocarcinoma and stage TNM stage Ⅲ+Ⅳ.The positive rate of transcription factor E2F-1 was high.The single factor analysis showed lymph node metastasis,histological type and TNM stage were the dependent variable,the AREG and IL-6 levels in patients with colorectal cancer,the positive expression of transcription factor E2F-1 as independent variables.Regression analysis showed that the histological type and TNM stage were the factors affecting the expression.ConclusionThe AREG and IL-6 levels of colorectal cancer patients,the positive expression rate of transcription factor E2F-1 are higher,and the histological and TNM stages are the factors that affect the expression level.

[Keywords]Colorectal neoplasms；amphiregulin；E2F1 transcription factor；Interleukin-6

中圖分類號(hào)：R735.3

A

10.3969/J.issn.1672-6790.2018.03.008

基金項(xiàng)目：河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(20171258)

作者簡(jiǎn)介：陳艷昕，副主任醫(yī)師，Email:yanxinchen2012@163.com

2018-04-12)