華芳

摘 要：從本地疑似感染豬傳染性胸膜肺炎病豬處進行材料收集，然后在巧克力瓊脂平板上進行分離培養(yǎng)，最后得到三株細菌，將其分別命名為X-1、X-2、X-3。對相應(yīng)的細菌依次進行生化特征檢測、衛(wèi)星生長現(xiàn)象分析、尿素酶實驗鑒定、CAMP試驗，其均表現(xiàn)出豬胸膜肺炎放線桿菌的典型癥狀。藥敏試驗結(jié)果為分離菌株對硫酸慶大霉素、四環(huán)素、氨芐西林、諾氟沙星具有高度敏感性。

關(guān)鍵詞：豬傳染性胸膜肺炎；豬胸膜肺炎放線桿菌；分離鑒定

豬傳染性胸膜肺炎具有一定的散發(fā)性，常發(fā)生于仔豬斷奶期間，會降低仔豬免疫力，進而導(dǎo)致仔豬敗血癥等病癥，極大地增加了仔豬死亡率。對于成年種豬而言，其在感染豬胸膜肺炎放線桿菌之后會表現(xiàn)出關(guān)節(jié)炎、肺炎、體溫上升、食欲下降等情況，甚至引發(fā)心內(nèi)膜炎、腎炎等其他病癥，甚至死亡。

一、材料與方法

1.材料制作

本文所使用的巧克力瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、鮮血瓊脂平板、普通瓊脂平板均為實驗室自行制作；而藥敏紙片、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸均來自杭州某公司。肺臟病變組織及扁桃體樣本采自某規(guī)模養(yǎng)豬場，此規(guī)模養(yǎng)豬場內(nèi)病豬具有典型呼吸道疾病病癥。實驗動物為18g左右的小白鼠，均采購于當(dāng)?shù)貙嶒瀯游餀C構(gòu)。

2.方法實施

本次實驗主要包括細菌分離培養(yǎng)、細菌鑒定兩個環(huán)節(jié)。其中細菌分離培養(yǎng)需要將肺門淋巴結(jié)、肺組織、氣管等組織器官無菌取樣，并依次接種在所制作的巧克力瓊脂平板上，在接種完畢之后利用雞表皮葡萄球菌進行十字化線，最后在8%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)， 36.5℃，培養(yǎng)36小時。

細菌鑒定工作首先選擇巧克力瓊脂平板上的單一可疑菌落，在依次進行涂片、革蘭氏染色后進行鏡檢觀察細菌狀態(tài)；其次依次將所得到的細菌接種在鮮血瓊脂平板、普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板上，在36.5℃的二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)36小時；再次將1%血紅素作為X因子、1%NAD作為Y因子，進行無菌涂片工作并將其涂布在普通培養(yǎng)基培養(yǎng)；最后依照相關(guān)規(guī)定對其進行尿素酶、衛(wèi)星現(xiàn)象、糖發(fā)酵等生化特性檢驗。然后利用改良后的培養(yǎng)菌液進行動物回歸試驗。

二、結(jié)果分析

1.癥狀及分離結(jié)果

養(yǎng)豬場內(nèi)病豬均出現(xiàn)典型的呼吸道癥狀，并伴隨有體溫升高、消瘦、咳嗽等現(xiàn)象，同時解剖檢驗發(fā)現(xiàn)個別樣本病豬出現(xiàn)肺臟、胸腔粘連出血情況，且肺臟內(nèi)部具有纖維素性物質(zhì)滲出。細菌分離培養(yǎng)過程中均出現(xiàn)相同癥狀的β-溶血性細菌。

2.分離菌株染色及培養(yǎng)特性

革蘭染色、鏡檢過程中觀察到分離菌株為桿狀、兩端橢圓、有短連、雙連、單一等不同的活動形式，極少部分細菌成長絲形狀。通過分離菌株在普通瓊脂、巧克力瓊脂、鮮血等培養(yǎng)基內(nèi)生長的情況對比分析發(fā)現(xiàn)其為兼性厭氧菌。其中分離菌株在巧克力瓊脂及鮮血瓊脂培養(yǎng)基上呈現(xiàn)β-溶血性，且具有良好的生長狀態(tài)；分離菌株在巧克力瓊脂平板生長菌落成直徑為0.9毫米的半透明狀圓形，該菌株整體呈碧綠色，且菌落邊緣較整齊，鏡檢后得出其為革蘭氏陰性球桿菌；分離菌株在普通瓊脂培養(yǎng)基上逐漸形成部分隆起、具有一定濕潤度的灰白狀菌落，菌落整體呈直徑為0.6毫米左右的圓形。在初次分離后分離菌落在鮮血培養(yǎng)基內(nèi)生長態(tài)勢較好，且由以往的嵌入式生長轉(zhuǎn)化為緩慢隆起狀生長。在化有雞表皮葡萄桿菌交叉接種后，可得出分離菌株在相應(yīng)的巧克力瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)呈現(xiàn)衛(wèi)星現(xiàn)象，隨后綜合采用Y因子、X因子濾片培養(yǎng)后得出Y因子為此菌株生長必備條件。

3.生化試驗及藥物敏感性試驗

經(jīng)過分離菌株糖發(fā)酵實驗得出分離菌株可發(fā)酵甘露醇、乳糖、葡糖糖、麥芽糖、阿拉伯糖等糖類；而在尿素酶實驗中得出分離菌株呈陽性反應(yīng)。在藥物敏感性實驗中得出分離菌株均對四環(huán)素、諾氟沙星、氨芐西林等多西環(huán)素程序高度敏感性。此外在動物回歸實驗中發(fā)現(xiàn)在感染分離菌株后，小鼠均在24小時內(nèi)死亡，而通過在死亡小白鼠體內(nèi)分離到相同生長特性的菌株后滅活培養(yǎng)，然后對照組部分小白鼠接種滅活疫苗之后其呼吸道癥狀疫病逐漸減輕，隨后在一段時期連續(xù)接種之后發(fā)現(xiàn)其抗原水平明顯下降。

通過對某地規(guī)模養(yǎng)豬場收集的病豬樣本進行細菌分離培養(yǎng)，將相關(guān)試樣可得所分離得到的細菌培養(yǎng)性質(zhì)與豬胸膜肺炎放線桿菌具有一致的生化特性。然后結(jié)合病菌致病性、流行病理論等因素可得出該分離均為豬胸膜肺炎放線桿菌，豬胸膜肺炎放線桿菌血清型較復(fù)雜，對于血清型交叉防疫工作進行提出了一定的困難，在實驗結(jié)束后中對病豬肺臟纖維性滲出液進行了進一步分離培養(yǎng)實驗，然后得出其內(nèi)部含有多種病菌，如化膿棒狀桿菌、大腸桿菌、副豬嗜血桿菌等，這些病菌不僅可以引起豬纖維素性胸膜炎，甚至?xí)?dǎo)致豬心包炎等病癥的發(fā)生，而本文經(jīng)過動物回歸試驗有針對性的制備了相關(guān)的疫苗接種措施，取得了良好的實驗效果。

三、結(jié)語

綜上所述，豬胸膜肺炎放線桿菌在感染豬后會直接導(dǎo)致豬傳染性胸膜肺炎的產(chǎn)生，豬胸膜肺炎是一種嚴(yán)重的呼吸道疾病，不僅傳染速率較快，而且感染會在較短的時間內(nèi)促使仔豬死亡，再加上其與豬鏈球菌、豬瘟等病菌的聯(lián)合作用，促使養(yǎng)殖場內(nèi)豬的死亡率極大提升，對規(guī)模養(yǎng)豬行業(yè)造成了極大的經(jīng)濟損害，因此在種豬發(fā)病之初應(yīng)及時送交相關(guān)檢測機構(gòu)鑒別分析，在確定病癥的第一時間進行防疫治療，降低豬胸膜肺炎放線桿菌的危害程度。

參考文獻：

[1]張飛， 鄭培， 曹劍，等. 豬胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定及致病性研究[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī)， 2016（3）：151-154.

[2]車勇良， 陳如敬， 吳學(xué)敏，等. 豬胸膜肺炎放線桿菌的分離鑒定及藥敏試驗[J]. 養(yǎng)豬， 2016（6）：102-104.