劉中雙

(朝陽縣東大屯鄉(xiāng)林業(yè)工作站，遼寧 朝陽 122608)

黑枸杞(LyciumruthenicmLurr)屬茄科枸杞屬，是一種具有重要藥用保健價值的棘刺灌木，野生資源多散布于柴達(dá)木盆地的格爾木、德令哈、都蘭等地區(qū)的戈壁灘上。黑枸杞的漿果具有良好的藥用價值和保健價值，經(jīng)測定，黑枸杞果實中的總糖含量為6.9%，總酸含量為0.74%。此外黑枸杞中還檢測出了人體所必須的17種氨基酸，以及豐富的微量元素。據(jù)中醫(yī)文獻(xiàn)報道，黑枸杞味甘、性平，具有抗衰老、清心熱，改善睡眠、美容養(yǎng)顏等眾多作用[1]。隨著人們對其保健價值研究的深入，近年來黑枸杞越來越受到廣大消費者的青睞，栽培面積也迅速擴大。為了盡快培育出大量遺傳性狀完全一致的黑枸杞優(yōu)良種苗，我們研究了黑枸杞組培育苗技術(shù)，研究結(jié)果介紹如下：

1 材料與方法

1.1 試驗材料

6月份，取黑枸杞當(dāng)年萌發(fā)的新枝腋芽為外植體。

1.2 外植體消毒

剪取生長健壯的1年生黑枸杞枝條，在室內(nèi)除去葉片后剪成約8 cm長的莖段，用洗滌靈水輕輕洗刷表面，注意不要破壞腋芽，洗刷完成后置于流動水下沖洗干凈，然后在無菌條件下進(jìn)行以下操作：(1)用75%酒精浸泡30s，用無菌水沖洗2遍；(2)用0.1%升汞溶液浸泡8min，用無菌水沖洗3遍后備用[2]。

1.3 培養(yǎng)條件

外植體的腋芽誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)都在培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行，室內(nèi)溫度白天控制在25±2℃，夜間溫度為23±2℃，光照時間為16 h/d，光強2000～2500 lx。誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)階段以MS為基本培養(yǎng)基，加入35.0g/L蔗糖、8.0g/L瓊脂、pH值為5.6～5.8。生根培養(yǎng)階段以1/2MS為基本培養(yǎng)基，其他條件不變[3]。

1.4 誘導(dǎo)培養(yǎng)試驗

以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同質(zhì)量濃度的激素(BA、IBA及NAA)配制12個配方的誘導(dǎo)培養(yǎng)基(表1)。在無菌環(huán)境中將消毒后的外植體切取腋芽，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每個配方接種50瓶，每瓶1個外植體，20d后統(tǒng)計其萌芽率，40d后統(tǒng)計腋芽生長高度。

表1 誘導(dǎo)培養(yǎng)基不同激素濃度配比表 mg·L-1

1.5 增殖培養(yǎng)試驗

待腋芽長到1.0cm以上時，將其從基部剪開，剪成1.0～2.0cm的單株小芽，轉(zhuǎn)接到以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同質(zhì)量濃度的激素(BA、IBA)配制的9個配方的增殖培養(yǎng)基上(表2)。每個組合接種50瓶，每瓶1個嫩芽，40d后統(tǒng)計其增殖率。

表2 增殖培養(yǎng)基不同激素濃度配比表 mg·L-1

1.6 生根培養(yǎng)試驗

剪取3 cm以上的健壯增殖芽，接種到以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，添加不同質(zhì)量濃度的激素(NAA、IBA)配制的4個配方的生根培養(yǎng)基上(表3)進(jìn)行生根培養(yǎng)。每個處理接種10瓶，每瓶接種5株試管苗。接種30d后統(tǒng)計生根率及根長。

表3 生根培養(yǎng)基不同激素濃度配比表 mg·L-1

2 結(jié)果與分析

2.1 誘導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇

表4 不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基組合對黑枸杞腋芽誘導(dǎo)的影響

外植體接種7d后腋芽開始萌發(fā)，約15d后陸續(xù)長成綠色新芽。不同的培養(yǎng)基激素組合對外植體腋芽誘導(dǎo)萌芽率及芽生長狀況的影響均較大。生產(chǎn)實踐中我們既要考慮萌芽率，也要兼顧考慮芽的生長狀況。從表4可以看出，4號培養(yǎng)基誘導(dǎo)萌芽率最高，芽生長狀況也相對較好，其次是3號培養(yǎng)基。兩個培養(yǎng)基上成活的芽均能夠達(dá)到增至培養(yǎng)的要求。而添加NAA的培養(yǎng)基，不但萌芽率低，而且基部愈傷組織過大，芽生長不良。因此用于黑枸杞腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基配方為MS+ BA1.0 mg/L+IBA 0.8 mg/L。

2.2 增殖培養(yǎng)基的選擇

新芽接入增殖培養(yǎng)基后，經(jīng)過約20d培養(yǎng)，底部愈傷組織開始有增殖芽出現(xiàn)，40d后，調(diào)查有效增殖芽數(shù)(高1.0cm以上增殖芽為有效)。表5表明，隨著BA濃度的增加，黑枸杞組培苗的增殖倍數(shù)也隨之增加，但是當(dāng)BA達(dá)到2.4mg/L的時候，組培苗基部愈傷組織異常增大，伴隨出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，影響了組培苗的正常增殖，導(dǎo)致無效增殖芽過多，有效芽減少。由表5可以看出，增殖培養(yǎng)過程中最佳培養(yǎng)基是MS+BA 1.6mg/L+IBA 0.10mg/L。此狀態(tài)下黑枸杞有效增殖芽多且生長健壯。

表5 不同增殖培養(yǎng)基對黑枸杞組培苗增殖的影響

2.3 生根培養(yǎng)基的選擇

黑枸杞組培苗接入生根培養(yǎng)基約15d后芽基部開始有白色根長出，30d后統(tǒng)計生根率。每株組培苗的所有根總長超過2.0cm，即為合格生根苗。理想的生根苗應(yīng)有超過3條根，每條根長度在1.0cm以上，3.0cm以下，過長則移栽過程中易斷裂，進(jìn)而影響移栽成活率。從下表6可以看出，兩種激素配合使用具有協(xié)同作用，不但生根率高，而且單株組培苗的生根數(shù)量也多。因此黑枸杞最適生根培養(yǎng)基配方為1/2MS+NAA 0.2mg/L +IBA 0.6mg/L。

表6 不同生長素配比對黑枸杞組培苗生根的影響

3 結(jié)論

以黑枸杞當(dāng)年生枝條腋芽為外植體，研究了外植體誘導(dǎo)、增殖及生根階段的最佳培養(yǎng)條件。通過研究，找出了黑枸杞組培育苗各個過程的最佳培養(yǎng)基配方，使黑枸杞組培苗外植體的誘導(dǎo)率達(dá)到了78%，有效芽增殖倍數(shù)可達(dá)到6.32倍，生根率達(dá)到92%以上。形成了較為完備的組培工廠化育苗技術(shù)，為黑枸杞良種苗木的大規(guī)模工廠化生產(chǎn)奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。

[1]楊斌，王向未. 黑枸杞及其功能性成分在食品工業(yè)中的應(yīng)用及開發(fā)進(jìn)展[J].輕工科技，2014(10)：22-23.

[2]王艷輝，劉麗霞. 金葉復(fù)葉槭組培技術(shù)研究[J].遼寧林業(yè)科技，2014(04)：44-45.

[3]溫福欣.日本小菊組培技術(shù)的研究[J].中國林副特產(chǎn)，2017(04)：51-53.