賴玉玲，黃麗芳，馬美春，吳麗娜

(韶關(guān)市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 韶關(guān) 512000)

地貧也就是地中海貧血，主要是因?yàn)闄C(jī)體珠蛋白基因合成出現(xiàn)障礙，發(fā)生突變以及缺乏等情況，使得機(jī)體珠蛋白肽鏈合成無法平衡，導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生溶血性貧血[1]。地中海貧血具體有多種類型，其中β－地中海貧血以及α－地中海貧血的發(fā)生率最高。但是很多地中海貧血患者只是攜帶了地中海貧血基因，并沒有表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，所以當(dāng)前地中海貧血的發(fā)生率不斷提高[2]。因此做好地中海貧血基因型的篩查以及人口結(jié)構(gòu)的篩查對于地中海貧血的早期預(yù)防具有重要意義。

1 資料、方法

1.1 基本資料 在2014年12月－2016年11月中選取我院200例疑診為地貧的孕前女性進(jìn)行研究，全部患者都為通過血常規(guī)和血紅蛋白電泳篩查出的陽性標(biāo)本。全部患者年齡最小22歲，年齡最大 37 歲，平均年齡（28.2±4.3）歲。

1.2 方法

1.2.1 提取 DNA ⑴將抗凝全血100μl以及 W 裂紅液800μl放在1.5ml離心管中，完全混合均勻，放在室溫下 2～3min，在8000r/min速度下進(jìn)行2min的離心處理，除去上清，將管底沉淀物保留好。⑵將完全混勻后的W變性液B250μl和W變性液A10μl完全混合均勻，放在室溫下5min，在8000r/min速度下進(jìn)行5sn的離心處理，除去上清，在吸水紙上倒置離心管一會，將管底沉淀保留好。⑶先后將W洗滌液1、W洗滌液2、無水乙醇各800μl加入沉淀中，利用漩渦振蕩器完全懸浮沉淀，在8000r/min速度下進(jìn)行5sn的離心處理，除去上清，在吸水紙上倒置離心管一會，將管底沉淀保留好。⑷在真空旋轉(zhuǎn)干燥儀放入沉淀，在60℃溫度下進(jìn)行10min的干燥，等到沉淀徹底干燥形成白色粉末后將W溶解液100μl加入其中，完全混勻，在60℃溫度下進(jìn)行10min的保溫，在8000r/min速度下進(jìn)行5sn的離心處理，選取上清液做成PCR模版。

1.2.2 基因診斷 選擇深圳亞能生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的地中海貧血基因檢測試劑盒開展基因檢測，選擇廣東珠海黑馬Hema9600 PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增地中海貧血基因，同時和PCR產(chǎn)物進(jìn)行混合。電泳處 理 選 擇 Powerpac Basic，Bio－Rad Laboratories，Inc.進(jìn)行。在恒溫雜交儀（亞能生物技術(shù)（深圳）有限公司生產(chǎn)，型號：YN－H16）上將探針薄膜進(jìn)行標(biāo)記并完成雜交處理，通過分子雜交反應(yīng)及顯色反應(yīng)實(shí)施判斷。本研究選擇的試劑盒能夠?qū)?7種突變型β－地中海貧血基因進(jìn)行檢測，還能夠?qū)?種缺失型α地中海貧血基因進(jìn)行檢測。缺失型α－地中海貧血基因具體有－SEA、－α3.7、－α4.2； 突變型β－地中海貧血基因具體有 IVS－11－654(C－T)、－29(A－G)、－28(A－G)、Cap(－AAAC)、IVS－I－1(G－T，GA)、Int(T－G)、CD14/15(+G)、CD27/28(+C)、CD17(AT)、βE(G －A)、CD43(G －T)、CD41/42(－TTCT)、CD71/72(+A)、IVS－I－5(G－C)、CD31(－C)、－30M、31M/M。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn) 地中海貧血篩查：選擇血細(xì)胞分析儀檢測紅細(xì)胞平均體積（MCV），參考值：80～100fl；紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量 （MCH），參考值：27～34pg。選擇血紅蛋白電泳儀檢測HbA2，參考值：

2.5%～3.5%。如果 MCV＜80fl，MCH＜27pg，且 HbA2＜2.5%或＞3.5%，則證實(shí)為地中海貧血篩查陽性。對全部研究對象地中海貧血主要基因型分布情況進(jìn)行分析，具體有α－地中海貧血基因、β－地中海貧血基因、α和β復(fù)合型地中海貧血基因。

1.4 統(tǒng)計方法 經(jīng)SPSS 19.0分析數(shù)據(jù)，利用[n(%)]表示全部計數(shù)資料，進(jìn)行卡方χ2檢驗(yàn)，對照結(jié)果有顯著差異，P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 α－地中海貧血基因分布 本組200例孕前女性中檢測42例α－地中海貧血，其中aa/－－SEA地中海貧血基因型所占比例最大，明顯高于其他幾種基因型，差異顯著，P＜0.05。 見表 1。

表1 α-地中海貧血基因分布

2.2 β－地中海貧血基因分布 200例孕前女性檢出β－地中海貧血患者共50例，其中CD41/42基因型所占比重最高，明顯高于其他幾種基因型，差異顯著，P＜0.05。 見表 2。

表2 β-地中海貧血基因分布

2.3 αβ復(fù)合型地中海貧血基因分布 200例孕前女性檢出2例αβ復(fù)合型地中海貧血基因，檢出率為1%，均為－SEA/CD41/42基因型。

3 討論

地中海貧血是遺傳性慢性溶血性貧血癥的一種，危害較大，臨床出現(xiàn)率較高。臨床常見的α地中海貧血和β地中海貧血可以細(xì)分為靜止型、輕型、中間型以及重型，其中危害最大的是重型地貧[3，4]。輕型地貧攜帶者，直接觀察無法發(fā)現(xiàn)貧血癥狀，臨床癥狀也不明顯，如果不開展血液檢查，則可能出現(xiàn)漏診[5－7]。對于攜帶了地中海貧血基因的人懷孕后新生兒患上地中海貧血的可能性要明顯高于正常新生兒，嚴(yán)重情況下會導(dǎo)致肝脾腫大、智力發(fā)育遲緩，甚至可能出現(xiàn)死亡[8－10]。因此，在孕前積極開展地貧基因檢測，選擇性受孕，對于保證嬰兒健康有重要意義。

本研究通過檢測200例孕前女性的地中海貧血基因情況，顯示包括α地貧、β地貧以及αβ復(fù)合型地貧。其中200例中α地貧檢出42例（21%），β地貧檢出50例（25%），αβ復(fù)合型地貧檢出2例（1%），可以得知β地貧基因型人數(shù)所占比重最高。而α－地貧基因型中出現(xiàn)率最高的是aa/－－SEA，β－地中海貧血中出現(xiàn)率最高的是CD41/42基因型，αβ復(fù)合型地中海貧血基因中出現(xiàn)率最高的是－SEA/CD41/42基因型。

通過上述分析可以得知，在孕前進(jìn)行地中海貧血基因檢測能夠有效預(yù)防地中海貧血患兒出現(xiàn)，為臨床防治起到科學(xué)的指導(dǎo)。

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