（江西珍視明藥業(yè)有限公司 江西 撫州 344000）

胡勇勇 黃志元（通訊作者） 朱樣根

復(fù)方尿維氨滴眼液為我公司產(chǎn)品，其規(guī)格為10ml：硫酸軟骨素10mg、尿囊素20mg、維生素B61mg、維生素E 1mg、?；撬?0mg，用于治療慢性結(jié)膜炎、角膜損傷、結(jié)膜充血、預(yù)防眼病（游泳后、塵埃吹進(jìn)或汗水流入眼睛），紫外線或受其它光線影響之眼炎，眼瞼炎；緩解因配戴隱形眼鏡引起的不適，眼睛疲勞，眼癢、眼朦朧等癥狀。

維生素E（生育酚）為苯駢二氫吡喃衍生物，屬于脂溶性維生素，對(duì)熱穩(wěn)定而對(duì)氧敏感，是本品的主要成份之一。其藥理作用機(jī)制主要包括抗氧化，并可使末梢血管擴(kuò)張，改善局部血液循環(huán)和改善免疫功能等作用，適應(yīng)于容易受到光線、活性氧等多種因素引起的眼組織損傷。我公司建立了簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的HPLC法，用于控制本品主藥維生素E的含量[1]。

1.儀器與試藥

儀器：Waters e2695高效液相色譜儀。

試藥：維生素E對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為135051-201401）；

甲醇為色譜純（德國(guó)merck）；復(fù)方尿維氨滴眼液（江西珍視明藥業(yè)有限公司，批號(hào)為160701，160702，160703）。

2.方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm,5μm）；甲醇為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；柱溫：40℃；流速為1.0ml/min。與相鄰色譜峰間的分離度應(yīng)符合規(guī)定；重復(fù)進(jìn)樣5次，其峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)小于0.8%。

2.2 溶液的制備

對(duì)照品溶液：精密稱取維生素E對(duì)照品25mg，置于50ml燒杯中，再加入吐溫約250mg，用玻棒充分?jǐn)嚢柚辆鶆?，再加水約30ml，充分?jǐn)嚢柚寥芙夂筠D(zhuǎn)移至250ml量瓶中，用水多次洗滌燒杯，合并洗液并轉(zhuǎn)移至上述量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液：取本品溶液作為供試品溶液。

陰性溶液：按復(fù)方尿維氨滴眼液處方工藝配制不含維生素E原料的溶液。

2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

取上述對(duì)照品溶液適量，照紫外-可見分光光度法在200-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果，在280nm左右波長(zhǎng)處有最大吸收，并參考相關(guān)資料選擇280nm波長(zhǎng)作為此次維生素E含量測(cè)定研究波長(zhǎng)。

2.4 專屬性研究

精密量取對(duì)照品溶液、陰性溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見表1和附圖1～2。

表1 專屬性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明：陰性溶液無干擾。

圖1 陰性溶液色譜圖

圖2 對(duì)照品溶液色譜圖

2.5 線性試驗(yàn)

精密稱取維生素E對(duì)照品適量，分別配制成不同濃度的試液，按含量測(cè)定方法時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)。以樣品濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=4*106x-12743，r=0.9995,線性范圍為0.062688～0.1556mg/ml。

2.6 精密度試驗(yàn)

取維生素E對(duì)照品適量，按含量測(cè)定方法進(jìn)行試驗(yàn)，同時(shí)測(cè)6次，記錄峰面積，結(jié)果峰面積RSD為0.3%，表明該法精密度好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)：160701）照含量測(cè)定方法進(jìn)行重復(fù)測(cè)定5次，結(jié)果測(cè)得維生素E含量為94.3%，RSD為0.14%，表明該法重復(fù)性好。

2.8 待測(cè)樣品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)

因待測(cè)樣品為滴眼液原液，通過對(duì)其長(zhǎng)期留樣穩(wěn)定性考察，結(jié)果表明維生素E在24個(gè)月有效期內(nèi)都較穩(wěn)定，因此省略了該項(xiàng)研究。

2.9 回收率測(cè)定

精密稱取維生素E對(duì)照品約20mg、25mg、30mg，分別置于50ml燒杯中，再加入吐溫80約250mg，用玻棒充分?jǐn)嚢柚辆鶆?，再加維生素E陰性溶液約30ml，充分?jǐn)嚢柚寥芙夂筠D(zhuǎn)移至250ml量瓶中，用維生素E陰性溶液多次洗滌燒杯，合并洗液并轉(zhuǎn)移至上述量瓶中，加維生素E陰性溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。照含量測(cè)定方法進(jìn)行試驗(yàn)，回收率結(jié)果見表2。

表2 VE回收率測(cè)定結(jié)果

2.10 樣品含量測(cè)定

按上述色譜條件測(cè)定160701、160702、160703三批樣品中維生素E的含量，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3.討論

維生素E為微黃色至黃色或黃綠色澄清的黏稠液體，在水中不溶，因此，在配制維生素E對(duì)照品時(shí)需先用適量增溶劑吐溫80助溶，復(fù)方尿維氨滴眼液處方中同樣用到了增溶劑吐溫80，均通過試驗(yàn)摸索到合適的吐溫80用量，以使維生素E完全溶解。

因復(fù)方尿維氨滴眼液中維生素E濃度為0.01%，較低，進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)峰面積較小，誤差較大；為減小檢測(cè)誤差，更準(zhǔn)確地測(cè)定其含量，規(guī)定其峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)小于0.8%。

復(fù)方尿維氨滴眼液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)YBH04392008規(guī)定本品含維生素E應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～110.0%，上述3批樣品中維生素E的含量均符合規(guī)定。因本品維生素E處方量低（1000ml含0.1g），且不溶于水，配制過程中的誤差易導(dǎo)致批與批之間的含量有差異。為了更好地控制成品中維生素E含量，我們將維生素E的含量測(cè)定作為中間產(chǎn)品控制指標(biāo)之一。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].2015年版四部通則0512.北京:中國(guó)醫(yī)藥出版社.