王運成

（遼寧省凌源市東城動物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧 凌源 122500）

在雞群患大腸桿菌病時，為及時有效控制病情，避免盲目濫用抗生素，應通過藥敏試驗選擇敏感藥物進行治療。

1 試驗原理

將不同的復方藥品按治療劑量放大相同倍數(shù)配制藥液，制作藥敏片。藥敏片上含有的抗菌藥物向瓊脂培養(yǎng)基擴散，通過對細菌的抑殺作用而影響細菌生長繁殖，在藥敏片周圍形成抑菌圈，根據(jù)抑菌圈的大小確定藥物抗菌能力強弱。

2 試驗設備、藥品

高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、干燥滅菌箱、普通天平、酒精燈、手術剪、鑷子、普通營養(yǎng)瓊脂、玻璃棒、定性濾紙、打孔器、蒸餾水、藥匙、尺子、滅菌棉拭子、小玻璃瓶（如青霉素瓶，10個）、玻璃平皿（直徑90mm，10個）、燒杯等。

3 試驗步驟

3.1 消毒準備

將燒杯、玻璃平皿、玻璃棒、小玻璃瓶用干燥滅菌箱160℃滅菌2h，冷卻備用。用打孔器將定性濾紙打成圓形藥敏紙片若干份（直徑約6mm，100片/份），干燥滅菌箱滅菌備用。

3.2 平皿培養(yǎng)基制備

先向燒杯中加入100mL蒸餾水，再加入4.5g普通營養(yǎng)瓊脂，邊混合邊攪拌，使瓊脂全部溶化。然后將燒杯放入高壓蒸汽滅菌鍋，加熱至121℃20min。稍作冷卻后，緩慢解壓。然后，趁熱將瓊脂倒入平皿中，每個平皿約需20～25mL瓊脂液，瓊脂厚度約3～5mm，倒完蓋上平皿。冷卻后放入冰箱（2～8℃）備用，可保存 5～7d。

3.3 藥液濃度配比對照試驗

將不同的復方制劑分別按治療劑量的不同倍量加入蒸餾水，制作藥敏片，經(jīng)過多次試驗和臨床實踐，大多數(shù)藥品的藥敏片在50倍治療量濃度下抑菌圈較大，便于觀察和測量，抑菌效果明顯。我們將50倍量作為快速簡易藥敏試驗的藥液濃度標準。

3.4 藥敏片制備

將常用大腸桿菌治療藥物分別取1g于燒杯中，加蒸餾水50倍量溶解，分別放入100片藥敏紙片，充分浸泡4h。然后用鑷子把藥敏紙片夾入玻璃平皿中，用牙簽將藥敏紙片擺平分開，不重疊。放入恒溫箱（37℃）24～48h烘干。烘干后，用鑷子將制好的藥敏片放入小玻璃瓶中，加蓋密封，粘上口缺紙，標注藥品名稱，放入冰箱（2～8℃）保存?zhèn)溆茫行跒?個月。

3.5 采集病料

對病死雞進行剖檢，發(fā)現(xiàn)有大腸桿菌病典型病變特征的病例，即可無菌采取肝、心、氣囊等處病料置于滅菌容器內備用。

3.6 貼藥敏片

準備好待試驗的藥敏片，按順序排列，做好記錄。用滅菌棉拭子蘸取病料新鮮截面，均勻涂布于瓊脂平板表面。在平皿外壁做好起始標記。用鑷子在酒精燈火焰上消毒后，夾取1號藥敏片貼在瓊脂平板的起始標記處，按平按實。然后，鑷子消毒，依次夾取2號藥敏片，按逆時針順序貼在瓊脂平板上，直至全部。最后將平皿倒置，放入恒溫箱37℃培養(yǎng)12～24h。

3.7 結果判定

表1 藥敏試驗結果

4 藥物選擇

4.1不光要考慮藥敏試驗抑菌圈的大小，但還要考慮到藥物的吸收性、穩(wěn)定性等影響因素。

4.2 藥物的溶解性對試驗結果的影響不易溶解的藥物不能充分擴散到培養(yǎng)基中，抑菌圈就可能比真實效果要小。如氟苯尼考、粘桿菌素等。

4.3 藥物的穩(wěn)定性對試驗結果的影響青霉素類、部分頭孢類等藥物不穩(wěn)定，在藥敏片制作、貯存、試驗過程中，會受到各種因素影響，藥物效價降低，試驗結果也會比真實值偏低。

4.4 培養(yǎng)基對試驗結果的影響瓊脂厚度和濃度越大，藥物的抑菌圈越小。

4.5 影響試驗結果的因素還有藥敏紙片、pH值、涂菌數(shù)量等。

在做藥物選擇時，只有綜合分析到這些影響因素，才能找到最敏感的藥物。

5 總結

在實驗中，是將藥敏紙片放入藥液中浸泡吸收，不做定量分析；藥敏試驗液是用復方藥品的治療量濃度的增大濃度配制，抑菌圈相對較大。本快速簡易藥敏試驗主要用于雞大腸桿菌病時敏感藥物的選擇，限于粗略檢測，適于技術設備薄弱的基層診療機構。

[1]朱維正.消毒滅菌法[M].新編獸醫(yī)手冊，2000.

[2]張美喜，等[C].紙片法藥敏試驗影響因素的正交試驗研究.河南醫(yī)科大學學報，1990（25）：374.