朱麗君，曾慶真，邵淑娟，孟令軍

(山東省菏澤市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，山東 菏澤 274000)

1 概述

俗話說(shuō)“民以食為天”，可見(jiàn)飲食在居民生活中所占的重要地位。作為愛(ài)好美食的泱泱大國(guó)，改進(jìn)食物的味道是下廚者的終極目標(biāo)。雞精作為調(diào)味利器，其安全性備受關(guān)注。雞精是一種復(fù)合調(diào)味料，通常要加入多種食品添加劑，但過(guò)量添加食品添加劑對(duì)人體是有危害的，檢測(cè)添加劑的含量顯得至關(guān)重要。糖精鈉作為甜味劑，是一種有機(jī)化工合成產(chǎn)品，沒(méi)有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，短時(shí)間內(nèi)攝入過(guò)多的糖精鈉會(huì)減少血小板，抑制血液再生，對(duì)肝臟和腎臟產(chǎn)生不利的影響，嚴(yán)重時(shí)可以致癌[1]。按國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定[2]，在復(fù)合調(diào)味料中糖精鈉最大使用限量值為0.15 g/kg，一旦檢出假陽(yáng)性樣品，容易導(dǎo)致誤判、錯(cuò)判，增加檢測(cè)風(fēng)險(xiǎn)?，F(xiàn)有食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)通常采用高效液相色譜法(附紫外檢測(cè)器)來(lái)檢測(cè)糖精鈉，但難以檢出假陽(yáng)性問(wèn)題，需用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行二次定性。本文致力于探索一種操作簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法，以期能夠一次解決假陽(yáng)性定性和定量的問(wèn)題，提高檢測(cè)效率，降低檢測(cè)成本。

2 高效液相色譜紫外檢測(cè)法

2.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀(HPLC) 島津LC-20A(配紫外檢測(cè)器)；高速冷凍離心機(jī)。

糖精鈉對(duì)照品溶液：GBW(E)10008，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，1 mg/mL。

甲醇(色譜純，F(xiàn)isher公司)；氨水、乙酸胺(分析純)；實(shí)驗(yàn)室用水(超純水)。

2.2 試驗(yàn)方法

2.2.1 溶液配制

將標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液配制成0，1.00，5.00，10.00，20.00，50.00，100.00，200.00 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，供高效液相色譜測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用以定量，臨用現(xiàn)配。

2.2.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取約2 g(精確到0.001 g)試樣于50 mL具塞離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，于50 ℃水浴超聲20 min，冷卻至室溫后加亞鐵氰化鉀溶液2 mL和乙酸鋅溶液2 mL，混勻，于8000 r/min離心5 min，將水相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，于殘?jiān)屑铀?0 mL，渦旋混勻后超聲5 min，于8000 r/min離心5 min，將水相轉(zhuǎn)移到同一50 mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混勻。取適量上清液過(guò)0.22 μm濾膜，待液相色譜測(cè)定。

2.2.3 液相色譜條件

安捷倫ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6 mm×100 mm，4.6 μm)；流動(dòng)相：甲醇∶乙酸胺溶液(0.02 mol/L)為5∶95；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣體積：10 μL；柱溫：30 ℃；紫外檢測(cè)器：230 nm。

2.3 結(jié)果與分析

本次實(shí)驗(yàn)從市場(chǎng)上廣泛流通的太太樂(lè)、廚邦等幾十個(gè)不同廠家分別抽取56份樣品，通過(guò)分析樣品譜圖發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)雞精樣品中都有疑似糖精鈉的成分干擾糖精鈉的出峰，標(biāo)準(zhǔn)譜圖、樣品的譜圖及樣品加標(biāo)譜圖見(jiàn)圖1～圖3。

圖1 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖

圖2 雞精樣品液相色譜圖

圖3 雞精加標(biāo)樣品液相色譜圖

通過(guò)大量試驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)規(guī)律： 所有雞精樣品均在糖精鈉的出峰時(shí)間位置出現(xiàn)1～2個(gè)干擾峰，無(wú)論如何調(diào)整色譜條件均無(wú)法使目標(biāo)峰與干擾峰的出峰時(shí)間錯(cuò)開(kāi)(樣品空白無(wú)干擾)； 加標(biāo)樣品在糖精鈉出峰的位置出現(xiàn)2個(gè)峰，無(wú)論如何調(diào)整色譜條件均無(wú)法分開(kāi)這2個(gè)峰。

通過(guò)以上兩點(diǎn)規(guī)律，可以判定雞精中含有與糖精鈉結(jié)構(gòu)相似的組分，影響糖精鈉的定性定量。為了判斷該成分是否為糖精鈉，我們決定采用其他方法進(jìn)行定性。

目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中涉及的測(cè)定糖精鈉的方法有4種，高效液相色譜法、薄層色譜法、離子選擇電極測(cè)定法以及氣相色譜法[3，4]。除此之外，也有文獻(xiàn)報(bào)道用酶聯(lián)免疫法[5]、分光光度法[6]、非水滴定法[7]、流動(dòng)注射-化學(xué)發(fā)光法[8]、毛細(xì)管電泳法等測(cè)定食品中的糖精鈉得到較理想的分析結(jié)果，其中，定性效果最好同時(shí)也是應(yīng)用最為普遍的是液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀法[9]。參考相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)雞精樣品進(jìn)行分析，通過(guò)對(duì)比一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜圖，可以確定干擾峰并非糖精鈉，結(jié)果圖譜見(jiàn)圖4～圖6。

圖4 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品一級(jí)質(zhì)譜圖

圖5 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品二級(jí)質(zhì)譜圖

圖6 雞精樣品一級(jí)質(zhì)譜圖

液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀法具有靈敏度高、選擇性好的特點(diǎn)，可以有效避免假陽(yáng)性，但檢測(cè)成本較高，對(duì)于假陽(yáng)性樣品需要二次檢測(cè)，影響了檢測(cè)效率。為此，我們嘗試一種能直接使用高效液相色譜儀同時(shí)進(jìn)行假陽(yáng)性判定和定量測(cè)定的方法，即紫外檢測(cè)器-串聯(lián)熒光檢測(cè)器的檢驗(yàn)方法。

3 高效液相色譜紫外串聯(lián)熒光檢測(cè)法

3.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀(HPLC) 安捷倫(配紫外串聯(lián)熒光檢測(cè)器)；高速冷凍離心機(jī)。

糖精鈉對(duì)照品溶液：GBW(E)10008，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，1 mg/mL。

甲醇(色譜純，F(xiàn)isher公司)；氨水、乙酸胺(分析純)；實(shí)驗(yàn)室用水(超純水)。

3.2 試驗(yàn)方法

3.2.1 溶液配制

將標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液配制成0，1.00，5.00，10.00，20.00，50.00，100.00，200.00 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，供高效液相色譜測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用以定量。

3.2.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取約2 g(精確到0.001 g)試樣于50 mL具塞離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，于50 ℃水浴超聲20 min，冷卻至室溫后加亞鐵氰化鉀溶液2 mL和乙酸鋅溶液2 mL，混勻，于8000 r/min離心5 min，將水相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，于殘?jiān)屑铀?0 mL，渦旋混勻后超聲5 min，于8000 r/min離心5 min，將水相轉(zhuǎn)移到同一50 mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混勻。取適量上清液過(guò)0.22 μm濾膜，待液相色譜測(cè)定。

3.2.3 液相色譜條件

安捷倫ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6 mm×100 mm，4.6 μm)。

流動(dòng)相：甲醇∶乙酸胺溶液(0.02 mol/L)為5∶95；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣體積：10 μL；柱溫：30 ℃。

紫外檢測(cè)器：230 nm；熒光檢測(cè)器：Ex=277 nm，Em=411 nm。

3.3 結(jié)果與分析

3.3.1 保留時(shí)間定性

通過(guò)紫外和熒光色譜圖對(duì)比，發(fā)現(xiàn)糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品分別在7.004，6.938 min出峰，峰形對(duì)稱(chēng)；而雞精樣品的紫外譜圖在7.613 min處有干擾峰，而熒光譜圖不出峰，說(shuō)明該干擾物質(zhì)在給定的熒光條件下不出峰，從而達(dá)到了辨別假陽(yáng)性樣品的目的，見(jiàn)圖7和圖8。

圖7 糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品熒光+紫外色譜圖

圖8 雞精樣品熒光+紫外色譜圖

3.3.2 工作曲線和檢出限

使用標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)信噪比S/N=3，得出HPLC熒光檢測(cè)方法檢出限為3.0 mg/kg，優(yōu)于GB/T 5009.28-2016中規(guī)定的檢出限(S/N=3時(shí)，其方法檢出限為0.005 g/kg)，見(jiàn)表1。

表1 糖精鈉的工作曲線和檢出限

3.3.3 精密度和回收率試驗(yàn)

使用標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液按工作曲線條件測(cè)定6次，測(cè)得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.84%。取合格雞精樣品6份，分別加入糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品30，60 μg按3.2.2處理，測(cè)定糖精鈉的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果在93.1%～102.4%。

由以上結(jié)果可以看出，該HPLC紫外檢測(cè)器串聯(lián)熒光法可以同時(shí)進(jìn)行雞精樣品假陽(yáng)性的判定及定量，符合檢驗(yàn)要求。

4 結(jié)論

針對(duì)雞精樣品中廣泛存在的疑似糖精鈉干擾物質(zhì)，本文先是通過(guò)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀法對(duì)其進(jìn)行確證性定性，確定其不是糖精鈉；又通過(guò)HPLC紫外檢測(cè)器串聯(lián)熒光檢測(cè)器的方法，探討了一種成本相對(duì)較低、操作簡(jiǎn)便的方法，在判定雞精假陽(yáng)性的同時(shí)完成定量。該方法靈敏度較高，精密度與準(zhǔn)確性均符合標(biāo)準(zhǔn)要求，可以推廣到日常檢測(cè)中，有效提高檢測(cè)效率。

參考文獻(xiàn)：

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[2]GB 2760-2011,食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[S].

[3]GB 5009.28-2016,食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定[S].

[4]GB 5009.28-2003,食品中糖精鈉的測(cè)定[S].

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[8]高向陽(yáng),魏姜勉,王珊,等.流動(dòng)注射-化學(xué)發(fā)光法快速測(cè)定糖精鈉[J].理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊(cè)),2011,47(12):1446-1449.

[9]許秀敏,吳西梅,梁春穗,等.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2005,15(9):7057-7059.