阮毅銘，梅全喜，關(guān)健纓，王書(shū)芹，伍軍軍，陳劍波，曹崇波（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山市中醫(yī)院藥學(xué)部，廣東中山 2800；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山市中醫(yī)院科教科，廣東中山 2800；.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山市中醫(yī)院皮膚科，廣東中山 2800；.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山市中醫(yī)院病理科，廣東中山 2800；.廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，廣州 10006）

慢性皮炎-濕疹是臨床常見(jiàn)的一種遲發(fā)型超敏反應(yīng)性皮膚病[1]，目前主要是采用局部治療加全身抗過(guò)敏治療。其中，局部治療主要以皮膚外用糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物為主；全身治療主要使用H1受體拮抗藥，嚴(yán)重者使用糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑。但這些藥物均存在作用環(huán)節(jié)單一、不良反應(yīng)較大、易復(fù)發(fā)等問(wèn)題，如糖皮質(zhì)激素類(lèi)可以抑制遲發(fā)型超敏反應(yīng)，是當(dāng)前治療慢性皮炎-濕疹的最常用藥物，臨床上也取得了明顯的效果，但無(wú)論是局部外用還是全身用藥，若長(zhǎng)期使用均表現(xiàn)出明顯的副作用[2-4]。此外，長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用還會(huì)導(dǎo)致快速減敏或耐受現(xiàn)象[5]，而目前使用的抗組胺藥（H1受體拮抗藥）均為抗Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的藥物，但本病是遲發(fā)型超敏反應(yīng)，抗組胺藥也只能起到暫時(shí)緩解瘙癢的作用，并不能改善局部炎癥浸潤(rùn)，故抗組胺藥在臨床應(yīng)用上受到了極大的限制。相比之下，中醫(yī)藥對(duì)慢性皮炎-濕疹的治療獨(dú)具優(yōu)勢(shì)，能通過(guò)多靶點(diǎn)、多種途徑發(fā)揮作用。

漆大姑為大戟科植物毛果算盤(pán)子的枝葉，又名毛漆、漆大伯、毛果算盤(pán)子等，具有驅(qū)風(fēng)利濕、止血、散瘀、消腫的功效，分布于福建、廣東、海南、廣西等地，南方部分地區(qū)民間將其用于治療生漆過(guò)敏、稻田皮炎、皮膚瘙癢、蕁麻疹和濕疹等病癥，用藥方式為鮮用或干葉煎水外洗[6-7]?！渡讲菟幹改稀酚涊d：“凡患漆瘡皮膚紅腫作癢，取其葉煎水洗一、二次即愈”[8]。以上報(bào)道提示漆大姑有治療過(guò)敏性皮膚病的功用，但都是經(jīng)驗(yàn)用藥未進(jìn)行藥理研究，國(guó)內(nèi)外亦未見(jiàn)漆大姑外用治療慢性皮炎-濕疹的藥效學(xué)相關(guān)研究。本課題組前期的藥理研究已證實(shí)，漆大姑具有抗皮膚遲發(fā)型超敏反應(yīng)的作用[9]，而皮炎-濕疹的發(fā)病原因就是皮膚的一種遲發(fā)型超敏反應(yīng)。因此，本研究自制漆大姑水提物，通過(guò)研究其對(duì)慢性皮炎-濕疹模型小鼠的改善作用，為進(jìn)一步利用漆大姑開(kāi)發(fā)一種安全、有效、副作用小的皮膚科新藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

BP211D電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）；游標(biāo)卡尺（哈爾濱量具刃具集團(tuán)有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（鞏義市英峪高科儀器廠(chǎng)）；DSX100光學(xué)顯微鏡（日本奧林巴斯公司）。

1.2 藥材、藥品與試劑

漆大姑枝葉于2016年9月份采自廣東省中山市五桂山，樣品經(jīng)中山市中醫(yī)院曾聰彥主任中藥師鑒定為真品；復(fù)方醋酸曲安奈德溶液（廣東恒誠(chéng)制藥有限公司，批號(hào)：1608407，規(guī)格：0.001 g/mL）；2，4-二硝基氯苯（DNCB，美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：STBF4847V，純度：99%）；丙酮（天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號(hào)：20160626，純度：99.9%）；1，2-丙二醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號(hào)：20161012，分析純）；橄欖油（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20160912，分析純）。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)KM小鼠60只，18～22 g，♀♂各半，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（粵）2013-0034。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，小鼠自由攝水和攝食，環(huán)境溫度控制在20～22℃，濕度控制在55%～60%，正常光照。

2 方法

2.1 漆大姑水提物的制備

取漆大姑干燥枝葉1 000 g，粉碎成粗粉，加入10倍量的蒸餾水浸泡60 min后煎煮，沸后用文火煮60 min，濾出煎液；濾渣加8倍量水，沸后再用文火煮60 min，濾出煎液。合并2次濾液，4℃貯藏24 h后抽濾，在70℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮濾液至450 mL（提取率為31.6%），4℃貯藏。臨用前，分別加入蒸餾水和體積分?jǐn)?shù)為7.0%的藥用1，2-丙二醇（作透皮促進(jìn)劑），制備成高、中、低濃度（分別含漆大姑生藥2.0、1.0、0.5 g/mL）的藥液（給藥劑量根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和文獻(xiàn)[9]確定）。

2.2 造模

于實(shí)驗(yàn)前1天，用剃毛剪對(duì)KM小鼠進(jìn)行腹部脫毛，裸露皮膚面積約3 cm×2 cm。正式實(shí)驗(yàn)當(dāng)天（d0），用微量移液器移取6%DNCB-丙酮橄欖油溶液100 μL，均勻涂抹于小鼠裸露皮膚處致敏，次日再加強(qiáng)致敏1次，5 d后在小鼠右耳正、反兩側(cè)均勻涂抹1%DNCB-丙酮橄欖油溶液各10 μL激發(fā)，同時(shí)在左耳涂等量的丙酮橄欖油溶液作對(duì)照，每隔3天激發(fā)1次，共激發(fā)3次[10-11]。

2.3 分組與給藥

將60只小鼠按體質(zhì)量和性別隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為空白組（蒸餾水）、模型組（蒸餾水）、復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組（陽(yáng)性對(duì)照，原液）和漆大姑水提物高、中、低濃度組。除空白組外，其余5組小鼠均按“2.2”項(xiàng)下方法造模。于實(shí)驗(yàn)第3天開(kāi)始給藥，均外涂于小鼠右耳正、反兩面，每次用量共計(jì)15 μL（給藥劑量是根據(jù)前期的預(yù)實(shí)驗(yàn)確定），每天7：00和15：00各給藥1次，連續(xù)給藥12 d（若于激發(fā)當(dāng)日，則在激發(fā)前2 h給藥）。

2.4 漆大姑水提物對(duì)模型小鼠右耳厚度差的影響

先用游標(biāo)卡尺根據(jù)單盲法測(cè)量致敏前（d0）以及實(shí)驗(yàn)第9、12、15天每次激發(fā)24 h后（d10、d13、d16）小鼠右耳中部厚度，計(jì)算每次激發(fā)后與致敏前的右耳厚度差，以觀察漆大姑枝葉水提物對(duì)模型小鼠耳組織炎癥腫脹的改善情況。

2.5 漆大姑水提物對(duì)模型小鼠耳部搔抓次數(shù)的影響

先記錄致敏前30 min內(nèi)小鼠對(duì)耳部的搔抓次數(shù)，小鼠后爪對(duì)耳部搔或抓1下，每個(gè)動(dòng)作記1次，連續(xù)抓或搔幾下就記幾次；前肢的活動(dòng)以及后爪對(duì)面、耳部附近、腹部等處的搔抓則不作統(tǒng)計(jì)。以“2.4”項(xiàng)下小鼠右耳厚度差測(cè)定的時(shí)間為節(jié)點(diǎn)，順延30 min觀察小鼠由于右耳慢性皮炎-濕疹引發(fā)瘙癢導(dǎo)致抓搔耳部的情況，記錄30 min內(nèi)小鼠對(duì)耳部的搔抓次數(shù)。

2.6 漆大姑水提物對(duì)模型小鼠耳腫脹度的影響

末次激發(fā)后24 h，搔抓動(dòng)作觀察完畢后，頸椎脫臼處死小鼠，拭凈小鼠耳殘留藥物，肉眼觀察耳大體情況后沿耳廓基線(xiàn)剪下完整雙耳，用直徑0.8 cm的金屬打孔器在左、右耳中部的同一位置打孔取圓形耳片，立即用電子分析天平精確稱(chēng)量耳片質(zhì)量，并計(jì)算耳腫脹度[耳腫脹度（mg）＝右耳片質(zhì)量（mg）－左耳片質(zhì)量（mg）]及腫脹抑制率[耳腫脹抑制率（%）＝（模型組耳腫脹度－給藥組耳腫脹度）/模型組耳腫脹度×100%]。

2.7 漆大姑水提物對(duì)模型小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)的影響

處死小鼠，分離小鼠胸腺和脾組織，稱(chēng)質(zhì)量，計(jì)算胸腺（脾）指數(shù)[胸腺（脾）指數(shù)＝胸腺（脾）質(zhì)量（mg）/體質(zhì)量（g）×10]。

2.8 漆大姑水提物對(duì)模型小鼠耳組織病理學(xué)的影響

分別將各組小鼠切下的右耳片放入10%中性緩沖福爾馬林溶液中固定，浸蠟，包埋，常規(guī)制成5μm的石蠟切片。切片行蘇木精-伊紅（HE）染色后，在光學(xué)顯微鏡下觀察耳組織病理學(xué)變化。

2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。結(jié)果以±s表示，各組間比較采用單因素方差分析，方差齊性者組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，方差不齊者采用Dennett’s檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 小鼠激發(fā)后與致敏前右耳厚度差測(cè)定結(jié)果

與空白組比較，模型組小鼠激發(fā)后右耳厚度差均明顯增加（P＜0.01）。與模型組比較，復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組和漆大姑水提物各濃度組小鼠的右耳厚度差均不同程度地減小，除漆大姑水提物低濃度組小鼠在實(shí)驗(yàn)第16天的右耳厚度差減小不明顯外，其余各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠右耳厚度差測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10，mm）Tab 1 Difference of right ear thickness in mice in each group（±s，n＝10，mm）

表1 各組小鼠右耳厚度差測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10，mm）Tab 1 Difference of right ear thickness in mice in each group（±s，n＝10，mm）

注：與空白組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.blank group，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

組別空白組模型組復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組漆大姑水提物高濃度組漆大姑水提物中濃度組漆大姑水提物低濃度組d16－d0 0.020±0.002 0.181±0.012＊＊0.121±0.013##0.143±0.019##0.166±0.017#0.174±0.019 d0 0.160±0.003 0.161±0.004 0.162±0.003 0.159±0.003 0.162±0.002 0.161±0.004右耳厚度差，mm d10－d0 0.018±0.004 0.075±0.007＊＊0.044±0.007##0.049±0.005##0.053±0.008##0.066±0.006##d13－d0 0.018±0.002 0.128±0.004＊＊0.073±0.013##0.090±0.009##0.097±0.011##0.119±0.010#

3.2 小鼠30 min內(nèi)耳部搔抓次數(shù)測(cè)定結(jié)果

與正常組比較，模型組小鼠耳部涂抹1%DNCB-丙酮溶液激發(fā)后，小鼠由于瘙癢出現(xiàn)明顯搔抓患耳現(xiàn)象，并在24 h內(nèi)達(dá)到最高峰，隨后緩慢下降；隨著再次激發(fā)和激發(fā)次數(shù)的增加，搔抓次數(shù)明顯增加（P＜0.01），表明瘙癢模型適用。與模型組比較，漆大姑水提物高、中濃度組小鼠在d10、d13、d16時(shí)對(duì)耳部的搔抓次數(shù)以及漆大姑水提物低濃度組小鼠在d13時(shí)對(duì)耳部的搔抓次數(shù)均顯著減少（P＜0.05或P＜0.01）；且漆大姑水提取高濃度組小鼠在d10、d13、d16時(shí)對(duì)耳部的搔抓次數(shù)顯著少于復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組（P＜0.05），表明漆大姑水提物在達(dá)到一定濃度時(shí)，止癢效果比復(fù)方曲安奈德溶液好，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠對(duì)耳部的搔抓次數(shù)測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10，次/30 min）Tab 2 Determination results of scratching times of ear in mice in each group（x ± s，n＝10，times/30 min）

表2 各組小鼠對(duì)耳部的搔抓次數(shù)測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10，次/30 min）Tab 2 Determination results of scratching times of ear in mice in each group（x ± s，n＝10，times/30 min）

注：與空白組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組比較，ΔP＜0.05Note：vs.blank group，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01；vs.compound triamcinolone acetonide acetate group， ΔP＜0.05

組別空白組模型組復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組漆大姑水提物高濃度組漆大姑水提物中濃度組漆大姑水提物低濃度組d16 0.8±0.6 47.7±3.1＊＊42.7±2.2##39.3±1.9##Δ 43.9±3.0#45.8±3.6 d0 1.0±0.6 0.8±0.5 0.9±0.7 0.8±0.6 0.7±0.4 0.8±0.8 d10 1.1±1.0 41.1±2.3＊＊37.8±2.7##35.3±3.2##Δ 38.3±1.6##39.3±1.9 d13 0.9±0.7 44.1±2.3＊＊40.3±2.0##38.3±11.6##Δ 40.9±2.6##41.7±2.5#

3.3 小鼠耳腫脹度測(cè)定結(jié)果

與空白組比較，模型組小鼠耳腫脹度顯著增加（P＜0.01）。與模型組比較，復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組和漆大姑水提物各濃度組小鼠耳腫脹度均顯著減少（P＜0.05或P＜0.01）；其中，復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組和漆大姑水提物高濃度組小鼠的耳腫脹抑制率超過(guò)50%，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠耳腫脹度和耳腫脹抑制率測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 3 Ear swelling degree and inhibitory rate of ear swelling in mice in each group（±s，n＝10）

表3 各組小鼠耳腫脹度和耳腫脹抑制率測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 3 Ear swelling degree and inhibitory rate of ear swelling in mice in each group（±s，n＝10）

注：與空白組比較，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.blank group，＊＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

組別空白組模型組復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組漆大姑水提物高濃度組漆大姑水提物中濃度組漆大姑水提物低濃度組耳腫脹度，mg 耳腫脹抑制率，%60.3 52.6 39.8 13.8 6.38±1.15＊＊2.53±0.61##3.02±0.71##3.84±0.63##5.50±0.78#

3.4 小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)測(cè)定結(jié)果

與空白組比較，模型組小鼠胸腺指數(shù)有所增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），脾指數(shù)顯著增加（P＜0.05）。與模型組比較，復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組和漆大姑水提物高濃度組小鼠的胸腺指數(shù)以及復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組和漆大姑水提物各濃度組小鼠的脾指數(shù)均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 各組小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 4 Determination results of thymus index and spleen index in mice in each group（±s，n＝10）

表4 各組小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)測(cè)定結(jié)果（±s，n＝10）Tab 4 Determination results of thymus index and spleen index in mice in each group（±s，n＝10）

注：與空白組比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.blank group，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

組別空白組模型組復(fù)方醋酸曲安奈德溶液組漆大姑水提物高濃度組漆大姑水提物中濃度組漆大姑水提物低濃度組脾指數(shù)，g/10 g 0.321±0.022 0.331±0.036＊0.164±0.020##0.268±0.016##0.279±0.023##0.300±0.026##胸腺指數(shù)，g/10 g 0.316±0.012 0.322±0.037 0.278±0.034##0.287±0.026#0.298±0.045 0.305±0.026

3.5 小鼠耳片組織病理學(xué)觀察結(jié)果

與空白組比較，模型組小鼠耳表皮棘層明顯增厚，細(xì)胞明顯增生，表皮中可見(jiàn)海綿樣水腫，周?chē)梢?jiàn)明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，表皮細(xì)胞角化過(guò)度；真皮中血管明顯充血，周?chē)梢?jiàn)淋巴細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。復(fù)方曲安奈德溶液組小鼠耳表皮局部可見(jiàn)棘層輕微增厚，表皮未見(jiàn)海綿樣水腫也未見(jiàn)水泡；真皮下血管周?chē)匆?jiàn)明顯的淋巴細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。漆大姑水提物高濃度組小鼠耳表皮棘層稍微增厚，可見(jiàn)輕微海綿樣水腫；真皮血管周?chē)梢?jiàn)少量淋巴細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)。漆大姑水提物中濃度組小鼠耳表皮層棘層增厚，可見(jiàn)海綿樣水腫，但未見(jiàn)水泡；真皮下血管周?chē)梢?jiàn)淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，血管輕微充血。漆大姑水提物低濃度組小鼠耳表皮棘層明顯增厚，可見(jiàn)海綿樣水腫，細(xì)胞角化過(guò)度；真皮血管周?chē)梢?jiàn)明顯淋巴細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，血管充血，結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 各組小鼠耳組織大體觀察結(jié)果Fig 1 General observation of ear tissue of mice in each group

圖2 各組小鼠耳組織病理學(xué)觀察結(jié)果（×400）Fig 2 Pathological observation of ear tissue of mice in each group（×400）

4 討論

慢性皮炎-濕疹為人類(lèi)常見(jiàn)病、多發(fā)病，其發(fā)病機(jī)制與機(jī)體遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)有關(guān)。本研究采用DNCB致敏并反復(fù)激發(fā)復(fù)制小鼠慢性皮炎-濕疹模型，造模后小鼠耳廓局部病理特征與文獻(xiàn)報(bào)道[10-13]基本一致，提示造模成功，而且局部病理改變與人類(lèi)慢性皮炎-濕疹類(lèi)似，可用于評(píng)價(jià)藥物療效。復(fù)方醋酸曲安奈德溶液為糖皮質(zhì)激素藥，是目前公認(rèn)的有效治療慢性皮炎、慢性濕疹等過(guò)敏性皮膚病的常用外用藥，故在本研究中筆者以其為陽(yáng)性對(duì)照。

胸腺是T淋巴細(xì)胞發(fā)育成熟的場(chǎng)所，是機(jī)體中樞免疫器官，主要參與細(xì)胞免疫；脾是身體最大的外周免疫器官，含有大量的免疫細(xì)胞，成熟的B淋巴細(xì)胞大量聚集于此，因此其與機(jī)體的體液免疫關(guān)系更為密切，也更容易受到糖皮質(zhì)激素等藥物的抑制，濕疹患者的細(xì)胞免疫及體液免疫功能往往存在顯著異常。臨床試驗(yàn)和動(dòng)物研究已經(jīng)證實(shí)，免疫功能異常是皮炎-濕疹發(fā)病的重要環(huán)節(jié)[14-15]。慢性皮炎-濕疹多由急性皮炎-濕疹或亞急性皮炎-濕疹轉(zhuǎn)化而來(lái)[16]，機(jī)體的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)與體質(zhì)量成正比，是反映胸腺、脾免疫功能的重要指標(biāo)，胸腺指數(shù)和脾指數(shù)的改變又直接反映了機(jī)體免疫功能狀態(tài)的變化[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠的胸腺指數(shù)及脾指數(shù)均高于空白組，其中脾指數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；各給藥組小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)均較模型組均不同程度降低，其中尤以脾指數(shù)降低較為明顯，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。同時(shí)，慢性皮炎-濕疹模型小鼠的病理狀態(tài)也在逐漸改善。這提示機(jī)體免疫功能的改變與慢性皮炎-濕疹的發(fā)生密切相關(guān)，漆大姑枝葉水提物能夠降低模型小鼠增加的胸腺指數(shù)及脾指數(shù)，在這方面與復(fù)方醋酸曲安奈德溶液藥效相似，其機(jī)制可能與免疫抑制作用有關(guān)。遲發(fā)型超敏反應(yīng)是由特異性致敏效應(yīng)T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答的一種類(lèi)型，細(xì)胞免疫缺陷和無(wú)胸腺的裸鼠不會(huì)發(fā)生該型變態(tài)反應(yīng)[18]，而自身免疫病和過(guò)敏反應(yīng)都是由于免疫系統(tǒng)對(duì)外來(lái)物質(zhì)異常敏感。因此，筆者推斷，漆大姑水提物對(duì)小鼠慢性皮炎-濕疹的防治有可能是通過(guò)調(diào)節(jié)免疫功能而發(fā)揮作用的，并非單純的局部作用，至于具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

陳蕾等[19]和Yamashita H等[20]在研究中均發(fā)現(xiàn)，慢性皮炎-濕疹模型組小鼠在激發(fā)后各時(shí)間點(diǎn)搔抓耳部的次數(shù)明顯多于空白對(duì)照組，搔抓動(dòng)作時(shí)程與遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)過(guò)程類(lèi)似，而且空白對(duì)照組小鼠幾乎沒(méi)有搔抓耳部的動(dòng)作，因而認(rèn)為DNCB誘發(fā)的搔抓行為是皮膚的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)伴隨發(fā)生的瘙癢反應(yīng)。所以在本研究中，另外增加了小鼠30 min內(nèi)搔抓右耳次數(shù)這一觀察項(xiàng)目，可直觀地反映受試藥物對(duì)模型小鼠的止癢效果。在臨床中，“瘙癢-搔抓-苔蘚化”的惡性循環(huán)狀態(tài)是慢性皮炎-濕疹患者的常見(jiàn)表現(xiàn)，控制瘙癢是減輕痛苦的關(guān)鍵。采用藥物外用治療時(shí)，藥物要穿透皮膚角質(zhì)層到達(dá)病灶才能起作用，故在藥物外用時(shí)應(yīng)考慮到增加藥物對(duì)皮膚的滲透力和止癢力，因?yàn)閯×业酿W是慢性皮炎-濕疹患者最主要的困擾癥狀，所以外用藥的止癢作用一定要明顯有效、止癢起效時(shí)間短，故本研究中各濃度的漆大姑水提物中均含有體積分?jǐn)?shù)為7%的1，2-丙二醇作為透皮促進(jìn)劑[21]，可增強(qiáng)受試藥對(duì)皮膚角質(zhì)層的滲透能力，較好地發(fā)揮藥物療效。本研究結(jié)果還顯示，高濃度漆大姑水提物在改善慢性皮炎-濕疹模型小鼠耳腫脹度及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)方面稍遜于復(fù)方醋酸曲安奈德溶液，但在減少模型小鼠搔抓次數(shù)方面強(qiáng)于復(fù)方醋酸曲安奈德溶液（P＜0.05），表明漆大姑水提物在達(dá)到一定濃度后止癢效果較好。

由于皮炎濕疹病位在表，病灶外露，通過(guò)中藥外用治療患部，藥物的有效成分能經(jīng)由皮膚、汗腺、毛囊吸收后直達(dá)病灶部位，提高病灶部位的藥物有效濃度，療效穩(wěn)固、持久，既避免了內(nèi)服藥物的首關(guān)效應(yīng)和不良反應(yīng)，又提高了藥物的療效和患者用藥的依從性。而且外用藥物還可以通過(guò)肌腠毛竅，轉(zhuǎn)運(yùn)至全身，同時(shí)達(dá)到內(nèi)外共治作用[22-23]。本研究在用藥期間，小鼠脾指數(shù)的顯著變化可能與此有關(guān)。

綜上所述，漆大姑水提物對(duì)慢性皮炎-濕疹模型小鼠具有較好的改善作用，可通過(guò)抑制炎癥、消腫止癢來(lái)改善癥狀，并可明顯地抑制免疫器官指數(shù)的增加，有望開(kāi)發(fā)成一種治療慢性皮炎-濕疹的外用藥物，但其具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

[1]趙辨.臨床皮膚病學(xué)[M].3版.南京：江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2001：604.

[2]唐蘇為，謝韶瓊，宋勛，等.青鵬軟膏封包治療慢性濕疹療效觀察[J].世界臨床藥物，2016，37（1）：38-41.

[3]李海英，尹玉清，李衍煉.復(fù)方甘草酸苷聯(lián)合鹽酸非索非那定治療面部激素依賴(lài)性皮炎的臨床觀察[J].中國(guó)藥房，2015，26（5）：672-674.

[4]薛焱，劉欣媛，高洪波，等.長(zhǎng)葉紅砂治療濕疹皮炎的機(jī)理研究[J].中藥藥理與臨床，2017，33（3）：120-123.

[5]李蘇，陳潔，李斌，等.芩珠涼血合劑對(duì)濕疹患者外周血GRα受體的影響[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，39（1）：17-20.

[6]廣州部隊(duì)后勤部衛(wèi)生部.常用中草藥手冊(cè)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1969：826-827.

[7]黃紅泓，甄漢深，柳賢福.毛果算盤(pán)子提取工藝及沒(méi)食子酸含量測(cè)定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2015，34（3）：392-394.

[8]胡真.山草藥指南[M].廣州：廣東科技出版社，2009：142-143.

[9]阮毅銘，彭偉文，梅全喜，等.漆大姑抗炎、抗過(guò)敏和止癢作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥藥理與臨床，2017，33（5）：109-110.

[10]彭偉文，王英晶，王書(shū)芹，等.黑面神枝葉水提物治療小鼠慢性皮炎-濕疹療效觀察[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2014，25（12）：2954-2956.

[11]陳佳，郭敏，周黎旸，等.野菊花提取物對(duì)小鼠濕疹模型Th1/Th2 免疫功能的影響[J].中成藥，2018，40（2）：440-443.

[12]陳平，楊志波，王萬(wàn)春，等.濕疹納米乳膏治療慢性濕疹的抗炎實(shí)驗(yàn)研究[J].江西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，28（6）：74-76.

[13]朱學(xué)駿，涂平.皮膚病的組織病理診斷[M].2版.北京：北京醫(yī)科大學(xué)出版社，2001：57、65.

[14]王遠(yuǎn)志，蒙秉新，譚茜.氯雷他定聯(lián)合白芍總苷對(duì)慢性濕疹患者免疫功能及細(xì)胞因子的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志，2018，17（1）：9-11、18.

[15]張曼卡，馬慧敏，張健，等.功能未知基因C6orf120缺失對(duì)自身免疫性肝炎大鼠CD4+T細(xì)胞活化的影響[J].中國(guó)肝臟病雜志：電子版，2017，9（3）：49-53.

[16]MEAGHER LJ，WINES NY，COOPER AJ.Atopic dermatitis：review of immunopathogenesis and advances in immunosuppressive therapy[J].Australas Dermatol，2002，43（2）：247-254.

[17]李覃，董小青，王翼騰，等.土槿乙酸抑制接觸性超敏反應(yīng)的藥效學(xué)研究及機(jī)制探討[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2014，30（11）：1552-1557.

[18]呂世靜.臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2004：363-365.

[19]陳蕾，楊艷平，樊翌明.P物質(zhì)和一氧化氮在致BALB/c小鼠變應(yīng)性接觸性皮炎模型瘙癢中的作用[J].皮膚性病診療學(xué)雜志，2010，17（3）：182-186.

[20]YAMASHITA H，MAKINO T，MIZUKAMI H，et al.Pharmacological characterization of a chronic pruritusmodel induced by multiple application of 2，4，6-trinitrochlorobenzene in NC mice[J].Eur J Pharmacol，2007，563（1/2/3）：233-239.

[21]韓莉，王平，劉善新，等.不同促透劑對(duì)人參皂苷Rg1體外透皮吸收的影響[J].藥學(xué)研究，2014，33（7）：391-394.

[22]苗明三，于舒雁.首烏藤外用對(duì)動(dòng)物遲發(fā)超敏反應(yīng)的影響[J].中藥藥理與臨床，2014，30（3）：101-104.

[23]苗明三，于舒雁，魏榮瑞.錦燈籠外用對(duì)濕疹模型的影響[J].中藥藥理與臨床，2014，30（5）：108-111.