張力揚(yáng) 李楊玲 彭曉龍 張旭 黃敏 廣東省醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所 （廣東 廣州 510663）

藥用丁基膠塞，尤其是鹵化丁基膠塞，因其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、氣密性良好、耐熱老化性、耐水性能優(yōu)異以及生物安全性高，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥包裝領(lǐng)域[1]。但在對(duì)其加工工藝考察中發(fā)現(xiàn)，其配方中需加入硫化劑等多種化學(xué)助劑，這些物質(zhì)如有少量未被化學(xué)鍵合或者分解硫化而殘留于藥用包裝中，在與藥品直接接觸時(shí)，有可能遷移至藥液中，從而影響藥品的療效，甚至引發(fā)嚴(yán)重的不良反應(yīng)[2,3]。膠塞與藥物的相容性試驗(yàn)，即考察膠塞中的成分含量及其遷移到藥液中的遷移量[4]。N，N-雙肉桂醛-1,6-己二胺是丁基橡膠塞合成工藝中常用的硫化劑，本文作者曾采用液質(zhì)聯(lián)用方法，以甲醇為溶劑對(duì)N,N-雙肉桂醛-1,6-己二胺進(jìn)行分析，穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示其24h內(nèi)定量離子對(duì)峰面積逐漸變小，提示該物質(zhì)在有機(jī)溶劑分析環(huán)境下極不穩(wěn)定。而肉桂醛是N,N-雙肉桂醛-1,6-己二胺合成工藝中的主要原料，也是其主要降解產(chǎn)物，因此對(duì)膠塞中該硫化劑成分的分析可通過肉桂醛來(lái)考察。本文介紹了一種檢測(cè)注射用溴化丁基橡膠塞中肉桂醛含量及其在氯化鈉注射液中的遷移量的分析方法，采用固相萃取法對(duì)氯化鈉注射液進(jìn)行前處理，建立了測(cè)定膠塞中肉桂醛含量及其在注射液中遷移量的高效液相色譜法。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

儀器與試劑：①儀器：高效液相色譜儀（紫外檢測(cè)器，LC-2010AHT，日本島津公司）；電子分析天平（感量0.00001g，Secura225D-1CN，北京賽多利斯天平有限公司）；手動(dòng)固相萃取儀（ASE-12，天津奧特賽恩斯有限公司）；固相萃取柱（WondaSep?C18，規(guī)格：500mg/6mL，批號(hào)：6G010707）。②試劑：注射用溴化丁基膠塞（批號(hào)：

515063004，盛州橡塑膠（蘇州）有限公司）；肉桂醛對(duì)照品（3-苯基丙烯醛，分子式：C9H8O，CAS號(hào)：104-55-2，SIGMAALDRICH，批號(hào)：J1619008）；乙腈（色譜純，默克公司）；甲醇、二氯甲烷（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）；氯化鈉注射液（批號(hào)：1704012、1704022、1704032，廣東大冢制藥有限公司）；實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q制備的超純水。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil?ODS-SP（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相：乙腈-水（40:60），流速：1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：290nm，進(jìn)樣量：20μL，柱溫：40?C。

1.2.2 溶液的制備

對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備：精密稱取肉桂醛對(duì)照品77.44mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密移取100μL置10mL量瓶中，用甲醇定容，搖勻；再精密移取100μL置10mL量瓶中，用甲醇定容，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液（0.7744μg/mL）。

注射用溴化丁基膠塞提取液的制備：取注射用溴化丁基膠塞，剪碎，放入聚四氟乙烯罐中，按0.2g/mL比例加入適量氯化鈉注射液。密封后，置高壓蒸汽滅菌器中，115?C加熱1h，放冷至室溫，倒出液體作為注射液用溴化丁基橡膠塞提取液。

供試品溶液的制備：氯化鈉注射液與溶劑甲醇、流動(dòng)相乙腈混合時(shí)會(huì)形成結(jié)晶，實(shí)驗(yàn)采用固相萃取柱法對(duì)氯化鈉注射液進(jìn)行前處理后再注入高效液相色譜儀。固相萃取柱使用前分別用5mL甲醇和5mL水活化后，精密移取氯化鈉注射液100mL以約2～3mL/min的流速通過固相萃取柱，揮干，分別用5mL甲醇，3mL二氯甲烷依次洗脫，收集洗脫液，用甲醇稀釋至10mL，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾即得。

2.結(jié)果

2.1 流動(dòng)相條件的選擇

考察流動(dòng)相乙腈-水比例分別為50:50、45:55、40:60三種條件下氯化鈉注射液加標(biāo)樣品中肉桂醛與相鄰峰的分離情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明流動(dòng)相比例乙腈：水=40:60時(shí)，肉桂醛與相鄰峰的分離度最好，故選擇流動(dòng)相乙腈：水比例為40:60。氯化鈉注射液加標(biāo)樣品色譜圖見圖1。

圖1.氯化鈉注射液加標(biāo)樣品色譜圖

2.2 檢測(cè)限與定量限試驗(yàn)

取肉桂醛對(duì)照品儲(chǔ)備液，用甲醇逐步稀釋，直至信噪比約為3，即得儀器的檢測(cè)限，結(jié)果檢測(cè)限為0.007744μg/mL，該濃度下信噪比為5.1。氯化鈉注射液中肉桂醛的方法檢測(cè)限為0.0007744μg/mL。信噪比約為10時(shí)，定量限為0.03098μg/mL（S/N=14.2）。氯化鈉注射液中肉桂醛的方法定量限為0.003098μg/mL。

2.3 線性試驗(yàn)

精密量取肉桂醛對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用甲醇逐級(jí)稀釋成濃度分別為0.03098，0.06195，0.1549，0.3098，0.7744，1.549，3.098μg/mL的一系列對(duì)照品溶液，分別進(jìn)行HPLC測(cè)定，每個(gè)濃度平行測(cè)2次，取平均峰面積。以肉桂醛色譜峰面積為A，相應(yīng)對(duì)照品溶液濃度為C作線性回歸，回歸方程為：A=4.908×10-6C–3.397×10-3，R=0.9973，線性范圍為0.03098～3.098μg/mL。

2.4 肉桂醛在氯化鈉注射液中遷移量的回收率試驗(yàn)

精密移取400μL、2mL、4mL肉桂醛對(duì)照品儲(chǔ)備液于100mL容量瓶中，用氯化鈉注射液定容至刻度，參照1.2.2方法通過固相萃取柱并洗脫，收集洗脫液，用甲醇定容至10mL，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，得氯化鈉注射液加標(biāo)回收樣品，三個(gè)加標(biāo)樣品溶液濃度分別為0.03098、0.1549、0.3098μg/mL，每種濃度同法制備3份，依次注入液相色譜儀，代入線性方程計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1.氯化鈉注射液中肉桂醛的回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5 精密度試驗(yàn)

2.5.1 重復(fù)性試驗(yàn)

平行制備6份濃度為0.03098μg/mL加標(biāo)樣品溶液（參照1.2.2方法制備），供試液經(jīng)0.45μm濾膜過濾后依次注入液相色譜儀，平均濃度為0.03455μg/mL，結(jié)果的RSD為1.41%（n=6）。

2.5.2 中間精密度試驗(yàn)

由不同分析人員在不同日期各平行制備6份濃度為0.03098μg/mL加標(biāo)樣品溶液（參照1.2.2方法制備），進(jìn)行HPLC測(cè)定，平均濃度為0.03473μg/mL，結(jié)果的RSD為1.31%（n=12）。

2.6 注射用溴化丁基膠塞提取液中肉桂醛的測(cè)定

取溴化丁基膠塞提取液100mL，參照1.2.2供試品溶液的制備進(jìn)行處理后，在2.1色譜條件下進(jìn)行分析，結(jié)果提取液中未檢出肉桂醛。

2.7 氯化鈉注射液中肉桂醛遷移量的測(cè)定

利用本方法測(cè)定某企業(yè)生產(chǎn)的3批氯化鈉注射液0個(gè)月、加速試驗(yàn)3個(gè)月、加速試驗(yàn)6個(gè)月樣品，參照1.2.2供試品溶液的制備處理遷移樣品后進(jìn)行HPLC分析，樣品中均未檢出肉桂醛，因此氯化鈉注射液中肉桂醛的遷移量小于該方法檢測(cè)限，即0.0007744μg/mL。

3.結(jié)論

本研究建立了固相萃取-高效液相色譜檢測(cè)注射用溴化丁基膠塞中的肉桂醛方法，實(shí)驗(yàn)采用氯化鈉注射液為提取和遷移溶劑，以五層共擠輸液用袋及注射用溴化丁基橡膠塞為其包裝材料，在膠塞的提取和遷移試驗(yàn)中均未檢出硫化劑N,N-雙肉桂醛-1,6-己二胺的降解物肉桂醛。結(jié)果表明，該法測(cè)定靈敏、準(zhǔn)確度高、線性關(guān)系及重現(xiàn)性均較好，可為注射用溴化丁基膠塞中肉桂醛含量測(cè)定及其在氯化鈉注射液中遷移量分析提供研究參考，同時(shí)間接對(duì)膠塞中是否殘留硫化劑N，N-雙肉桂醛-1,6-己二胺進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。

[1]趙霞,胡昌勤,金少鴻.藥用膠塞及其應(yīng)用現(xiàn)狀[J].中國(guó)藥事,2006,20(7):433-436.

[2]王國(guó)勤,呂貽勝,伍勝利.藥用包裝鹵化丁基膠塞的藥物相容性發(fā)展趨勢(shì)[J].中國(guó)包裝,2010,30(7):49-51.

[3]劉莉,李婷婷,童偉,等.藥用丁基膠塞化學(xué)助劑檢測(cè)及與藥物相容性研究進(jìn)展[J].江西化工,2017,33(1):11-14.

[4]李立根,張毅蘭.藥用膠塞及其與藥品的相容性簡(jiǎn)述[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志,2015,46(12):1366-1371.