欒慶玲 張文世 高雅松 隋馨 孫長春 吉林省醫(yī)療器械檢驗所 生物性能檢驗室 人事財務(wù)科 （吉林 長春 130000）

無菌檢查法是用于檢查藥典要求無菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法，若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗條件下未發(fā)生微生物污染[1]。該方法是通過設(shè)置陽性對照、陰性對照，與待測樣品通過直接接種法或者薄膜過濾法進行無菌檢查，通過培養(yǎng)管中菌生長情況即可檢查出待測樣品是否無菌的一種方法。該種方法對環(huán)境要求極高，試驗環(huán)境必須達到無菌檢查的要求，檢驗全過程應(yīng)嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現(xiàn)行國家標準進行潔凈度確認。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進行驗證，其內(nèi)環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。日常檢驗還需對試驗環(huán)境進行監(jiān)控[1]。無菌室操作臺或凈化工作臺局部應(yīng)符合潔凈度100級單向流空氣區(qū)域要求[2]。而正是因為該方法對環(huán)境嚴格要求，使得該方法成為一種可靠的無菌檢測方法。醫(yī)療器械是在對人體檢查、治療或者手術(shù)過程中直接與人身體接觸的儀器或者器具。尤其是在手術(shù)或人體檢查過程中所使用到的醫(yī)療器械，如縫合針、注射針、醫(yī)用紗布、手套等醫(yī)療器械更是會在手術(shù)或人體檢查過程中與人體體內(nèi)接觸。因此該類醫(yī)療器械需經(jīng)過嚴格滅菌處理，以防在使用過程中因器械所攜帶的細菌或病毒造成患者感染，甚至加重病情。因此，醫(yī)療器械滅菌是否合格的檢測方法選擇極其重要。本文采用無菌檢查法分別對已滅菌處理和未滅菌處理的醫(yī)療器械進行檢測，將應(yīng)用在醫(yī)療器械中的檢測效果報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 儀器

①立式壓力蒸汽滅菌器（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；②電熱鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司）；③電子天平（常熟市雙杰測試儀器廠）；④ISOLOTOR SYSTEMS隔離系統(tǒng)（浙江泰林生物技術(shù)股份有限公司）；⑤凈化工作臺（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）；⑥生物安全柜（美國Baker）；⑦恒溫恒濕箱（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；⑧霉菌培養(yǎng)基（韶關(guān)市泰宏醫(yī)療器械有限公司）。

1.1.2 材料

材料1：培養(yǎng)基：①硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（北京三藥科技開發(fā)公司）；②胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（北京三藥科技開發(fā)公司）；③營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（北京三藥科技開發(fā)公司）。

材料2：浸提介質(zhì)：0.9%氯化鈉溶液（辰欣藥業(yè)股份有限公司）。

材料3：待檢醫(yī)療器械樣品：①滅菌組：醫(yī)用縫合針（21個）、注射針（21個）、醫(yī)用紗布片（10包）、外科手套（10

副）。②非滅菌組：取上述同一生產(chǎn)廠家、同規(guī)格、同數(shù)量、同種類醫(yī)療器械，通過標準菌株人工污染所得樣品。

材料4：采用對照用菌株信息見表1。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)基與浸提介質(zhì)無菌檢驗

在對兩組醫(yī)療器械檢測前，對所用培養(yǎng)基以及浸提介質(zhì)進行無菌檢查，取浸提介質(zhì)，以每管1mL的加樣量將其分別加入至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。同時將兩種空白培養(yǎng)基及加入浸提介質(zhì)組培養(yǎng)基并分別放置在30～35?C以及20～25?C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。72h后觀察培養(yǎng)基中菌生長情況，若無菌生長則表明培養(yǎng)基與浸提介質(zhì)無菌檢驗合格。

1.2.2 陽性對照菌液制備

取金黃色葡萄球菌，用無菌0.9%氯化鈉溶液稀釋至小于100cfu/mL。

1.2.3 醫(yī)療器械無菌檢測

①取滅菌組醫(yī)用縫合針共21個，浸入11管需-厭氧培養(yǎng)管（1管為陽性對照）與10管真菌-需氧培養(yǎng)管，培養(yǎng)管為30mL。未滅菌組重復上述過程。②取滅菌組注射針共21個，浸入11管需-厭氧培養(yǎng)管（1管為陽性對照）與10管真菌-需氧培養(yǎng)管，培養(yǎng)管為30mL。未滅菌組重復上述過程。③將滅菌組醫(yī)用紗布片，分別剪取代表部位1cm×3cm共21條，浸入11管需-厭氧培養(yǎng)管（1管為陽性對照）與10管真菌-需氧培養(yǎng)管，培養(yǎng)管為30mL。未滅菌組重復上述過程。④將滅菌組外科手套，分別剪取代表部位1cm×3cm共21條，浸入11管需-厭氧培養(yǎng)管（1管為陽性對照）與10管真菌-需氧培養(yǎng)管，培養(yǎng)管為30mL。未滅菌組重復上述過程。

上述操作結(jié)束后，將所有需-厭氧培養(yǎng)管在35?C下培養(yǎng)14d，所有霉菌培養(yǎng)管在25?C下培養(yǎng)14d。

表1.對照用菌株信息

表2.滅菌組無菌檢查結(jié)果

表3.未滅菌組無菌檢查結(jié)果

2.結(jié)果

兩組醫(yī)療器械無菌檢查結(jié)果：培養(yǎng)完畢后，陽性對照管在經(jīng)過培養(yǎng)后有菌生長且生長狀況良好，陰性對照管培養(yǎng)14d后仍無菌生長。滅菌組所有器械均無菌生長，未滅菌組器械均有菌生長且生長狀況良好。具體結(jié)果見表2與表3。

3.討論

無菌檢查法目前廣泛應(yīng)用于各個領(lǐng)域，其嚴格的操作環(huán)境與無菌操作要求使得結(jié)果具有較高的可靠性[3]。而在醫(yī)療器械領(lǐng)域中，由于儀器設(shè)備或者器件直接與人體甚至體內(nèi)接觸，更要嚴格要求對醫(yī)療器械的無菌處理。尤其是在手術(shù)過程中所用到的縫合針、注射器具、紗布、手套等醫(yī)療器械，如果未做滅菌處理就直接應(yīng)用于人體手術(shù)，將會給患者生命健康帶來極大的威脅，甚至讓患者感染病毒死亡[4,5]。

本文選用了在手術(shù)過程中最常用到的手術(shù)器械如縫合針、注射針、紗布、手套為醫(yī)療器械的代表，通過利用無菌檢查法中的直接接種法來對已滅菌處理和未滅菌處理的器械進行無菌檢查對比。在整個過程中選用了金黃色葡萄球菌作為陽性對照菌種。通過將縫合針、注射針直接浸泡、將紗布、手套直接剪取代表部位等方法對兩組醫(yī)療器械表面進行采樣，并接種至相應(yīng)培養(yǎng)基。通過培養(yǎng)基培養(yǎng)一定時間后的結(jié)果顯示，陽性對照組有菌生長且生長狀況良好，而陰性對照組無菌生長，對于已滅菌組醫(yī)療器械而言，檢測結(jié)果均為陰性無菌生長，表明滅菌處理合格；對于未滅菌組醫(yī)療器械而言，檢測結(jié)果均為陽性有菌生長，表明器械表面有菌。通過對兩組結(jié)果的對比，可以發(fā)現(xiàn)無菌組醫(yī)療器械表面較未滅菌組醫(yī)療器械表面顯著無菌。

綜上所述，無菌檢查法應(yīng)用在醫(yī)療器械領(lǐng)域中可以有效地對各類醫(yī)療器械進行無菌檢查，在為保障人民用械安全上應(yīng)用意義廣泛。

[1]國家藥典委員會,編.中華人民共和國藥典:2015年版 四部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015-06.

[2]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.中華人民共和國國家標準 GB/T 14233.2-2005《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗方法 第2部分:生物學試驗方法》[S].北京:中國標準出版社,2005.

[3]陳麗萍,楊曉莉,李輝.伊曲康唑注射液無菌檢查法的建立及方法優(yōu)化研究[J].藥物生物技術(shù),2016,23(1):62-64.

[4]安海芹,孫金秀.再生醫(yī)療器械不同清洗方法的對比研究[J].中華醫(yī)院感染學雜志,2012,22(11):2359-2360.

[5]張寧風,項秀芹,簡麗娟,等.不同方法清洗醫(yī)療器械與消毒的效果對比[J].中華醫(yī)院感染學雜志,2016,26(16):3830-3837.