彭 梅，魯小龍，張 雷，徐 虹

(1.四川大學(xué)華西廣安醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 廣安 638000；2.成都軍區(qū)總醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 成都 610083)

機(jī)體內(nèi)抗腫瘤免疫主要以T淋巴細(xì)胞所介導(dǎo)的細(xì)胞免疫為主，自然殺傷細(xì)胞(NK)在抗腫瘤免疫中發(fā)揮免疫監(jiān)視、免疫調(diào)節(jié)和殺傷靶細(xì)胞的作用。研究表明，IV期非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma，NHL)患者體內(nèi)CD3+、CD4+、NK細(xì)胞水平均顯著低于I～I(xiàn)II期患者[1]。彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL)是NHL中最常見的一種亞型，DLBCL患者的發(fā)生與發(fā)展常伴有患者體內(nèi)細(xì)胞免疫功能紊亂、T淋巴細(xì)胞水平變化[2]。目前，臨床上認(rèn)為該病是免疫系統(tǒng)惡性腫瘤，患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞異常增殖，導(dǎo)致正常的淋巴細(xì)胞及組織功能遭到破壞，對(duì)患者身體健康和生命安全產(chǎn)生威脅[3]。本研究通過對(duì)我院收治的66例DLBCL患者和同期在我院進(jìn)行健康檢查的45例健康人進(jìn)行分析，探討T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞檢測在DLBCL患者臨床治療中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料選取四川大學(xué)華西廣安醫(yī)院2015年3月至2017年6月收治的66例DLBCL患者，均經(jīng)過臨床病理組織學(xué)檢查診斷確診為彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除其他血液疾病患者、免疫系統(tǒng)疾病患者、重癥感染患者、手術(shù)病史患者等。其中男39例，女27例；年齡16～72歲[(45.68±6.87)歲]；其中I期10例，II期14例，III期25例，IV期17例。所有患者均進(jìn)行化療治療，化療后根據(jù)WHO制定相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)患者的療效進(jìn)行判斷，36例治療后為完全緩解(CR組)，30例為部分緩解(PR組)。另外選取同期在我院進(jìn)行健康檢查的45例健康人為對(duì)照組，其中男26例，女19例；年齡20～65歲[(44.87±9.34)歲]。

1.2方法檢測所有納入者T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞活性，采用流式細(xì)胞儀(美國 Beckman Coulter公司生產(chǎn)，型號(hào)：CYTomios FC500)進(jìn)行檢測，所用試劑均為配套試劑。采集DLBCL患者治療前、化療2周、4周后第3d空腹靜脈血2 ml，將其置于經(jīng)過EDTA-K2處理的抗凝管中并標(biāo)記。同時(shí)采用對(duì)照組納入者的空腹靜脈血2 ml，置于抗凝管中標(biāo)記備用。所有樣本的采集均于4 h內(nèi)處理完畢。之后按照流式細(xì)胞儀使用說明進(jìn)行檢測。取10 μl單抗置于流式管中，加入經(jīng)過抗凝處理的外周血100 μl，以2800 r/min微型振蕩器混勻，避光室溫保存20 min；之后加入500 μl溶血素，以2800 r/min微型振蕩器混勻，避光室溫保存20 min；最后加入500 μl PBS，避光室溫保存10 min；最后采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行質(zhì)量控制，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析處理。

1.3觀察指標(biāo)比較三組患者體內(nèi)NK細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞亞群水平的變化。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 21.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料比較采用方差分析及SNK法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞活性比較DLBCL患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+以及NK細(xì)胞活性水平均低于對(duì)照組，而CD8+水平高于對(duì)照組(P< 0.05)，見表1。

表1 DLBCL患者與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞活性比較

a與對(duì)照組比較，P< 0.05

2.2CR組化療前、化療2、4周后T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞活性比較CR組化療2周后，T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞活性與治療前比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，化療4周后，外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及NK細(xì)胞活性均優(yōu)于治療前和化療2周后(P< 0.05)，見表2。

表2 CR組患者化療前、化療2、4周后T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞活性比較

a與化療前比較，P< 0.05；b與化療2周比較，P< 0.05

2.3PR組化療前、化療2、4周后T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞活性比較PR組化療前后T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，見表3。

3 討論

DLBCL是目前臨床上常見的侵襲性淋巴瘤，是NHL中發(fā)生率較高的一種[4，5]。該病的發(fā)生與發(fā)展往往與患者體內(nèi)的細(xì)胞免疫功能密切相關(guān)[6]。T淋巴細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)的重要免疫細(xì)胞，正常狀態(tài)下，T淋巴細(xì)胞及其亞群數(shù)目呈相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)；當(dāng)機(jī)體內(nèi)T淋巴細(xì)胞及其亞群數(shù)目異常時(shí)，極有可能是由于機(jī)體內(nèi)細(xì)胞免疫功能發(fā)生紊亂所引起的[7，8]。CD3+

表3 PR組化療前、化療2、4周后T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞活性比較

細(xì)胞是體內(nèi)總T細(xì)胞水平的代表，主要分為CD4+和CD8+細(xì)胞亞群；其中CD4+主要是輔助誘導(dǎo)體內(nèi)的其他免疫細(xì)胞，進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤的效果，同時(shí)可以參與巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞以及細(xì)胞毒性T細(xì)胞的激活，發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤的效果[9，10]。當(dāng)患者體內(nèi)的CD3+和CD4+水平下降時(shí)，表明患者體內(nèi)免疫功能下降[11]。抑制性的CD8+細(xì)胞可以抑制體內(nèi)CD4+和B細(xì)胞的功能，進(jìn)而抑制體內(nèi)抗體的形成和細(xì)胞免疫應(yīng)答的產(chǎn)生，當(dāng)CD8+水平升高時(shí)，表示患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的持續(xù)增殖[12]。CD4+/CD8+下降時(shí)表明機(jī)體中T細(xì)胞亞群水平失衡，這也就提示我們機(jī)體內(nèi)的免疫水平下降。因此，臨床上將CD3+、CD4+、CD4+/CD8+等水平的變化作為臨床上診斷、治療和評(píng)估惡性腫瘤的重要指標(biāo)[13]。NK細(xì)胞可以具有直接發(fā)揮細(xì)胞毒活性、介導(dǎo)抗體依賴的細(xì)胞毒作用和分泌多種免疫調(diào)節(jié)因子的作用，進(jìn)而直接對(duì)腫瘤產(chǎn)生殺傷效果[14]。且NK細(xì)胞可以通過分泌細(xì)胞因子對(duì)免疫應(yīng)答發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，是機(jī)體內(nèi)免疫防御體系的主要防線[15]。NK細(xì)胞活性的下降，是患者體內(nèi)腫瘤發(fā)生和發(fā)展的主要原因[16]。

本次研究對(duì)我院收治的66例DLBCL患者和45例健康體檢者進(jìn)行研究，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測兩組納入者體內(nèi)T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞活性的變化。結(jié)果顯示，對(duì)照組外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+以及NK細(xì)胞活性水平均顯著高于DLBCL患者，而CD8+水平顯著低于DLBCL患者。表明DLBCL患者體內(nèi)細(xì)胞免疫功能明顯下降，這一情況可能是導(dǎo)致DLBCL患者發(fā)病的因素。同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)，CR組患者經(jīng)過治療4周后的T淋巴細(xì)胞亞群水平和NK細(xì)胞活性均顯著優(yōu)于治療前和治療2周后。表明T淋巴細(xì)胞亞群水平和NK細(xì)胞活性的變化可作為臨床上判斷DLBCL患者治療效果評(píng)估的指標(biāo)。根據(jù)這一指標(biāo)的變化對(duì)患者的治療方案進(jìn)行優(yōu)化和改進(jìn)，有助于提高患者的臨床療效，促進(jìn)患者康復(fù)，具有較高的臨床指導(dǎo)作用。

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