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        廣金錢草提取物對尿石癥大鼠腎功能的保護作用

        2018-06-05 04:09:51王志勇楊德慧劉曉偉高旭紅
        中國老年學(xué)雜志 2018年10期
        關(guān)鍵詞:草酸鈣結(jié)晶空白對照

        劉 英 王志勇 楊德慧 劉曉偉 高旭紅 徐 輝

        (承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科,河北 承德 067000)

        近年來,泌尿系結(jié)石的發(fā)病率在我國有明顯增加趨勢,發(fā)病年齡也日趨年輕化〔1〕。祖國醫(yī)學(xué)現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn),澤瀉、伏苓、金錢草及排石湯顆粒、結(jié)石康膠囊等藥物具有降低尿液中結(jié)晶鹽濃度和增加尿液中抑制劑濃度、預(yù)防或降低結(jié)石形成的功效〔2〕。金錢草為治療泌尿系結(jié)石的首選中藥,具有清熱利濕、通淋排石之功效?,F(xiàn)代中藥化學(xué)和藥理學(xué)研究表明,金錢草含有多種有效成分,如黃酮類、酚性成分、膽堿、氨基酸等。體外研究表明,金錢草水煎液對草酸鈣結(jié)晶的成核具有一定的促進作用,進而降低尿液的過飽和狀態(tài)〔3〕。本實驗使用乙二醇+氯化銨制造尿石癥大鼠模型,探討廣金錢草提取物對尿石癥大鼠腎功能的保護作用。

        1 材料與方法

        1.1動物與藥物 SPF級Wistar雄性、體質(zhì)量(200±20)g大鼠60只,購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司〔合格證號:SCXK(京)2016-0064〕,自由飲水和標準實驗室飲食。廣金錢草提取物(陜西帕尼爾生物科技有限公司)。

        1.2主要試藥與儀器 CX31RBSF型顯微鏡(日本Olympus公司);Fresco 17型低溫離心機(日本日立公司);全自動生化分析儀(Hoffmann-La Roche 有限責(zé)任公司);乙二醇、氯化銨(天津市天力化學(xué)試劑有限公司);超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、還原型谷胱甘肽(GSH)(南京建成生物工程研究所);染色試劑盒(上海杰美基因醫(yī)藥科技有限公司)

        1.3方法

        1.3.1動物模型的制備、分組與給藥處理 隨機分為空白對照組、模型組、廣金錢草低、中、高劑量組,每組10只??瞻讓φ战M自由飲水,其組50只大鼠給予1%乙二醇+1%氯化銨自由飲水,連續(xù)喂食2 w,腎小管出現(xiàn)結(jié)晶,表明模型建立成功。2 w后,低、中、高劑量組給予廣金錢草提取物80、160、320 mg·kg-1·d-1灌胃,連續(xù)4 w。

        1.3.2觀察指標 ①尿量及尿生化指標:給藥3 w后,收集24 h尿液,采用鉻酸鉀氧化甲基紅催化光度法測定尿草酸〔計算公式:C(mmol/L)=(Ab-Au)/(Ab-As)×0.01〕,采用漠丙酮硫脈比色法測定尿檸檬酸〔計算公式為尿檸檬(mmol)=樣品光密度/標準吸光度×1.038〕,將100 μl尿液均勻滴至干凈載玻片,置于偏光顯微鏡檢測尿結(jié)晶。

        ②給藥4 w后,腹腔注射10%水合氯醛4 ml/kg麻醉大鼠,經(jīng)腹部下腔靜脈采集血液,3 500 r/min低溫離心10 min,取上清液。采用AU800全自動生化分析儀檢測大鼠血液中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、鈣(Ca2+)、磷(P)的水平;摘取各組大鼠腎臟,采用硫代巴比妥酸法測定MDA,利用黃嘌呤氧化酶-氮藍四唑還原法測定SOD,GSH;取大鼠左腎,4%多聚甲醛固定,石蠟包埋后,切片,用蘇木素-伊紅(HE)染色,置于光學(xué)顯微鏡下觀察腎組織草酸鈣結(jié)晶形態(tài)、沉積分布及腎組織病理變化。

        1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS14.0軟件,多組比較采用LSD法。

        2 結(jié) 果

        2.1廣金錢草提取物對尿量及尿生化指標的影響 與空白對照組相比,模型組尿草酸水平及尿鈣水平顯著升高(P<0.05)。模型組24 h尿量明顯高于空白對照組,廣金錢草提取物低、中、高劑量組24 h尿量明顯高于空白對照組和模型組(P<0.05)。模型組、廣金錢草提取物低劑量組尿Ca2+明顯高于空白對照組(P<0.05);廣金錢草提取物中、高劑量組尿Ca2+明顯低于模型組(P<0.05),廣金錢草提取物高劑量組的尿草酸低于模型組(P<0.05)。與空白對照組相比,廣金錢草提取物高劑量組尿檸檬酸明顯升高(P<0.05);各組尿Mg2+水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

        2.2廣金錢草提取物對血生化指標的影響 與空白對照組相比,模型組血BUN、Cr水平顯著升高(P<0.05);與模型組比較,廣金錢草提取物低、中、高劑量組大鼠血BUN、Cr水平明顯下降(P<0.05);而各組大鼠血P、Mg2+、Ca2+水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

        表1 各組尿量及尿生化指標檢測結(jié)果

        與空白對照組比較:1)P<0.05;與模型組比較:2)P<0.05;下表同

        表2 各組血生化指標檢測結(jié)果

        2.3廣金錢草提取物對腎組織SOD活力及MDA含量的影響 與空白對照組大鼠相比,模型組腎臟組織GSH、SOD水平顯著降低(P<0.05);而與模型組比較,廣金錢草提取物低、中、高組GSH、SOD含量顯著升高(P<0.05);模型組腎臟組織中MDA水平顯著高于空白對照組(P<0.05),與模型組相比,廣金錢草提取物各劑量組MDA含量明顯下降(P<0.05)。廣金錢草提取物各劑量組大鼠腎臟草酸鈣結(jié)晶評分明顯高于空白對照組,但顯著低于模型組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

        表3 各組血生化指標檢測結(jié)果

        2.4廣金錢草提取物對腎組織草酸鈣沉積的影響 顯微鏡觀察結(jié)果顯示,HE染色的草酸鈣晶體為淡灰色至白色透明狀晶體(圖1);Von Kossa染色的草酸鈣晶體呈黑色(圖2)。腎臟組織病理學(xué)分析顯示,空白對照組無明顯病理變化和草酸鈣晶體沉積。模型組腎組織內(nèi)有大量草酸鈣晶體形成及沉積(圖2),主要存在于腎髓質(zhì)內(nèi),腎乳頭及腎皮質(zhì)、腎小管上皮細胞腫脹、變性、壞死顯著,管腔擴張,管腔內(nèi)存在草酸鈣晶體沉積,腎間質(zhì)發(fā)生明顯的慢性間質(zhì)性炎癥。與模型組比較,廣金錢草中、高劑量組腎組織中草酸鈣晶體沉積顯著減少,結(jié)構(gòu)破壞減輕,管腔擴張程度較輕,病理損傷明顯減輕。

        圖1 各組腎組織HE染色結(jié)果(×100)

        圖2 各組腎組織Von Kossa染色結(jié)果(×100)

        3 討 論

        隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展與進步,泌尿系結(jié)石微創(chuàng)和無創(chuàng)技術(shù)在臨床中應(yīng)用廣泛,但手術(shù)易引起急性腎損傷,導(dǎo)致腎功能減退的發(fā)生,出現(xiàn)多種并發(fā)癥,如穿孔、出血、結(jié)石殘余等。泌尿系結(jié)石模型是研究結(jié)石形成及防治的重要方法〔4〕,采用1%乙二醇+1%氯化銨飲水飼養(yǎng),建模時間短,自由飲水4 w。可有效建立Wistar大鼠腎草酸鈣模型。病理切片HE和Von Kossa染色證明有效建立了大鼠草酸鈣腎結(jié)石模型。本研究結(jié)果表明廣金錢草提取物有利尿作用,增加尿量,利于草酸鈣結(jié)晶排出,降低尿液飽和度,一方面可以沖刷腎盂,另一方法也避免結(jié)晶的形成或滯留。廣金錢草提取物組尿Ca2+明顯降低,推測是尿鈣與草酸結(jié)合形成結(jié)晶。BUN、Cr是評價腎功能常用指標,可以提示腎功能損害程度〔5〕。本實驗結(jié)果顯示,廣金錢草提取物可以保護腎功能,減輕腎臟損傷。MDA是ROS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激的最常見脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物〔6,7〕,本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),廣金錢草提取物還具有抗氧化和預(yù)防結(jié)石復(fù)發(fā)等作用。腎臟組織病理學(xué)分析也顯示,廣金錢草提取物可以有效緩解造模導(dǎo)致的腎損害。

        4 參考文獻

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        4李笑然,岳中瑾,裴 薇.4種大鼠腎草酸鈣結(jié)石模型的比較〔J〕.現(xiàn)代泌尿外科雜志,2013;18(4):329.

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