劉 華，周迎春，何長(zhǎng)生，沈 艷，王 倩，王 軍，王 維，占松鶴，朱良強(qiáng)，祁克宗

（1. 安徽省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，安徽合肥 230061；2. 獸醫(yī)病理生物學(xué)與疫病防控安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥 230036）

豬偽狂犬?。≒seudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的一種重要傳染病，可發(fā)生在各生長(zhǎng)階段豬群，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)危害極大。我國(guó)自1947年發(fā)現(xiàn)本病以來(lái)，相繼已有30多個(gè)省報(bào)道了PR的發(fā)生與流行[1-5]，造成重大經(jīng)濟(jì)損失。2012年，我國(guó)將PR列入優(yōu)先防治動(dòng)物疫病病種，并作為種畜場(chǎng)凈化的重點(diǎn)病種，要求到2020年全國(guó)所有種豬場(chǎng)都達(dá)到PR凈化的目標(biāo)。2015年以來(lái)，安徽省按照中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心要求，選取12個(gè)豬場(chǎng)作為國(guó)家級(jí)固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)，開(kāi)展了包括PR在內(nèi)的相關(guān)豬病監(jiān)測(cè)工作，從而為其凈化提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 監(jiān)測(cè)點(diǎn)選擇

結(jié)合安徽省養(yǎng)豬分布情況，選取具有代表性的縣，確定12個(gè)使用PRV-gE基因缺失株疫苗的豬場(chǎng)作為固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)。

1.2 預(yù)調(diào)查

2015年春季，對(duì)12個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)豬場(chǎng)進(jìn)行預(yù)調(diào)查和采樣檢測(cè)。調(diào)查內(nèi)容包括豬場(chǎng)環(huán)境、養(yǎng)殖結(jié)構(gòu)、飼養(yǎng)管理、消毒措施、種源管理、免疫情況、監(jiān)測(cè)情況以及生產(chǎn)性能等。按照簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣方法，抽取各場(chǎng)的血清樣品，采用IDEXX公司的PRV-gE ELISA試劑盒檢測(cè)，估算不同規(guī)模豬場(chǎng)的預(yù)期流行率[6]。

1.3 抽樣策略

2015—2017年，每年6—7月將12個(gè)豬場(chǎng)全部納入抽樣范圍，分別進(jìn)行橫斷面研究。在個(gè)體水平，按照估計(jì)流行率方法，采用分層隨機(jī)抽樣策略[7]。首先，計(jì)算每個(gè)場(chǎng)所需的個(gè)體樣品數(shù)量，即按95%置信水平（CL）和15%可接受絕對(duì)誤差（d），根據(jù)預(yù)調(diào)查結(jié)果，設(shè)存欄量大于1 000頭豬場(chǎng)的預(yù)期個(gè)體流行率為23%（p），存欄量小于1 000頭的預(yù)期流行率為15%（p），根據(jù)公式n=1.962×p（1-p）/d2，計(jì)算各場(chǎng)所需的樣品總數(shù)。將每個(gè)豬場(chǎng)分成種豬（經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬和種公豬）和其他豬（育肥豬和仔豬）兩層，按存欄比例，在各層中隨機(jī)抽取樣品。每年各場(chǎng)的抽樣數(shù)量和分配，應(yīng)考慮存欄量和各層比例的變化（表1）。

表1 定點(diǎn)監(jiān)測(cè)豬場(chǎng)的存欄及抽樣情況 單位：頭/份

1.4 血樣采集和檢測(cè)

無(wú)菌采集豬前腔靜脈血3～5 mL，析出血清于滅菌的離心管內(nèi)，逐份進(jìn)行編號(hào)，?20 ℃?zhèn)錂z。使用IDEXX試劑盒檢測(cè)PRV gE-ELISA抗體。

1.5 個(gè)體流行率估計(jì)

參照Dohoo等[7]和孫向東等[8]的方法，通過(guò)抽樣權(quán)重分析，計(jì)算出每個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的個(gè)體流行率和95%置信區(qū)間（95%CI）。將12個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的每個(gè)場(chǎng)當(dāng)作一個(gè)層，用上述方法計(jì)算整體的個(gè)體表觀流行率和95%置信區(qū)間。真實(shí)個(gè)體流行率根據(jù)ELISA試劑盒試驗(yàn)敏感性（Se）和特異性（Sp）計(jì)算。計(jì)算公式：TP=（AP+Sp-1）/（Se+Sp-1）。個(gè)體陽(yáng)性率的95%CI，根據(jù)公式計(jì)算：。其中，p是個(gè)體陽(yáng)性率，Z為正態(tài)分布中概率為0.05所對(duì)應(yīng)的值，n為抽樣數(shù)量。

2 結(jié)果

2.1 個(gè)體流行率

檢測(cè)結(jié)果顯示（表2）：2015年有5個(gè)豬場(chǎng)檢測(cè)出PRV-gE抗體，通過(guò)權(quán)重分析，個(gè)體表觀流行率最高為77.0%（95%CI：62.9%～91.2%）；2016年僅有1個(gè)豬場(chǎng)為PRV-gE抗體陽(yáng)性，個(gè)體表觀流行率為6.1%（95%CI：0～13.4%）；2017年有4個(gè)豬場(chǎng)為陽(yáng)性，個(gè)體表觀流行率最高的為53.0%（95%CI：28.9%～77.1%）。

表2 2015—2017年安徽省定點(diǎn)監(jiān)測(cè)豬場(chǎng)PRV陽(yáng)性數(shù)及血清學(xué)流行率

對(duì)12個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)進(jìn)行權(quán)重分析，計(jì)算每年整體的個(gè)體表觀流行率（表3）。根據(jù)ELISA診斷試劑盒的敏感性（Se=98%）和特異性（Sp=99%）[9]，計(jì)算每年12個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的PR個(gè)體真實(shí)流行率。結(jié)果顯示：2015年監(jiān)測(cè)點(diǎn)內(nèi)個(gè)體真實(shí)流行率為33.6%（95%CI：27.8%～39.5%），2016年為1.1%（95%CI：0～4.0%），2017年為 6.9%（95%CI：3.0%～10.7%）。用SPSS 20統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)每年個(gè)體流行率進(jìn)行Fisher's精確檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)差異極顯著且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表3 2015—2017年安徽省定點(diǎn)監(jiān)測(cè)豬場(chǎng)豬群PRV陽(yáng)性數(shù)及個(gè)體血清流行率

2.2 不同豬群情況

對(duì)12個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)內(nèi)的不同豬群，根據(jù)分層抽樣情況，對(duì)各層豬群每年的PRV個(gè)體陽(yáng)性率進(jìn)行分析。結(jié)果顯示：每年種豬的個(gè)體陽(yáng)性率比其他豬高；經(jīng)卡方和Fisher精確檢驗(yàn)，2015年差異顯著且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（0.01＜P＜0.05），2016年差異不顯著（P＞0.05），2017年差異極顯著且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

以其他豬的檢測(cè)結(jié)果為參考，對(duì)種豬進(jìn)行感染風(fēng)險(xiǎn)分析。結(jié)果顯示（表4）：2015年監(jiān)測(cè)點(diǎn)內(nèi)種豬感染PRV風(fēng)險(xiǎn)較高，約為其他豬的2.0倍（95%CI：1.0～3.8），2017年 約 為 4.5倍（95%CI：1.9～11.0），且都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

2.3 不同規(guī)模豬場(chǎng)情況

對(duì)12個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)內(nèi)的不同豬群，根據(jù)存欄量情況，對(duì)存欄≥1 000頭和＜1 000頭的豬場(chǎng)進(jìn)行分類，對(duì)這兩類豬場(chǎng)中每年的PRV個(gè)體陽(yáng)性率進(jìn)行分析。經(jīng)卡方和Fisher的精確檢驗(yàn)，2015年存欄量≥1 000頭豬場(chǎng)的PRV個(gè)體陽(yáng)性率較高，為27.0%（95%CI：20.8%～34.0%）差異極顯著且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；2016年二者差異不顯著（P＞0.05）；2017年存欄量＜1 000頭豬場(chǎng)的PRV個(gè)體陽(yáng)性率較高，為17.9%（95% CI：10.2%～28.3%），二者差異極顯著且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

以＜1 000頭豬場(chǎng)的個(gè)體流行率為參考，對(duì)≥1 000頭的豬場(chǎng)個(gè)體進(jìn)行感染風(fēng)險(xiǎn)分析。結(jié)果顯示（表5）：2015年存欄量≥1 000頭豬場(chǎng)感染PRV風(fēng)險(xiǎn)是存欄量＜1 000頭豬場(chǎng)的2.9倍（95%CI：1.4～6.1），2017年相反，感染風(fēng)險(xiǎn)下降，約為存欄量＜1 000頭豬場(chǎng)的 20%（95%CI：0.1～0.5），且這些差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表4 不同豬群豬偽狂犬病血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

表5 不同規(guī)模豬偽狂犬病血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

3 討論

檢測(cè)結(jié)果顯示：12個(gè)固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)3年期間有8個(gè)豬場(chǎng)檢出豬偽狂犬病感染抗體，個(gè)別豬場(chǎng)個(gè)體表觀流行率最高可達(dá)77.0%（95%CI：62.9%～91.2%），說(shuō)明豬場(chǎng)的PRV的帶毒較為普遍；個(gè)體真實(shí)流行率從2015年的33.6%（95%CI：27.8%～39.5%） 降 為 2017年 的 6.9%（95%CI：3.0%～10.7%），說(shuō)明這些場(chǎng)自行實(shí)施凈化措施后，推動(dòng)了PRV感染率的下降。部分豬場(chǎng)盲目樂(lè)觀凈化結(jié)果，松懈生物安全和生產(chǎn)管理，可能是導(dǎo)致2017年陽(yáng)性率出現(xiàn)小幅反彈的原因，但有待進(jìn)一步調(diào)查。

12個(gè)豬場(chǎng)所有種豬群的PRV感染風(fēng)險(xiǎn)較其他豬群要高，這與本實(shí)驗(yàn)室往年的監(jiān)測(cè)結(jié)果和其他學(xué)者的研究結(jié)果一致[6，10]。楊濤等[10]研究認(rèn)為，豬場(chǎng)偽狂犬病的綜合防控重點(diǎn)應(yīng)放在種豬群上。有研究認(rèn)為，母豬可通過(guò)種公豬配種、外購(gòu)精液、外購(gòu)種豬混群等感染PRV，仔豬則通過(guò)母豬感染垂直感染，后備母豬、育肥豬等基本是從這些仔豬中發(fā)展而來(lái)，帶毒豬可通過(guò)飛沫以及帶毒老鼠、犬貓等傳播，導(dǎo)致病毒在豬場(chǎng)內(nèi)形成惡性循環(huán)[10-14]。因此，種豬是豬場(chǎng)PR凈化的關(guān)鍵，需要在檢疫隔離、引種和精液檢測(cè)等方面采取適當(dāng)干預(yù)措施，降低種豬群感染風(fēng)險(xiǎn)。

本實(shí)驗(yàn)室2012年的監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，母豬存欄量＜200頭的豬場(chǎng)，PRV感染抗體陽(yáng)性率高于＞200頭的種豬場(chǎng)[15]。2015年監(jiān)測(cè)的結(jié)果顯示，存欄量越大，豬場(chǎng)的PRV感染風(fēng)險(xiǎn)反而越高。楊濤等[16]認(rèn)為，中小規(guī)模豬場(chǎng)由于多采取自繁自養(yǎng)方式，在外購(gòu)種豬、人工授精等方面的引入風(fēng)險(xiǎn)較大型豬場(chǎng)要低，因此通過(guò)這些途徑傳入PR的可能性比較小。2017年，存欄量小的豬場(chǎng)感染風(fēng)險(xiǎn)反而高。綜合分析后推測(cè)，大規(guī)模豬場(chǎng)的PRV感染率總體呈下降趨勢(shì)，可能與大型規(guī)模場(chǎng)在采取凈化措施后能夠較好地維持有關(guān)。而中小規(guī)模豬場(chǎng)在取得階段性成果后，可能在管理上會(huì)出現(xiàn)松懈，致使出現(xiàn)PRV的二次污染，具體原因尚待進(jìn)一步研究。

2012年安徽省規(guī)模化種豬場(chǎng)PRV群流行率約為66.7%（95%CI：57.4%～76.0%），個(gè)體流行率約為19.0%（95%CI：17.7%～20.3%）[15]。2013年安徽省中小規(guī)模種豬場(chǎng)PRV群流行率為34.1%（95%CI：29.3%～38.9%）[11]。2014年黃曉慧等[17]從送檢的2 231份豬血清樣品中檢出259份PRV-gE抗體。本次研究由于選取的豬場(chǎng)數(shù)量和個(gè)體數(shù)量均較少，因此無(wú)法精確估計(jì)2015—2017年全省總體情況。在今后研究中，應(yīng)增設(shè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)數(shù)量并減少隨機(jī)誤差，以掌握全省PRV流行趨勢(shì)和群內(nèi)傳播風(fēng)險(xiǎn)因素，從而有助于采取針對(duì)性的防控措施，達(dá)到群體凈化的目的。

4 結(jié)論

本調(diào)查利用橫斷面研究方法，對(duì)安徽省12個(gè)固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)豬群進(jìn)行分層隨機(jī)抽樣，開(kāi)展了PR個(gè)體流行率估計(jì)。從8個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)中檢出PRV感染抗體，說(shuō)明安徽省病毒感染面依然較廣；12個(gè)固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)的PRV平均個(gè)體真實(shí)流行率從2015年的33.6%下降為2017年的6.9%，說(shuō)明PR已得到有效控制；種豬群的個(gè)體陽(yáng)性率高于其他豬群，存欄量小于1 000頭豬場(chǎng)的個(gè)體陽(yáng)性率增高，表明今后應(yīng)重點(diǎn)加強(qiáng)對(duì)種豬群和小規(guī)模飼養(yǎng)豬群的PR防控。

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