賈青松，李鳳琴，胡 磊，宋紹怡，楊 鍵

（1. 西昌市邛海瀘山管理局，四川西昌 615000；2. 西昌學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，四川西昌 615000）

結(jié)核?。═uberculosis）是一種古老的疾病，廣泛流行于世界各地，是由結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis）引起的一種人和動物共患的慢性傳染病，也是重要的人猴共患病之一。其特征是病情發(fā)展緩慢、漸行性消瘦、咳嗽、衰竭，并在多種組織器官形成結(jié)核結(jié)節(jié)和干酪樣壞死或鈣化，對人類和獼猴的健康威脅極大[1]。人類結(jié)核病一旦感染猴群，可造成整個猴群的毀滅[2]。非人靈長類結(jié)核病病原與人類感染的病原一樣，主要是結(jié)核分枝桿菌（M.tuberculosis）[3]。瀘山是邛海瀘山風(fēng)景名勝區(qū)的重要組成部分，位于四川省西昌市城東南5 km處，主峰海拔2 317 m，相對高差827 m，面積36.1 km2。據(jù)2017年4月調(diào)查，瀘山景區(qū)內(nèi)現(xiàn)存3個猴群（153±6）只獼猴。近年來，隨著人類旅游活動的加劇，獼猴咬傷游人事件連年居高不下，2015年發(fā)生167起，2016年110起，2017年105起。這極大增加了人猴結(jié)核病互相傳播的風(fēng)險。為保護(hù)人類和瀘山猴群健康，做好景區(qū)人獸共患病的公共衛(wèi)生工作，景區(qū)管理部門協(xié)同相關(guān)部門按照《動物防疫法》《陸生野生動物疫源疫病監(jiān)測防控管理辦法》和《陸生野生動物疫源疫病檢測技術(shù)規(guī)范》的要求，進(jìn)行了疫源疫病監(jiān)測和防控，并將瀘山獼猴的結(jié)核病感染情況也納入了監(jiān)測范圍。本調(diào)查初步了解了瀘山景區(qū)內(nèi)獼猴群的結(jié)核桿菌攜帶狀況。這有助于評估瀘山景區(qū)內(nèi)獼猴群結(jié)核桿菌的感染風(fēng)險，也為景區(qū)管理部門開展景區(qū)人獸共患病預(yù)防和控制，保護(hù)人類和野生猴群健康提供了依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

2016年12月，經(jīng)四川省林業(yè)野生保護(hù)部門審批同意，由西昌市邛海瀘山管理局、西昌學(xué)院、西華師范大學(xué)組成的瀘山獼猴種群生態(tài)研究及主要人獸共患病檢測與預(yù)警課題組，利用瀘山猴群抓捕分流機(jī)會，在103只被捕獲獼猴中，隨機(jī)采集了47只的血液樣本（每份血樣5 mL）。

1.2 檢測方法

采用夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將血樣、陰性和陽性對照，按比例稀釋，最終稀釋5倍。分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包備板孔底部，加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37 ℃反應(yīng)30 min；洗板5次，加入酶標(biāo)試劑，37 ℃反應(yīng)30 min；洗板5次，加入顯色液A、B，37 ℃顯色10 min；加入終止液，15 min內(nèi)在酶標(biāo)儀中以波長450 nm測OD值。以標(biāo)準(zhǔn)物濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線；根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度。依據(jù)說明書，濃度≤100 pg/mL為陰性，濃度在100～384 pg/mL之間為可疑，濃度≥384 pg/mL為陽性。因樣本采用5倍稀釋，故濃度≤20 pg/mL為陰性，濃度在20～76.8 pg/mL之間為可疑，濃度≥76.8 pg/mL為陽性。

2 結(jié)果

全部47份樣本檢測結(jié)果都小于20 pg/mL，因此均判為陰性。具體結(jié)果見表1。

表1 瀘山猴群血清結(jié)核桿菌ELISA檢測結(jié)果單位：pg/mL

3 討論

目前活猴感染結(jié)核病的檢疫方法主要是結(jié)核菌素試驗(yàn)。而結(jié)核菌素試驗(yàn)的敏感性和特異性較低，因而給結(jié)核病的檢疫和監(jiān)測帶來了困難[4]，加之有獼猴停留時間的限制，因此本次檢測采用了夾心酶聯(lián)免疫吸附法。檢測結(jié)果全部為陰性，表明瀘山獼猴群沒有感染結(jié)核桿菌。這與20多年來瀘山猴群健康情況穩(wěn)定，同時在日常觀測中也沒有發(fā)現(xiàn)獼猴有疑似結(jié)核病癥狀的情況相吻合。

本次檢測結(jié)果全部為陰性的原因可能有以下幾種：一是瀘山是孤山，處于相對獨(dú)立的生態(tài)環(huán)境，缺乏動物通道，與周邊其他動物接觸機(jī)會少，且目前人群卡介苗接種普及率高，人獸結(jié)核病互相傳染風(fēng)險較??；二是瀘山猴群繁衍年代較近，是20年前引進(jìn)的十幾只猴子繁殖起來的，屬于封閉繁殖，沒有外來種群流入，使得瀘山猴子結(jié)核桿菌感染幾率較低；三是邛瀘景區(qū)加大了游客文明旅游勸導(dǎo)，減少了游客直接接觸猴子的機(jī)會；四是有多種因素導(dǎo)致存在假陰性樣本的可能。酶聯(lián)免疫吸附法雖然靈敏度高，特異性好，但操作各環(huán)節(jié)（如加樣不規(guī)范、孵育時間不夠、洗板次數(shù)過多、顯色劑過期等因素）對實(shí)際檢測結(jié)果有一定的影響，當(dāng)然也存在部分獼猴初期感染，尚未產(chǎn)生可檢出抗體的可能性。

下一步，景區(qū)應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)瀘山猴群結(jié)核病等野生動物人獸共患病疫情的監(jiān)測，開展野生動物人獸共患病防治知識的宣傳教育，普及結(jié)核病等傳染病的基本知識和防治知識；加強(qiáng)文明旅游宣傳，讓游客與野生動物保持距離，以保護(hù)游客和野生動物的健康。

4 結(jié)論

本次檢測采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定標(biāo)本中的抗原，對瀘山獼猴群結(jié)核桿菌感染情況進(jìn)行了調(diào)查，發(fā)現(xiàn)全部47份樣本都為陰性，表明瀘山景區(qū)整個獼猴群感染結(jié)核病的危險不大，獼猴與人類互相傳染結(jié)核病的可能性較小。本次調(diào)查結(jié)果可以消除游客顧慮，但為維持猴群的無疫狀態(tài)，景區(qū)應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)猴群結(jié)核病監(jiān)測，開展結(jié)核病防治宣傳教育，加強(qiáng)文明旅游宣傳，以保障景區(qū)的公共衛(wèi)生安全。

[1] 李清艷. 新編動物傳染病學(xué)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2012：79-81.

[2] 罕園園，高家紅，羅志武，等. 獼猴結(jié)核分枝桿菌PCR檢測方法的建立與初步應(yīng)用[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2008，18（9）：81-85.

[3] PRUSINER S B. Novel proteinaceous infectious particle cause scrapic[J]. Science，1982，216：136-144.

[4] 張鈺，黃韌. 靈長類結(jié)核病新的檢疫和診斷方法[J].中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報，2004，12（4）：251-254.