楊德全，陳 岡，楊顯超，鞠厚斌，沈莉萍，盧 軍，徐 鋒，周錦萍，劉春國(guó)，王靖飛

（1. 上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201103；2. 金山區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201500；3. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱 150001）

破傷風(fēng)又名“強(qiáng)直癥”，俗名“鎖口風(fēng)”，是由破傷風(fēng)梭菌經(jīng)傷口感染后產(chǎn)生外毒素，侵害神經(jīng)組織引起的一種急性、創(chuàng)傷性、中毒性人獸共患傳染病。本病在全球各地均有散發(fā)流行，無(wú)明顯季節(jié)性，但春季發(fā)病率較高。各種家畜均可感染，其中牛易感性較大[1]，任何品種、年齡和性別的牛都能發(fā)生，但3歲以下牛最易感。牛破傷風(fēng)主要經(jīng)創(chuàng)傷感染，如手術(shù)、斷尾和去勢(shì)等，潛伏期一般為1～2 周，急性病例為1～2 d，慢性患牛病程可長(zhǎng)達(dá)數(shù)月。本病在獸醫(yī)臨床上一般呈零星散發(fā)，如果不治療或治療不及時(shí)，患病牛很少存活，死亡率較高。

2017年7月3日，上海市金山區(qū)某奶牛場(chǎng)部分奶牛出現(xiàn)牙關(guān)緊閉，不能采食和飲水，流涎，兩眼呆滯，瞬膜突出，全身肌肉緊張，頭頸伸直等癥狀，隨后陸續(xù)死亡。為了解疫病發(fā)生經(jīng)過(guò)，查明發(fā)病原因，7月6日金山區(qū)動(dòng)物疫病控制中心介入調(diào)查，7月14日市、區(qū)兩級(jí)動(dòng)物疫病控制中心組成調(diào)查組到現(xiàn)場(chǎng)開(kāi)展了緊急流行病學(xué)調(diào)查。

1 方法

1.1 病例定義

2017年7月3日至7月14日，在該奶牛場(chǎng)出現(xiàn)牙關(guān)緊閉，不能采食和飲水，流涎，反芻停止，瘤胃鼓脹，兩眼呆滯，瞬膜突出，全身肌肉緊張，頭頸伸直，凹背弓腰，腹部卷縮，尾根高舉，四肢開(kāi)張如木馬狀以及死亡等至少一種臨床癥狀的奶牛定義為陽(yáng)性病例。

1.2 調(diào)查方法

1.2.1 問(wèn)卷調(diào)查 主要內(nèi)容包括存欄量、飼養(yǎng)情況、發(fā)病情況、臨床癥狀，以及是否混養(yǎng)其他動(dòng)物，是否引進(jìn)或出售牛只，是否有外來(lái)車輛進(jìn)出，疫病既往史，發(fā)病后采取的干預(yù)性措施等。

1.2.2 現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查 通過(guò)多次與場(chǎng)主和飼養(yǎng)員溝通，了解該奶牛場(chǎng)的飼養(yǎng)管理、衛(wèi)生管理、奶牛調(diào)運(yùn)等基本情況，繪制發(fā)病奶牛場(chǎng)布局圖，描述疫情空間分布；現(xiàn)場(chǎng)觀察病例癥狀、圈舍基本情況、周圍養(yǎng)殖環(huán)境及易感動(dòng)物分布情況。

1.2.3 查閱資料 查閱養(yǎng)殖場(chǎng)免疫檔案和發(fā)病前后的診斷和用藥情況；查閱金山區(qū)歷史天氣記錄。

1.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

無(wú)菌條件下，采集2頭發(fā)病奶牛血液進(jìn)行染色鏡檢；采集心臟和肺臟樣品進(jìn)行細(xì)菌分離。

1.4 數(shù)據(jù)分析

對(duì)疫病進(jìn)行時(shí)間、空間和群間分布描述，分析疫病流行規(guī)律，探討可能存在的風(fēng)險(xiǎn)因素。應(yīng)用Epi info 7對(duì)收集的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 奶牛場(chǎng)概況

該奶牛場(chǎng)位于東經(jīng) 121?12′，北緯 30?49′，始建于2003年，共有4棟牛舍，布局分區(qū)合理（圖1），目前存欄奶牛416頭。該場(chǎng)有員工14名，其中場(chǎng)長(zhǎng)1名、獸醫(yī)1名、擠奶工4名、清潔工4名、飼養(yǎng)員1名、配料工2名、開(kāi)機(jī)工1名。奶牛主要免疫口蹄疫和炭疽疫苗；飼料為購(gòu)進(jìn)原料后自己加工的，飼草為國(guó)外進(jìn)口的；車輛和人員進(jìn)入均經(jīng)過(guò)消毒，牛舍和運(yùn)動(dòng)場(chǎng)均每周消毒1次；奶牛飲水為自來(lái)水；牛糞人工清理，每天1次；采用人工授精方式配種，精液進(jìn)口自美國(guó)，并進(jìn)行了檢測(cè)；最近1年內(nèi)無(wú)奶牛調(diào)入情況，但每月有淘汰牛被調(diào)出至浙江嘉善；有奶牛斷尾史，2017年6月27日對(duì)2號(hào)和3號(hào)棟舍的211頭奶牛集中用PVC水管剪刀進(jìn)行了斷尾；斷尾前，未對(duì)牛尾和剪刀進(jìn)行消毒，只是在斷尾后用碘酊對(duì)創(chuàng)口進(jìn)行集中消毒；未進(jìn)行抗生素治療。

圖1 發(fā)病奶牛場(chǎng)場(chǎng)區(qū)布局

2.2 臨床及剖檢變化

發(fā)病奶牛主要表現(xiàn)為牙關(guān)緊閉，不能采食和飲水，流涎，反芻停止，瘤胃鼓脹，兩眼呆滯，瞬膜突出，全身肌肉緊張，頭頸伸直，凹背弓腰，腹部卷縮，尾根高舉，四肢開(kāi)張如木馬狀（圖2）。

圖2 發(fā)病奶牛臨床癥狀

剖檢2頭病死奶牛發(fā)現(xiàn)：尸僵明顯；肺充血、水腫，黏膜和漿膜上有細(xì)小出血點(diǎn)（圖3）；心冠脂肪出血（圖4），心肌變性；脊髓和脊髓膜充血或點(diǎn)狀出血；肢體肌肉間結(jié)締組織發(fā)生漿液浸潤(rùn)性變化。

圖3 漿膜上有細(xì)小出血點(diǎn)

圖4 心冠脂肪出血

2.3 天氣情況

據(jù)了解，7月3日發(fā)病前兩周，該地持續(xù)陰雨，平均氣溫25 ℃左右；發(fā)病期間，地區(qū)氣溫升高，平均30 ℃左右。2017年6—7月的地區(qū)氣溫如圖5所示。

圖5 2017年6—7月該地氣溫走勢(shì)

2.4 疫病經(jīng)過(guò)

2.4.1 時(shí)間分布 7月3日該場(chǎng)奶牛開(kāi)始發(fā)病，4日出現(xiàn)死亡，6日區(qū)動(dòng)物疫病控制中心介入調(diào)查，用普魯卡因青霉素和慶大霉素肌肉注射，效果不明顯。隨后每天發(fā)病數(shù)量維持在0～2頭之間。7月14日對(duì)斷尾奶牛用破傷風(fēng)抗毒素治療后，死亡現(xiàn)象停止（圖6）。

2.4.2 空間和群間分布 現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，首起死亡病例發(fā)生在7月3日，來(lái)自2號(hào)棟舍。截至7月14日，211 頭斷尾奶牛中，10 頭發(fā)病，襲擊率為4.7%；6 頭死亡，死亡率為2.8%。205 頭未斷尾奶牛均未發(fā)病。從發(fā)病情況看，2號(hào)、3號(hào)棟舍均有奶牛發(fā)病，其中3號(hào)有2頭犢牛發(fā)病，其余發(fā)病的均為后備奶牛。不同欄舍和不同年齡段奶牛的發(fā)病和死亡情況均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（表1）。

圖6 奶牛場(chǎng)病例的時(shí)間分布

表1 奶牛場(chǎng)不同欄舍和不同年齡階段的發(fā)病和死亡情況

2.5 實(shí)驗(yàn)室診斷

無(wú)菌條件下，取適量血液涂片，革蘭氏染色鏡檢，可見(jiàn)大量呈典型“鼓槌狀”的革蘭氏陽(yáng)性菌，因而懷疑為破傷風(fēng)梭菌。無(wú)菌條件下，取心臟、肺臟等組織樣品進(jìn)行細(xì)菌分離，未能分離出細(xì)菌。

3 干預(yù)治療

7月6日，區(qū)動(dòng)物疫病控制中心介入調(diào)查，建議用普魯卡因青霉素和慶大霉素肌肉注射，每天2次，但效果不明顯，仍有奶牛死亡。7月14日，市、區(qū)兩級(jí)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心組成調(diào)查組進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查，建議對(duì)斷尾奶牛用破傷風(fēng)抗毒素治療，每天清理欄舍并嚴(yán)格消毒，同時(shí)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，采取降溫等措施減少應(yīng)激。7月14日以后，發(fā)病奶牛逐漸康復(fù)，未再有新的死亡病例，疫情得到了控制。

4 討論

破傷風(fēng)梭菌屬于厭氧菌，廣泛存在于自然界，尤其是動(dòng)物糞便或者土壤中，因此破傷風(fēng)病的主要傳染源是污染有破傷風(fēng)梭菌的牛糞和土壤。牛糞清理不及時(shí)，牛舍消毒頻次低，消毒不徹底，會(huì)導(dǎo)致牛舍環(huán)境中長(zhǎng)期存在破傷風(fēng)梭菌。

奶牛耐寒不耐熱，一般奶牛最適宜的溫度為12～14 ℃。據(jù)報(bào)道，當(dāng)舍內(nèi)溫度達(dá)到30 ℃，相對(duì)濕度在70%以上時(shí)，奶牛處于輕度熱應(yīng)激狀態(tài)；當(dāng)舍內(nèi)溫度達(dá)到34 ℃，相對(duì)濕度達(dá)到75%以上時(shí)，奶牛處于中度熱應(yīng)激狀態(tài)；當(dāng)舍內(nèi)溫度超過(guò)35 ℃，相對(duì)濕度達(dá)到80%以上時(shí)，奶牛處于強(qiáng)度熱應(yīng)激狀態(tài)[2]。發(fā)病前兩周為持續(xù)陰雨天氣，平均氣溫25 ℃左右；發(fā)病期間，氣溫較高，平均30 ℃左右。高溫高濕天氣，再加上斷尾對(duì)奶牛會(huì)產(chǎn)生了應(yīng)激，造成機(jī)體抵抗力下降。此外，高溫高濕天氣也有利于病原微生物生長(zhǎng)繁殖。

2017年6月27日，對(duì)2號(hào)和3號(hào)棟舍的奶牛集中用PVC 水管剪刀進(jìn)行斷尾，斷尾前，未對(duì)牛尾和剪刀進(jìn)行消毒，而是斷尾后用碘酊集中對(duì)創(chuàng)口進(jìn)行消毒，這為破傷風(fēng)梭菌的侵入創(chuàng)造了條件。

破傷風(fēng)梭菌感染機(jī)體后會(huì)分泌破傷風(fēng)痙攣毒素，導(dǎo)致出現(xiàn)以進(jìn)行性肌肉強(qiáng)直為特征的神經(jīng)系統(tǒng)中毒癥狀，病畜因頻繁肌痙攣導(dǎo)致心力衰竭而死亡。7月6日用普魯卡因青霉素和慶大霉素對(duì)發(fā)病奶牛進(jìn)行肌肉注射，每天兩次，雖對(duì)破傷風(fēng)的早期治療有一定的效果，但對(duì)感染后期的奶牛，由于破傷風(fēng)梭菌感染機(jī)體后產(chǎn)生大量毒素，用抗生素治療基本無(wú)效。7月14日，采用破傷風(fēng)抗毒素治療后，死亡停止。

預(yù)防破傷風(fēng)的關(guān)鍵在于避免外傷[3]，于是提出綜合性預(yù)防措施建議：首先，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，及時(shí)清掃牛舍，清除舍內(nèi)殘留的糞便及污染物，同時(shí)制定嚴(yán)格的消毒制度，消滅傳播源，每周使用來(lái)蘇兒液、石灰水對(duì)牛舍內(nèi)外進(jìn)行一次徹底消毒。其次，做好疫病預(yù)防，一旦做手術(shù)或有外傷出現(xiàn)，及時(shí)采用外科處置辦法，避免感染發(fā)生，進(jìn)行斷尾或其他外科手術(shù)時(shí)，提前2～3周皮下注射破傷風(fēng)類毒素，并且在術(shù)前進(jìn)行器械、皮膚等的消毒及無(wú)菌操作，術(shù)后注意保持欄舍及周圍環(huán)境的干燥清潔。最后，加強(qiáng)免疫預(yù)防，適時(shí)接種破傷風(fēng)類毒素，一般第1年2次，間隔2～4周，之后每年1次[4]。采取上述措施后，經(jīng)回訪調(diào)查，未再發(fā)生類似疫情。

5 結(jié)論

根據(jù)發(fā)病情況和“木馬樣”特異性癥狀，結(jié)合斷尾史、實(shí)驗(yàn)室涂片鏡檢結(jié)果以及干預(yù)結(jié)果，確定患病奶牛為斷尾引起的破傷風(fēng)感染。對(duì)發(fā)病奶牛進(jìn)行破傷風(fēng)抗毒素注射，以及加強(qiáng)生物安全、改善環(huán)境衛(wèi)生、減少奶牛應(yīng)激等綜合措施，最終疫情得到了有效控制。對(duì)于破傷風(fēng)，要加強(qiáng)衛(wèi)生消毒管理，做到早發(fā)現(xiàn)，早治療，減少因貽誤治療而造成的損失。

[1] 吳清民. 獸醫(yī)傳染病學(xué)[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2002.

[2] 艾曉杰. 奶牛熱應(yīng)激及其防治對(duì)策[J]. 乳業(yè)科學(xué)與技術(shù)，2004，107（2）：81-86.

[3] 古力巴哈爾·吾甫，陳雅西，高俊紅. 奶牛破傷風(fēng)病的診治報(bào)告[J]. 新疆畜牧業(yè)，2010（9）：57.

[4] 王敏. 肉牛破傷風(fēng)的流行病學(xué)、臨床特征、診斷及防治措施[J]. 現(xiàn)代畜牧科技，2017， 30（6）：121.