程兆俊， 周文靜， 馮 穎， 王 沖

（杭州市婦產(chǎn)科醫(yī)院 杭州市婦幼保健院，浙江 杭州 310008）

生殖道感染和炎癥是男性不育的重要影響因素，流行病學(xué)研究結(jié)果顯示，約有15%的男性生育問題可以歸結(jié)于感染和炎癥[1]。 生殖道感染的準(zhǔn)確診斷和治療對(duì)于男性生殖功能的改善有重要意義[2-3]。目前常用的生殖道感染檢測方法主要是通過直接計(jì)數(shù)或過氧化酶染色法檢測精液中的白細(xì)胞。但是白細(xì)胞的出現(xiàn)并不能確定疾病的進(jìn)展程度[4]，可能會(huì)造成一定的假陰性結(jié)果。近年來，國內(nèi)外研究均提出精漿彈性蛋白酶（polymorphonuclear neutrophil elastase，PMNE）可作為男性生殖道隱性感染和炎癥的檢測指標(biāo)[5-7]，與精液白細(xì)胞水平有很好的相關(guān)性[8]。PMNE是由激活的中性粒細(xì)胞分泌的一種水解蛋白酶[9]，其主要存在于中性粒細(xì)胞嗜苯胺藍(lán)顆粒中，可反映精液中被破壞和未被破壞的白細(xì)胞總量，被認(rèn)為是更好的檢測指標(biāo)，更能準(zhǔn)確地反映男性生殖道感染程度。

有研究結(jié)果顯示，精漿PMNE和白細(xì)胞可影響精液酸堿度和精子活力，導(dǎo)致精子質(zhì)量改變，且抗炎治療后精子活力好轉(zhuǎn)[10-11]。然而，目前對(duì)精漿PMNE是否能影響精液參數(shù)以及患者如何選擇復(fù)查時(shí)間尚無定論。我們通過對(duì)PMNE不同程度陽性患者精液參數(shù)進(jìn)行分析，并對(duì)不同時(shí)間的PMNE復(fù)查結(jié)果進(jìn)行比較，探討PMNE對(duì)男性生殖感染的影響和復(fù)查時(shí)機(jī)的選擇。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2015年1—12月來杭州市婦產(chǎn)科醫(yī)院生殖中心進(jìn)行精液分析和PMNE檢測的763例患者，根據(jù)PMNE含量將患者分為3個(gè)組：含量≤290 ng/mL者為未感染組（208例）；含量在290～1 000 ng/mL之間者為隱性感染組（319例，對(duì)其中312例進(jìn)行復(fù)查）；含量≥l 000 ng/mL者為確證感染組（236例，對(duì)其中213例進(jìn)行復(fù)查）。確證感染及隱性感染患者均服用頭孢克洛或頭孢呋辛治療2周，復(fù)查期間不服用其他抗菌藥物。進(jìn)一步根據(jù)用藥后復(fù)查時(shí)間將患者分為早期復(fù)查組（服藥結(jié)束后7 d內(nèi)復(fù)查）、中期復(fù)查組（服藥結(jié)束后7～14 d內(nèi)復(fù)查）和晚期復(fù)查組（服藥結(jié)束后＞14 d復(fù)查）[12-13]，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.2 檢測方法

1.2.1 精液標(biāo)本采集 患者禁欲2～7 d，用手淫法取精并收集于專用無菌取精杯內(nèi)，置37 ℃恒溫水浴箱中并記錄液化時(shí)間。

1.2.2 精漿PMNE檢測 采用西班牙SCA-H-01型計(jì)算機(jī)輔助精液分析儀進(jìn)行精液質(zhì)量分析后，將完成常規(guī)檢查及形態(tài)學(xué)檢查的精液2 000×g離心20 min，留取上層精漿檢測。如不能及時(shí)檢測則存放于-20 ℃冰箱，待檢測時(shí)室溫復(fù)融。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）測定PMNE水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。PMNE定量檢測試劑盒購于深圳華康生物醫(yī)學(xué)工程有限公司，所使用SUNRISE光吸收酶標(biāo)儀購自帝肯（上海）貿(mào)易有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，參數(shù)檢驗(yàn)數(shù)據(jù)以表示。PMNE水平與精液參數(shù)的3個(gè)組間比較采用方差分析，2個(gè)組間比較采用t檢驗(yàn)，不同時(shí)間PMNE陽性率的比較采用χ2檢驗(yàn)。以p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同PMNE水平患者精液常規(guī)參數(shù)的比較

未感染組、隱性感染組和確診感染組之間精子濃度和前向活動(dòng)精子比例差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；而在分組比較中，確證感染組與未感染組前向活動(dòng)精子比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。見表1。

表1 不同PMNE水平患者精液參數(shù)的比較

2.2 不同復(fù)查時(shí)間精漿PMNE陽性率的比較

對(duì)312例PMNE隱性感染患者和213例確證感染患者進(jìn)行了復(fù)查。在PMNE隱性感染的復(fù)查患者中，早期、中期、晚期復(fù)查組之間PMNE陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.434，P=0.180）。在PMNE確證感染的復(fù)查患者中，早期、中期、晚期復(fù)查組3個(gè)組間PMNE陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=22.951，p＜0.001），其中早期復(fù)查組PMNE陽性率明顯高于中期復(fù)查組和晚期復(fù)查組（χ2值分別為7.601、18.530，P值分別為0.006、＜0.001）。見表2。

表2 隱性感染組和確證感染組不同復(fù)查時(shí)間PMNE陽性率的比較

3 討論

臨床上部分男性生殖道感染患者其臨床癥狀、體征并無特異性改變，隱性感染導(dǎo)致部分男性不育。精漿PMNE水平檢測是篩查生殖道隱性炎癥的有力手段，臨床上常以290和1 000 ng/ mL判定男性生殖道隱性感染及確證感染[14-15]，本研究也依此分組。

有研究結(jié)果顯示，精漿PMNE可影響精液酸堿度和精子活力，導(dǎo)致精子質(zhì)量改變[16-17]。也有研究證實(shí)，精漿PMNE水平下降后，約有67%的無癥狀性生殖道炎癥患者的精子質(zhì)量有所改善[18]。本研究結(jié)果也表明，精漿PMNE水平與精液參數(shù)存在一定的相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)，確證感染組（精漿PMNE含量≥1 000 ng/mL）的精子活力較未感染組顯著降低（P=0.038），表明高水平的白細(xì)胞裂解和分泌物可對(duì)精子產(chǎn)生有害效應(yīng)，精漿PMNE水平與炎癥程度顯著相關(guān)。由于精漿PMNE水平與炎癥程度有關(guān)，本研究推測精漿PMNE水平還能跟蹤抗菌藥物治療效果，抗炎治療后可通過檢測精漿PMNE水平，指導(dǎo)臨床治療方案的選擇。

在精漿PMNE的臨床應(yīng)用中，醫(yī)生會(huì)因?yàn)橛盟幒驪MNE復(fù)查時(shí)間的選擇對(duì)治療效果的判斷產(chǎn)生一定的偏差。我們通過對(duì)復(fù)查時(shí)間分組統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，對(duì)于確證感染患者，用抗菌藥物治療后，早期復(fù)查患者PMNE陽性率顯著高于中期復(fù)查患者和晚期復(fù)查患者（χ2值分別為7.601、18.530，P值分別為0.006、＜0.001），而隱性感染患者中并未顯示這種時(shí)間差異，說明確證感染患者精漿中PMNE水平較高，抗菌藥物治療停止后，PMNE仍持續(xù)降低。停藥14 d后再復(fù)查可避免因PMNE尚未降解造成過度治療，不僅可減少患者抗菌藥物的攝入量，還可減少患者經(jīng)濟(jì)及心理負(fù)擔(dān)。因此，正確選擇精漿PMNE復(fù)查時(shí)間能有效地評(píng)估男性生殖道感染狀態(tài)，并指導(dǎo)合理用藥，對(duì)男性生育力的挽救也具有重要的意義。

[1]WEIDNER W，COLPI G M，HARGREAVE T B，et al. EAU guidelines on male infertility[J]. Eur Urol，2002，42（4）：313-322.

[2]SAKKAS D，ALVAREZ J G. Sperm DNA fragmentation：mechanisms of origin，impact on reproductive outcome，and analysis[J]. Fertil Steril，2010，93（4）：1027-1036.

[3]EISENBERG M L，LIPSHULTZ L I. Varicoceleinduced infertility：newer insights into its pathophysiology[J]. Indian J Urol，2011，27（1）：58-64.

[4]王晟，賀占舉，鄶艷榮，等. 精液中白細(xì)胞與精液質(zhì)量的關(guān)系研究[J]. 中國性科學(xué)，2013，22（5）：3-6.

[5]魏小斌，白志明，李春蕓，等. 不育癥患者精漿彈性蛋白酶檢測的臨床意義[J]. 中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009，13（11）：1563-1566.

[6]ZORN B，SESEK-BRISKI A，OSREDKAR J，et al. Semen polymorphonuclear neutrophil leukocyte elastase as a diagnostic and prognostic marker of genital tract inflammation-a review[J]. Clin Chem Lab Med，2003，41（1）：2-12.

[7]KOPA Z，WENZEL J，PAPP G K，et al. Role of granulocyte elastase and interleukin-6 in the diagnosis of male genital tract inflammation[J]. Andrologia，2005，37（5）： 188-194.

[8]聶尚丹，陳廷，李雷生，等. 精漿彈性蛋白酶水平、白細(xì)胞定量與男性不育的關(guān)系[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，7（14）：16-18.

[9]石曉星，商學(xué)軍. 中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶在男性生殖道感染診斷中的意義[J]. 中華男科學(xué)，2003，9（2）：136-139.

[10]秦松林. 男性不育患者精漿中彈性蛋白酶水平和白細(xì)胞定量及其與精液質(zhì)量的關(guān)系研究[J]. 航空航天醫(yī)學(xué)雜志，2014，25（1）：19-21.

[11]張濤，陳斌，呂逸清，等. 抗炎治療對(duì)白細(xì)胞精液癥患者精漿瘦素與活性氧的影響分析[J]. 中國男科學(xué)雜志，2014，29（3）：52-55.

[12]林楚懷，周輝譜. 男性泌尿生殖道性病感染的檢驗(yàn)與療效分析[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11（2）：171-172.

[13]江傳寧. 泌尿外科感染的原因與治療探討[J]. 醫(yī)學(xué)信息，2015，28（37）：246-247.

[14]EGGERT-KRUSE W，ZIMMERMANN K，GEISSLER W，et al. Clinical relevance of polymorphonuclear （PMN-） elastase determination in semen and serum during infertility investigation[J].Int J Androl，2009，32（32）：317-329.

[15]HENKEL R，MAASS G，JUNG A，et al. Agerelated changes in seminal polymorphonuclear elastase in men with asymptomatic inflammation of the genital tract[J]. Asian J Androl，2007，9（3）：299-304.

[16]ALLAM J P，F(xiàn)RONHOFFS F，F(xiàn)ATHY A，et al. High percentage of apoptotic spermatozoa in ejaculates from men with chronic genital tract inflammation[J].Andrologia，2008，40（5）：329-334.

[17]毛金觀，彭忠英，楊戎威，等. 生殖道感染不育患者精漿生化指標(biāo)與精液參數(shù)的相關(guān)分析[J]. 浙江醫(yī)學(xué)，2016，38（18）：1519-1520.

[18]馮瑞祥，盧坤剛，張紅燁，等. 精液中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的研究進(jìn)展[J]. 中華男科學(xué)雜志，2011，17（11）：1023-1028.