楊 丹， 李 巍， 葉志成， 徐 錦

（復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，上海 201102）

新生兒溶血病（hemolytic disease of newborn，HDN）是新生兒常見疾病，輕則引起病理性黃疸，重則引起重度貧血、損害患兒神經(jīng)系統(tǒng)，甚至死亡[1]。網(wǎng)織紅細(xì)胞（reticulocyte，RET）數(shù)是貧血的敏感指標(biāo)[2]，RET增多表示骨髓造血功能旺盛，常見于各種增生性貧血。而減少常見于再生障礙性貧血?，F(xiàn)國內(nèi)對RET參數(shù)在HDN中的應(yīng)用研究尚少，因此我們分析RET參數(shù)變化在HDN治療中的價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2016年3月1日—9月30日來復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院新生兒科住院的患者，入院確診為HDN。從中挑選出44例符合要求的患者，其中男21例、女23例，年齡2～28 d。分別于入院當(dāng)天、治療中、出院當(dāng)天采集末梢血備用，當(dāng)天采集當(dāng)天檢測。

1.2 方法

1.2.1 儀器法計(jì)算網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)百分比（reticulocyte percentage，RET%）及其他參數(shù) 采用日本Sysmex公司生產(chǎn)的CELLPACK DFL 試劑240 μL與40 μL末梢血充分混勻，對末梢血進(jìn)行1∶7稀釋。稀釋后的標(biāo)本采用XN-2000血液分析儀（日本Sysmex公司）1∶7稀釋通道檢測。測定HDN患者入院當(dāng)天、治療中、出院當(dāng)天3個時間點(diǎn)的RET%，同時檢測未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（immature reticulocyte fraction percentage，IRF%）、低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（low fluorescence reticulocyte percentage，LFR%）、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（medium fluorescence reticulocyte percentage，MFR%）、高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（high fluorescence reticulocyte percentage，HFR%）共5個指標(biāo)。其中，IRF%=HFR%+MFR%，IRF%+LFR%=100%，低熒光強(qiáng)度RET即成熟RET。上機(jī)前對血液分析儀進(jìn)行質(zhì)控分析，確保各項(xiàng)指標(biāo)在控后方能進(jìn)行檢測。

1.2.2 分組 以入院時RET%為基線水平，出院時RET%下降≥25%定義為明顯降低組（Ⅰ組），下降＜25%為無明顯降低組（Ⅱ組）[3]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

利用Excel 2003和SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用配對樣本t檢驗(yàn)以及兩變量的相關(guān)分析，以p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RET各參數(shù)在HDN治療過程中的變化情況分析

隨著治療的進(jìn)行，RET%、IRF%、HFR%、MFR%總體呈進(jìn)行性下降，LFR%呈進(jìn)行性上升，入院時與治療中、入院時與出院時、治療中與出院時同一參數(shù)之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。入院時RET%＞正常值（2%～6%）有23例[4]，占總數(shù)的52.27%。與入院時相比較，出院時RET%明顯下降有37例，占總數(shù)的84.09%。見圖1。

圖1 入院時、治療中、出院時RET各參數(shù)的變化情況

2.2 Ⅰ組及Ⅱ組中IRF%、MFR%、HFR%的變化情況

Ⅰ組出院時RET%、IRF%、MFR%、HFR%與入院時相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）。Ⅱ組出院時RET%、IRF%、MFR%、HFR%與入院時相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.3 相關(guān)性分析

Ⅰ組RET%下降值（入院時－出院時）與IRF%、MFR%、HFR%下降值進(jìn)行相關(guān)性分析，RET%下降與IRF%、HFR%下降呈正相關(guān)（r值分別為0.632、0.639，p＜0.01），與MFR%下降不具有相關(guān)性（r=0.321，P＞0.05）。見圖2。

圖2 RET%與IRF%、HFR%的相關(guān)性分析

3 討論

HDN指母、子血型不合而引起的同族免疫性溶血病，主要分為ABO溶血病和Rh溶血病。發(fā)病機(jī)制是由父親遺傳而母親所不具有的顯性胎兒紅細(xì)胞血型抗原，通過胎盤進(jìn)入母體，刺激母體產(chǎn)生相應(yīng)的血型抗體，當(dāng)不完全抗體（IgG）進(jìn)入胎兒血循環(huán)后，與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合，在單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)被破壞，引起溶血[5]。ABO溶血病會引起病理性黃疸，而Rh溶血病可引起重度貧血，甚至心力衰竭。未娩出時，胎兒血中膽紅素可由胎盤進(jìn)入母親肝臟進(jìn)行代謝，故娩出時黃疸并不明顯。新生兒出生后，處理膽紅素能力較差，若血清中未結(jié)合膽紅素過高，則可透過血-腦屏障，使基底核等處神經(jīng)細(xì)胞黃染、壞死，發(fā)生膽紅素腦病[5]。

RET是介于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間的過渡細(xì)胞，其數(shù)量增減直接反映骨髓紅系生成能力。正常新生兒RET%參考區(qū)間為2.0%～6.0%[4]。但劉志賢等[6]的研究結(jié)果表明，新生兒RET%第一天最高，為3.09%～6.81%，隨日齡變化而逐漸降低，最低可至0.27%～1.15%，渡過低值期后逐步回升，于嬰兒期前后才達(dá)到成人水平（0.5%～1.5%）。新生兒存在生理性紅細(xì)胞破壞，因此難以在早期根據(jù)患兒血紅蛋白含量判斷是否發(fā)生HDN。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，疾病發(fā)生階段RET%升高者占患者總數(shù)的52.27%。若嚴(yán)格按劉志賢等[6]研究作為參考，實(shí)際上RET%升高占總數(shù)的比例還要高，表明RET%是HDN一個比較敏感的指標(biāo)，RET%升高時提示患HDN概率大。

本研究結(jié)果表明，RET%下降與IRF%、HFR%下降呈正比，三者變化趨勢一致。當(dāng)RET%明顯降低時，IRF%和HFR%也會降低，相反，LFR%則會升高。由此說明，HDN早期有大量中熒光強(qiáng)度RET進(jìn)入血液，且其中以高熒光強(qiáng)度RET迅速增加為特征，后期隨治療進(jìn)行，高熒光強(qiáng)度RET急劇減少，低熒光強(qiáng)度RET升至正常水平，從而標(biāo)志著患兒進(jìn)入治愈期。結(jié)合患兒病史，在Ⅱ組中，所有患兒入院時黃疸程度均未觸及光療線，患兒溶血程度不高，在RET%的下降幅度上也有所體現(xiàn)。因此，IRF%、HFR%與LFR%可作為監(jiān)測HDN治療的輔助指標(biāo)。曹科等[7]的研究表明，血細(xì)胞分析流水線RET參數(shù)的參考區(qū)間并不適用于兒科實(shí)驗(yàn)室。因此，沒有建立本實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間是本研究存在的局限性，希望能在之后研究中加以重視。

綜上所述，RET%可作為監(jiān)測HDN治療過程中的一個比較敏感的指標(biāo)，當(dāng)RET%下降明顯時，提示治療有效。同時，IRF%、HFR%和LFR%也可輔助監(jiān)測HDN療效，當(dāng)IRF%、HFR%下降，LFR%升高時提示治療有效。

[1]詹影影. ABO血型系統(tǒng)診斷新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，20（6）：1421-1422.

[2]欒虹，鄭軍，董西華，等. 網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)在貧血性疾病鑒別診斷中的應(yīng)用[J]. 中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，40（11）：1018-1019.

[3]張擁黎，盧仁泉，周磊，等. 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)在腫瘤患者化療監(jiān)測的臨床價(jià)值[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2016，31（5）：359-362.

[4]劉成玉，羅春麗. 臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)[M]. 5版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2012： 38.

[5]沈曉明，王衛(wèi)平. 兒科學(xué)[M]. 7版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2008： 118-119.

[6]劉志賢，李劍鴻，曾建武. 415例新生兒網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)參考范圍的探討[J]. 生物醫(yī)學(xué)工程與臨床，2008，12（6）：487-489.

[7]曹科，馬東禮，羅小娟，等. 全自動血細(xì)胞分析流水線網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)參考區(qū)間在兒科實(shí)驗(yàn)室適用性驗(yàn)證[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2016，13（2）：184-185.