齊 攀 李仕萍 鐘金鋼 李 瑩

(1.廣東交通職業(yè)技術(shù)學(xué)院信息學(xué)院， 廣州 510650; 2.暨南大學(xué)理工學(xué)院， 廣州 510632;3.暨南大學(xué)光電信息與傳感技術(shù)廣東普通高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 廣州 510632; 4.暨南大學(xué)預(yù)科部， 廣州 510610)

0 引言

玉米赤霉烯酮(ZEN)又稱F- 2毒素，是由多種鐮刀菌產(chǎn)生的一種類雌激素樣的真菌毒素，廣泛存在于多種谷物中[1-2]。ZEN具有較強(qiáng)生殖毒性和致畸作用[3-5]。對(duì)食物中ZEN的檢測(cè)與研究十分必要。傳統(tǒng)的ZEN檢測(cè)研究方法包括：薄層層析(Thin-layer chromatography，TLC)法、高效液相- 質(zhì)譜聯(lián)用色譜(High performance liquid chromatography- mass sepectrum，HPLC- MS)法、酶聯(lián)免疫吸附(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)技術(shù)以及膠體金免疫層析(Colloidal gold immunochromatographic assay，GICA)檢測(cè)方法等[5-6]。傳統(tǒng)的ZEN檢測(cè)方法雖然具有高靈敏度的優(yōu)點(diǎn)，但是存在儀器價(jià)格昂貴、樣品處理步驟復(fù)雜(一般需要純化和標(biāo)記等，其中標(biāo)記所用的熒光標(biāo)記物會(huì)污染環(huán)境)、檢測(cè)周期長(zhǎng)、操作過(guò)程復(fù)雜等技術(shù)缺陷，難以滿足現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)研究的要求[7-9]。因此，亟需建立低成本、免標(biāo)記、實(shí)時(shí)快速、特異、簡(jiǎn)便的ZEN檢測(cè)方法。

表面等離子體共振(SPR)技術(shù)通過(guò)探測(cè)生物分子間相互作用引起的微小折射率變化，實(shí)現(xiàn)對(duì)生物效應(yīng)中分子間相互作用的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)[10-14]。SPR技術(shù)對(duì)檢測(cè)的生物樣品不需要純化，無(wú)需標(biāo)記，可實(shí)現(xiàn)快速、無(wú)擾、動(dòng)態(tài)檢測(cè)，相對(duì)其他一些傳感技術(shù)能提供更為豐富的信息，已廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、臨床疾病診斷、藥物篩選、環(huán)境監(jiān)測(cè)以及食品安全監(jiān)控等領(lǐng)域[15-18]。本文基于自行設(shè)計(jì)的角度掃描型便攜式SPR傳感器，制備可快速測(cè)定ZEN的生物芯片，建立無(wú)標(biāo)記檢測(cè)ZEN的方法，使其可用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。

1 表面等離子體共振生物傳感原理及裝置

表面等離子體共振(SPR)效應(yīng)是利用P偏振光在玻璃與金屬薄膜界面處發(fā)生全內(nèi)反射時(shí)進(jìn)入金屬薄膜內(nèi)的倏逝波，引發(fā)金屬中的自由電子產(chǎn)生表面等離子體，當(dāng)倏逝波的波矢與表面等離子體的波矢相匹配時(shí)，二者將發(fā)生共振，入射光的能量被表面等離子體吸收，反射光強(qiáng)急劇下降[14]，如圖1中SPR共振曲線A或B所示。如果將探針或配體固定于傳感芯片(金屬薄膜)表面，含待分析物的樣品流經(jīng)傳感芯片表面，分子間發(fā)生特異性結(jié)合時(shí)引起傳感芯片表面的折射率改變，通過(guò)檢測(cè)SPR信號(hào)改變(如圖1中曲線B的SPR共振角大于曲線A的共振角)可實(shí)現(xiàn)檢測(cè)分子間相互作用的特異性、濃度、動(dòng)力學(xué)、親合性、協(xié)同作用、相互作用模式等。

圖1 表面等離子體共振原理圖Fig.1 Schematic diagram of SPR

本文建立的SPR生物傳感器系統(tǒng)結(jié)構(gòu)如圖2所示，包括光路系統(tǒng)、流路系統(tǒng)、電路(信號(hào)探測(cè)與控制)系統(tǒng)、軟件(數(shù)據(jù)分析)系統(tǒng)和傳感芯片等部分。

圖2 SPR系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖Fig.2 Structure diagram of SPR system1.激光器 2.掃描鏡 3.反射鏡 4.傳感芯片

SPR生物芯片是檢測(cè)系統(tǒng)的核心器件，本系統(tǒng)的傳感芯片是以K9玻璃材質(zhì)的圓柱形棱鏡為光波耦合器件，基于Kretschmann模型，將厚度為50 nm的金膜鍍?cè)谂c圓柱形棱鏡折射率相同的厚度為1 mm的蓋玻片上，然后用折射率相近的匹配液(香柏油)將其粘合在棱鏡底面。利用SPR生物芯片進(jìn)行免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，傳感芯片經(jīng)過(guò)修飾后固定上生物探針(抗原或抗體)，然后含待測(cè)物的樣品通過(guò)流路系統(tǒng)進(jìn)入芯片，芯片上分子間相互作用的情況可由SPR共振角的改變反映，并通過(guò)軟件系統(tǒng)將整個(gè)反應(yīng)過(guò)程顯示和記錄。

經(jīng)測(cè)試，SPR系統(tǒng)對(duì)樣品折射率的測(cè)量范圍為1.241 5～1.376 2 RIU，樣品的折射率測(cè)量分辨率可達(dá)10-5RIU。整套SPR系統(tǒng)成本不超過(guò)3萬(wàn)元人民幣(遠(yuǎn)低于商用SPR儀的售價(jià))，通過(guò)自組裝單層分子膜(Self-assembled monolayer，SAM)技術(shù)對(duì)金膜進(jìn)行修飾自行制備生物芯片，每塊芯片成本低于200元人民幣；裝置穩(wěn)固便攜，體積和質(zhì)量與個(gè)人計(jì)算機(jī)的主機(jī)相當(dāng)，生物芯片拆卸方便，有利于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)

2.1 實(shí)驗(yàn)樣品

玉米赤霉烯酮(ZEN)毒素標(biāo)準(zhǔn)品(質(zhì)量濃度為10 μg/mL，相對(duì)分子量為318.4)、玉米赤酶烯酮- 牛血清白蛋白(ZEN- BSA)偶聯(lián)物(質(zhì)量濃度為5.3 mg/mL)和玉米赤酶烯酮抗體(質(zhì)量濃度為1.4 mg/mL)來(lái)自暨南大學(xué)分子免疫學(xué)與抗體工程研究中心；巰基十一酸、巰基己酸、乙醇胺、十二烷基硫酸鈉(SDS)、N-羥基琥珀酰亞胺(EDC)購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；其它試劑購(gòu)于北京化學(xué)試劑公司。免疫反應(yīng)的緩沖液是PBS緩沖液(2 mmol/L NaH2PO4，2 mmol/L Na2HPO4，150 mmol/L NaCl，pH值7.4)。ZEN毒素標(biāo)準(zhǔn)品、ZEN- BSA、ZEN抗體由PBS緩沖液稀釋為相應(yīng)濃度的溶液。

2.2 玉米赤霉烯酮檢測(cè)生物芯片的制備

生物芯片的制備包括修飾、活化、固定和滅活等過(guò)程，具體操作方法為：

(1)將金膜(直徑20 mm、厚度1 mm的圓形玻璃片表面沉積50 nm厚的金)用香柏油(折射率為1.51～1.52)作為匹配液貼合在SPR儀的圓柱形棱鏡(K9玻璃)上，用1 mmol/L的HS(CH2)10COOH(巰基十一酸)和HS(CH2)6OH(巰基己酸)的乙醇溶液，質(zhì)量比為1∶9，對(duì)金膜表面進(jìn)行自組裝修飾4 h，修飾液中的巰基與金鍵合，形成羧基；安裝流路系統(tǒng)，設(shè)置SPR掃描參數(shù)(掃描起點(diǎn)-1°，掃描范圍2°，掃描步長(zhǎng)0.01°)；以1 000 μL/min的流速向芯片表面泵入PBS緩沖液(2 mmol/L NaH2PO4, 2 mmol/L Na2HPO4, 150 mmol/L NaCl, pH值7.4)，開(kāi)始記錄SPR響應(yīng)值，以此時(shí)PBS緩沖液的共振角作為基準(zhǔn)(圖3中階段1)。

圖3 生物芯片制備過(guò)程記錄曲線Fig.3 Recording curve of biochip preparation process1、3、5、7.基線 2.活化 4.固定生物探針 6.滅活

(2)基線穩(wěn)定后加入0.1 mol/L的NHS和0.1 mol/L的EDC混合液(體積比為1∶1)，活化芯片表面20～25 min，將芯片表面的羧基活化成活潑酯，此時(shí)的SPR響應(yīng)值升高(圖3中階段2)，用PBS沖洗3～4 min，穩(wěn)定后基線略有上升(圖3中階段3)，活化后的芯片可固定蛋白質(zhì)。

(3)直接檢測(cè)法和抑制檢測(cè)法，均在生物芯片表面固定質(zhì)量濃度為100 mg/L的玉米赤酶烯酮- 牛血清白蛋白(ZEN- BSA)偶聯(lián)物作為生物探針，此時(shí)SPR響應(yīng)值明顯升高(圖3中階段4)，約30 min后通入PBS沖洗2～3 min，響應(yīng)值只有小幅下降(圖3中階段5)，說(shuō)明生物探針固定效果較好。

(4)加入1 mol/L的乙醇胺(pH值8.5)5～7 min封閉滅活剩余的酯鍵(圖3中階段6)，PBS沖洗后，生物芯片制備完成，可用于ZEN抗體直接免疫檢測(cè)和ZEN毒素小分子抑制免疫檢測(cè)。

2.3 直接檢測(cè)法檢測(cè)玉米赤霉烯酮抗體

將生物芯片用于ZEN抗體的直接免疫檢測(cè)，可進(jìn)行抗體篩選和免疫反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)研究。將ZEN抗體用PBS緩沖液調(diào)配成不同濃度的抗體樣品，依次加入到制備好的生物芯片表面，樣品中的抗體與芯片表面的抗原特異性結(jié)合，一個(gè)樣品的免疫反應(yīng)過(guò)程檢測(cè)完，通入PBS緩沖液2 min，然后通入SDS- HCl，使抗原- 抗體結(jié)合物解離，SPR響應(yīng)值降回基線，可繼續(xù)檢測(cè)下一個(gè)樣品。圖4為直接法檢測(cè)一組樣品的動(dòng)力學(xué)曲線。芯片表面固定了ZEN- BSA，樣品中ZEN抗體的質(zhì)量濃度分別為10、20、30、40、50 μg/mL。隨著樣品中ZEN抗體質(zhì)量濃度升高，免疫反應(yīng)速度增快。單個(gè)樣品檢測(cè)約400 s，隨著免疫反應(yīng)的進(jìn)行，生物芯片表面抗原- 抗體結(jié)合物增多，SPR響應(yīng)值增大。檢測(cè)每個(gè)樣品時(shí)，免疫反應(yīng)先快后慢，逐步趨于飽和，反應(yīng)過(guò)程呈近似對(duì)數(shù)函數(shù)關(guān)系，符合免疫反應(yīng)規(guī)律。圖5為這一組樣品SPR檢測(cè)的共振曲線(樣品加入50 s后測(cè)得)，隨樣品中ZEN抗體質(zhì)量濃度的增大，在相同反應(yīng)時(shí)間下，生物芯片表面的抗原- 抗體結(jié)合物質(zhì)量增加(折射率升高)，共振角增大，反映在SPR曲線上即為光強(qiáng)吸收峰向右位移。

圖4 直接法檢測(cè)不同質(zhì)量濃度ZEN抗體的動(dòng)力學(xué)曲線Fig.4 Kinetic curves of ZEN antibody with different mass concentrations detected by direct method1、4.基線 2.結(jié)合 3.解離

圖5 直接法檢測(cè)不同質(zhì)量濃度ZEN抗體的SPR曲線Fig.5 SPR curves of ZEN antibody with different concentrations detected by direct method

圖6是直接法檢測(cè)ZEN抗體的標(biāo)準(zhǔn)曲線，室溫(20±1)℃，以通入樣品免疫反應(yīng)350 s(免疫反應(yīng)趨于飽和)時(shí)的相對(duì)響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，樣品中ZEN抗體的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，可見(jiàn)10～50 μg/mL質(zhì)量濃度的樣品SPR響應(yīng)值與質(zhì)量濃度基本呈線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為f(x)=0.002 5x-0.477 0，R2=0.995 2，均方根誤差為0.003 2。經(jīng)測(cè)試，固定了生物探針的生物芯片至少可連續(xù)檢測(cè)50組樣品，超過(guò)50組樣品SPR響應(yīng)值開(kāi)始下降。用固定了質(zhì)量濃度為100 mg/L的ZEN- BSA生物芯片連續(xù)檢測(cè)質(zhì)量濃度為50 μg/mL的ZEN抗體，單次免疫反應(yīng)350 s時(shí)SPR響應(yīng)值(相對(duì)于基線的變化量)如圖7所示，說(shuō)明檢測(cè)超過(guò)50次后生物芯片表面固定的探針受損，這時(shí)芯片表面通入0.1 mol/L的HCl可實(shí)現(xiàn)芯片再生，重新自組裝并固定生物探針，傳感芯片可繼續(xù)使用。該方法適用于ZEN抗體的定量檢測(cè)及篩選、抗體親和力和免疫反應(yīng)動(dòng)力學(xué)基礎(chǔ)研究。

圖6 直接法檢測(cè)ZEN抗體的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.6 Standard curves of ZEN antibody detected by direct method

圖7 連續(xù)檢測(cè)樣品的穩(wěn)定性測(cè)試Fig.7 Stability test of continuous detection of samples

2.4 抑制檢測(cè)法檢測(cè)痕量玉米赤霉烯酮毒素小分子

由于ZEN的分子量較小(318.4)，其雖可與固定在芯片表面的抗原結(jié)合，但對(duì)芯片表面附近的折射率影響小，引起表面等離子體共振的共振角變化小，直接檢測(cè)的檢測(cè)限較高。為了對(duì)ZEN痕量小分子物質(zhì)檢測(cè)，本文提出抑制免疫型生物芯片法，可放大響應(yīng)值，降低檢出限。生物芯片制備過(guò)程同2.2節(jié)所述，將ZEN的衍生物(ZEN- BSA)固定在生物芯片表面作為生物探針，不同質(zhì)量濃度的ZEN毒素小分子與ZEN抗體混合后通入芯片表面，分析動(dòng)力學(xué)過(guò)程。樣品中的ZEN小分子和芯片表面的ZEN衍生物都可以與樣品中的抗體結(jié)合，是競(jìng)爭(zhēng)的關(guān)系，樣品中ZEN小分子抑制了抗體與芯片表面的生物探針(ZEN- BSA)結(jié)合，樣品中ZEN小分子的質(zhì)量濃度與響應(yīng)值的變化成反比。如果樣品中ZEN小分子濃度低，則更多的抗體與芯片表面生物探針結(jié)合，SPR響應(yīng)值(共振角)的變化大。

用PBS緩沖液將ZEN抗體稀釋為5 μg/mL的工作質(zhì)量濃度，ZEN毒素標(biāo)準(zhǔn)品小分子的終質(zhì)量濃度為0、2、8、16、32 ng/mL，抗體與ZEN標(biāo)準(zhǔn)品小分子混合5 min后，將混合溶液依次加到芯片表面，記錄SPR的動(dòng)態(tài)變化。免疫反應(yīng)6 min后通入SDS- HCl溶液洗脫抗原抗體結(jié)合物，2 min后，通入PBS緩沖液清洗，SPR響應(yīng)值可回到初始的基線，然后加入下一濃度的樣品，繼續(xù)檢測(cè)。圖8是這組樣品通入芯片表面，抑制法檢測(cè)ZEN小分子時(shí)的動(dòng)力學(xué)曲線，當(dāng)樣品中ZEN質(zhì)量濃度大時(shí)，可與芯片表面生物探針結(jié)合的ZEN抗體數(shù)量少，免疫反應(yīng)速度慢，SPR響應(yīng)值低，ZEN小分子質(zhì)量濃度與SPR響應(yīng)值成反比。

圖8 抑制法檢測(cè)不同質(zhì)量濃度ZEN小分子的動(dòng)力學(xué)曲線Fig.8 Kinetic curves of ZEN small molecules with different mass concentrations detected by inhibition method

以通入樣品免疫反應(yīng)350 s時(shí)的相對(duì)響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，樣品中抗體質(zhì)量濃度(ng/mL)對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制ZEN抑制免疫檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖9所示，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為f(x)=-0.001 0x3+0.005 9x2-0.028 7x-0.220 8，R2=0.989 6，均方根誤差為0.005 8。對(duì)每一個(gè)質(zhì)量濃度進(jìn)行反復(fù)測(cè)試(5次)的標(biāo)準(zhǔn)差小于8%，檢出限小于2 ng/mL(通過(guò)計(jì)算5組標(biāo)準(zhǔn)曲線零濃度點(diǎn)SPR響應(yīng)值的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差, 以平均值減去3倍標(biāo)準(zhǔn)差所得的響應(yīng)值從標(biāo)準(zhǔn)曲線中找到對(duì)應(yīng)質(zhì)量濃度即為檢出限[19])，低于美國(guó)商用SPRimager II芯片分析系統(tǒng)的檢出限8.2 ng/mL[20]，略高于ELISA的檢出限1 ng/mL[7]。生物芯片制備完成后，完成單一樣品的檢測(cè)耗時(shí)僅需約6 min，在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，根據(jù)單次測(cè)量的SPR響應(yīng)值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線檢出限可得到ZEN毒素的質(zhì)量濃度。相比于ELISA等傳統(tǒng)檢測(cè)法，設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低、高特異性，樣品無(wú)需標(biāo)記、非破壞性、無(wú)環(huán)境污染與快速定量是其最大的優(yōu)勢(shì)，可滿足現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的需求。因此，該方法有望用于食品質(zhì)量監(jiān)控和現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)檢測(cè)。

圖9 抑制法檢測(cè)ZEN小分子的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.9 Standard curve of ZEN small molecules directed by inhibition method

免疫反應(yīng)檢測(cè)時(shí)間應(yīng)根據(jù)抗原- 抗體響應(yīng)值的大小，結(jié)合實(shí)際檢測(cè)要求進(jìn)行設(shè)定。免疫反應(yīng)時(shí)間越長(zhǎng)，反應(yīng)越充分，可降低檢測(cè)限。ZEN抗原- 抗體的反應(yīng)在350 s內(nèi)沒(méi)有達(dá)到飽和狀態(tài)，如果延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間可降低檢出限。本研究采用的抗體工作質(zhì)量濃度是5 μg/mL，如果降低抗體工作濃度，也可以降低ZEN毒素小分子樣品的檢出限。

取有代表性的玉米樣品，研磨成顆粒，稱取5 g磨碎的試樣，在試樣中加入提取液(乙腈與水溶液體積比9∶1)20 mL，高速攪拌提取2 min。吸取10 μL提取液用氮?dú)獯蹈桑尤?0 μL PBS混勻，室溫10 000 r/min離心10 min，取全部上清液用于 SPR 檢測(cè)。由表面等離子體共振生物芯片檢測(cè)玉米提取物，樣品中ZEN質(zhì)量濃度為2.75 ng/mL，抑制法工作抗體質(zhì)量濃度為5 μg/mL，檢測(cè)玉米中提取ZEN樣品的SPR響應(yīng)值(免疫反應(yīng)約350 s時(shí)SPR共振角相對(duì)于基線的變化量)為0.11 RU(檢測(cè)3次的平均值)，空白對(duì)照的響應(yīng)值為0.13 RU(檢測(cè)3次的平均值)?？梢?jiàn)，含有ZEN的樣品與對(duì)照組SPR響應(yīng)值有明顯區(qū)別，SPR生物芯片能夠在實(shí)際檢測(cè)中應(yīng)用。

3 結(jié)束語(yǔ)

基于自行設(shè)計(jì)的角度掃描型便攜式SPR傳感器，制備了用于ZEN檢測(cè)研究的生物芯片。提出了ZEN直接檢測(cè)法和抑制檢測(cè)法，建立了10～50 μg/mL質(zhì)量濃度范圍的ZEN直接檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線；抑制法檢測(cè)ZEN毒素小分子檢測(cè)限小于2 ng/mL，生物芯片制備完成后，完成單一毒素樣品檢測(cè)僅需6 min。與傳統(tǒng)生化分析方法相比，SPR生物芯片檢測(cè)研究ZEN具有免標(biāo)記、對(duì)環(huán)境無(wú)污染、高特異性、快速定量、研究反應(yīng)動(dòng)力學(xué)等一系列優(yōu)點(diǎn)。該裝置和方法可用于大量樣品的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。

1 KORDIC B, PRIBICEVIC S, MUNTANOLA-CVETKOVIC M, et al. Experimental study of the effects of known quantities of Zearalenone on swine reproduction[J]. Journal of Environmental Pathology Toxicology & Oncology Official Organ of the International Society for Environmental Toxicology & Cancer, 1992, 11(2):53-55.

2 HART L P, WEJR B, STEBBINS T C. Production of Zearalenone and deoxynivalenol in commercial sweet corn [J]. Plant Disease, 1983, 66(1):1133-1135.

3 AYED-BOUSSEMA I, OUANES Z, BACHA H, et al. Toxicities induced in cultured cells exposed to Zearalenone: apoptosis or mutagenesis? [J] Journal of Biochemical & Molecular Toxicology, 2007, 21(3):136-144.

4 賈彥瓊, 黃建芳, 向軍儉, 等. 玉米赤霉烯酮抗獨(dú)特型單抗的制備及特異性分析[J]. 中國(guó)生物制品學(xué)雜志, 2013, 26(5):726-730.

JIA Y Q, HUANG J F, XIANG J J, et al. Preparation and characterization of monoclonal anti-idiotype antibody to Zearalenone [J]. Chinese Journal of Biologicals, 2013, 26(5):726-730. (in Chinese)

5 駱敏兒, 唐勇, 向軍儉, 等. 玉米赤霉烯酮單克隆抗體的制備及膠體金免疫層析法的建立[J]. 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志, 2013, 29(7):729-733.

LUO M E, TANG Y, XIANG J J, et al. Preparation of anti-zearalenone monoclonal antibody and preliminary establishment of colloidal gold immunochromatographic assay for Zearalenone [J]. Chinese Journal of Cellular & Molecular Immunology, 2013, 29(7):729-733. (in Chinese)

6 HE Q H, XU Y, HUANG Y H, et al. Phage-displayed peptides that mimic Zearalenone and its application in immunoassay [J]. Food Chemistry, 2011, 126(3):1312-1315.

7 王玉平, 計(jì)融, 江濤, 等. 玉米赤霉烯酮ELISA定量檢測(cè)試劑盒研制[J]. 衛(wèi)生研究, 2006, 35(2):221-224.

WANG Y P, JI R, JIANG T, et al. Development of ELISA-kit of quantitative analysis for Zearalenone [J]. Journal of Hygiene Research, 2006, 35(2):221-224. (in Chinese)

8 OK H E, CHOI S W, KIM M, et al. HPLC and UPLC methods for the determination of Zearalenone in noodles, cereal snacks and infant formula [J]. Food Chemistry, 2014, 163(20):252-257.

9 NIWA T, KOBAYASHI T, SUN P, et al. An enzyme-linked immunometric assay for cortisol based on idiotype-anti-idiotype reactions [J]. Analytica Chimica Acta, 2009, 638(1):94-100.

10 ESPIRITU R A, MURATA M, NISHIMURA S, et al. Interaction between the marine sponge cyclic peptide theonellamide A and sterols in lipid bilayers as viewed by surface plasmon resonance and solid state 2h NMR [J]. Biochemistry, 2013, 52(14):2410-2418.

11 HOMOLA J, LU H B, YEE S S. Dual-channel surface plasmon resonance sensor with spectral discrimination of sensing channels using dielectric overlayer [J]. Electronics Letters, 1999, 35(13):1105-1106.

12 NELSON B P, GRIMSRUD T E, LILES M R, et al. Surface plasmon resonance imaging measurements of DNA and RNA hybridization adsorption onto DNA microarrays [J]. Analytical Chemistry, 2001, 73(1):1-7.

13 YUK J S, KIM H S, JUNG J W, et al. Analysis of protein interactions on protein arrays by a novel spectral surface plasmon resonance imaging [J]. Biosensors & Bioelectronics, 2006, 21(8):1521-1528.

14 SCHASFOORT R B M, TUDOS A J. Handbook of surface plasmon resonance [M]. Cambridge: Royal Society of Chemistry, 2008.

15 SHALABNEY A, ABDULHALIM I. Sensitivity-enhancement methods for surface plasmon sensors [J]. Laser & Photonics Reviews, 2011, 5(4):571-606.

16 CHOULIER L, NOMINE Y, ZEDERLUTZ G, et al. Chemical library screening using a SPR-based inhibition in solution assay: simulations and experimental validation [J]. Analytical Chemistry, 2013, 85(18):8787-8795.

17 OLARU A, BALA C, JAFFREZIC-RENAULT N, et al. Surface plasmon resonance (SPR) biosensors in pharmaceutical analysis [J]. Critical Reviews in Analytical Chemistry, 2015, 45(2):97-105.

18 ZHAO S S, BUKAR N, TOULOUSE J L, et al. Miniature multi-channel SPR instrument for methotrexate monitoring in clinical samples [J]. Biosensors & Bioelectronics, 2015, 64:664-670.

19 DENIS D, WILLEM H, FRANSSEN M C R, et al. Imaging surface plasmon resonance for multiplex microassay sensing of mycotoxins [J]. Analytical & Bioanalytical Chemistry, 2011, 400(9):3005-3011.

20 趙芳, 涂曉波, 黃欣迪, 等. 表面等離子共振技術(shù)快速檢測(cè)食品中的玉米赤霉烯酮毒素[J]. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào), 2016, 7(12):4849-4852.

ZHAO F, TU X B, HUANG X D, et al. Rapid detection of Zearalenone in food by surface plasmon resonance technology[J]. Journal of Food Safety and Quality, 2016, 7(12):4849-4852. (in Chinese)