李 晨，姬靜璐，王 玉，魏繼紅，李朝英，李少華，安 娜

近年來，早產(chǎn)兒發(fā)生率逐年上升，發(fā)達(dá)國家發(fā)生率可達(dá)5%～7%，我國早產(chǎn)兒發(fā)生率也日漸接近歐美國家水平[1]。早產(chǎn)兒由于出生體重低、免疫功能發(fā)育不完全，較正常嬰兒更容易發(fā)生感染。低出生體重兒就有可能出現(xiàn)住院時間的延長，慢性肺部疾病的發(fā)生和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的異常狀況[2]。然而，新生兒的感染發(fā)病情況難以察覺，且發(fā)展迅速，患兒可迅速出現(xiàn)膿毒性休克和彌散性血管內(nèi)凝血等。早產(chǎn)兒感染防治是早產(chǎn)兒管理的重要環(huán)節(jié)。目前，血液細(xì)菌培養(yǎng)為早產(chǎn)兒感染的金標(biāo)準(zhǔn)，但其有顯著的缺陷，如陽性率低、費(fèi)時、結(jié)果滯后等[3]，因此篩查出一種靈敏、快速的感染指標(biāo)具有重要意義。本研究中采用流式細(xì)胞儀檢測早產(chǎn)兒感染取得一定成果。

1 對象與方法

1.1 對象 選擇我院兒科的早產(chǎn)兒共72例，性別分布為：男早產(chǎn)兒47例，女早產(chǎn)兒25例，胎齡平均為(31.06±0.73)周，平均出生體重為(1683±366)g。根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)將所有新生兒分為感染組和非感染組，其中感染組早產(chǎn)兒34例，非感染組為38例。在感染組的34例早產(chǎn)兒中，包括了15例敗血癥，14例細(xì)菌性肺炎和5例壞死性小腸結(jié)腸炎。新生兒的敗血癥診斷是參照《新生兒敗血癥診療方案》2003年版，壞死性小腸結(jié)腸炎與感染性肺炎的診斷是參照《實(shí)用新生兒學(xué)》第 3 版[4]。

1.2 主要儀器和試劑 SYSMEX XT-2000i 全自動五分類血細(xì)胞分析儀(日本希森美康公司)；全自動生化分析儀日立7600-20；FACS Calibur流式細(xì)胞儀；-80 ℃低溫冰箱；全自動酶標(biāo)儀(KHB ST-360)(上?？迫A生物有限公司) ；hs-CRP測定試劑盒(邁克生物公司)；CD11b、 CD64抗體(美國BD公司)。

表1 兩組早產(chǎn)兒一般資料比較 (n；%)

1.3 方法 早產(chǎn)兒有疑似感染時，24 h內(nèi)取外周全血3 ml，0.5 ml用于血常規(guī)檢查，1 ml分離血清用于血清C-反應(yīng)蛋白的檢測，0.5 ml抗凝血用于流式檢測，采用FACS Calibur流式細(xì)胞儀檢測CD11b和CD64，免疫比濁分析法測定hs-CPR，光化學(xué)染色檢測血小板，全自動五分類血細(xì)胞分析儀檢測白細(xì)胞。

2 結(jié) 果

2.1 兩組檢測指標(biāo)比較 兩組在WBC和PLT無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);感染組CD11b、Hs-CRP和CD64顯著高于非感染組(t=8.88,P<0.01；t=22.62,P<0.01；t=24.79,P<0.01，表2)。

表2 兩組早產(chǎn)兒檢測指標(biāo)比較

注：與非感染組比較，①P<0.01

2.2 兩組CD11b、Hs-CRP、CD64三項指示物的最佳截斷值、AUC、敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值和95%置信區(qū)間 AUC曲線下面積CD11b>CD64>Hs-CRP；敏感性CD11b>CD64>Hs-CRP；特異性CD11b>CD64>Hs-CRP；陽性預(yù)測值CD11b>Hs-CRP>CD64；陰性預(yù)測值CD11b>Hs-CRP>CD64。見表3和圖1。

表3 兩組患者CD11b、Hs-CRP、CD64三項指示物的最佳截斷值、AUC、敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值和95%置信區(qū)間

圖1 CD11b、Hs-CRP和CD64的ROC曲線

3 討 論

由于孕周32后，胎兒才逐步接受母親的免疫球蛋白，因此，早產(chǎn)兒一般表現(xiàn)為免疫力低下，血清缺乏調(diào)理素，細(xì)胞吞噬功能差，表皮屏障功能比較差，患兒非常容易受到各種病原體的侵襲，導(dǎo)致許多不良結(jié)果的發(fā)生，比如壞死性腸炎、感染性肺炎或者敗血癥[5]。早產(chǎn)兒細(xì)菌早期感染無明顯特征，診斷較困難。但是感染一旦發(fā)生，病情進(jìn)展相當(dāng)快速，有可能在幾小時內(nèi)出現(xiàn)休克和彌散性血管內(nèi)凝血等惡性反應(yīng)[6]。因此，對早產(chǎn)兒感染快速而準(zhǔn)確的檢測具有非常重要的臨床意義。

本研究分別檢測了患兒的WBC、PLT、CD11b、Hs-CRP和CD64，發(fā)現(xiàn)WBC和PLT在感染組和對照組無差異(P>0.05)。WBC是最常用的實(shí)驗室感染指標(biāo)，但據(jù)國外研究顯示對嚴(yán)重細(xì)菌感染患兒進(jìn)行WBC計數(shù)，感染組和非感染組無統(tǒng)計學(xué)差異[7]，本研究取得一致結(jié)果，這可能是由于許多非感染性疾病都可導(dǎo)致白細(xì)胞的計數(shù)增高。血小板(PLT)在傷口愈合、炎性反應(yīng)、血栓形成等生理過程種都扮演著重要角色，25%的新生敗血癥PLT會減少，且隨病情加深而增加減少率[8]，但本研究感染組和非感染組PLT無統(tǒng)計學(xué)差異，可能是由于多種疾病，如呼吸窘迫綜合征、窒息、NEC、DIC 等情況中PLT均會減少，導(dǎo)致PLT檢測的特異性較差。

本研究感染組CD11b、Hs-CRP和CD64顯著高于非感染組(t=8.88,P<0.01；t=22.62,P<0.01；t=24.79,P<0.01)。近年來CRP得到越來越廣泛的應(yīng)用。CRP是一種急性時相蛋白，識別和激活某些影響炎癥和防御機(jī)制的物質(zhì)，在炎癥狀態(tài)下，CRP會發(fā)生數(shù)十倍的急劇增加，常作為細(xì)菌感染的早期指標(biāo)。由于受到檢測下限的影響,常規(guī)檢測難以發(fā)現(xiàn)低水平的CRP變化，通過hs-CRP技術(shù)可提高CRP檢測能力提高到0.15 mg/L，因而增強(qiáng)了其臨床使用價值[9]，本研究發(fā)現(xiàn)感染組hs-CRP顯著高于對照組。目前，不同研究中對于hs-CRP檢測靈敏度各不相同，如以3 mg/L為診斷閾值時，診斷敏感性在49.3%～96%，其檢測敏感性達(dá)64.0%。新生兒感染具有顯著的低治療風(fēng)險和高風(fēng)險漏診特點(diǎn)，檢測的敏感性尤為重要，而hs-CRP對新生兒的檢測敏感性不足，因此不可將hs-CRP作為新生兒檢測的唯一指標(biāo)。

在正常人群中，CD64主要在單核、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞表面表達(dá)，在中性粒細(xì)胞的表達(dá)很低。但是，當(dāng)細(xì)胞受到感染時，CD64在中性粒細(xì)胞的表面就會產(chǎn)生高表達(dá)的現(xiàn)象。臨床上把CD64的高表達(dá)作為早產(chǎn)兒出現(xiàn)感染的指標(biāo)。在一項白血病研究中，研究者認(rèn)為，CD64具有良好的敏感性和特異性。本研究CD64的敏感性和特異性分別為0.84和0.90。CD11b是中性粒細(xì)胞表面含量最多的一種細(xì)胞表面抗原，接觸到細(xì)菌后即可迅速增加，被認(rèn)為是細(xì)菌感染的早期檢測指標(biāo)。圍生期高危感染患兒可見中性粒細(xì)胞CD11b表達(dá)增高，在對四種白細(xì)胞表面標(biāo)記物CD25、CD45RO、CD11b和CD64的研究結(jié)果中顯示，對于極低出生體重兒而言，CD11b在晚發(fā)性敗血癥時同時擁有較高的敏感性和特異性[10]，在最佳臨床診斷界值時中性粒細(xì)胞CD11b敏感性和特異性分別為91%和87%。本研究發(fā)現(xiàn)，CD11b敏感性和特異性分別為0.90和0.98，均高于CD64，這對于早產(chǎn)兒感染具有最高的敏感性和特異性。

綜上所述，外周血CD11b陽性細(xì)胞對早產(chǎn)兒早期感染的診斷價值高于hs-CPR和CD64陽性細(xì)胞，檢測僅需要少量檢測樣品，檢測時間短。但在進(jìn)一步的研究中應(yīng)建立統(tǒng)一的臨床檢測標(biāo)準(zhǔn)，為今后推廣使用提供理論基礎(chǔ)。

【】

[1] 郭麗俠,楊宇艷,高彩云,等.早產(chǎn)兒免疫功能變化及其感染危險因素分析[J].山東醫(yī)藥,2015,21(23):44-45.

[2] 陳 睿,馬麗亞,鐘文明,等.流式細(xì)胞儀分析指標(biāo)與傳統(tǒng)感染指標(biāo)在早產(chǎn)兒感染早期診斷中的比較[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2014,18(10):1248-1250.

[3] 陳 睿,陳 幽,馬麗亞,等.CD11b及CD64在早產(chǎn)兒感染早期診斷中意義[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志,2013,27(6):548-550.

[4] 邱麗影,張曉平,任力群,等.T淋巴細(xì)胞亞群聯(lián)合C-反應(yīng)蛋白檢測對早產(chǎn)兒感染性疾病的意義[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2012,9(1):40-41.

[5] 李 燕,韋秋芬,潘新年,等.不同胎齡新生兒細(xì)胞和體液免疫功能檢測[J].中國當(dāng)代兒科雜志,2014(11):1118-1121.

[6] 逯 軍,黃圓圓,梁寶仁,等.白細(xì)胞介素-6和白細(xì)胞介素-8在早期監(jiān)測早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征中的意義[J].中國新生兒科雜志,2013,28(5):324-325.

[7] Petit E, Abergel A, Dedet B,etal. The role of infection in preterm birth[J]. J Gynecol Obstet Biol Reprod, 2012, 41(1):14-25.

[8] 俞生林.新生兒膿毒血癥免疫作用機(jī)制的基礎(chǔ)和臨床研究[D].蘇州大學(xué),2012.

[9] 安 蕊.早產(chǎn)兒腦損傷外周血NK細(xì)胞與T細(xì)胞亞群變化研究[D].鄭州大學(xué),2014.

[10] Aeli R, Kyo Hoon P, Kyung Joon O,etal. Predictive value of combined cervicovaginal cytokines and gestational age at sampling for intra-amniotic infection in preterm premature rupture of membranes.[J]. Acta Obstet Gynecol Scand, 2013, 92(5):517-524.