（休寧縣動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，安徽休寧 245400）

禽流感病毒屬于正黏病毒科流感病毒屬，是一種氣球樣有包膜的單股負(fù)鏈RNA病毒，可分為16個(gè)H亞型和9個(gè)N亞型，H7N9流感病毒感染家禽后，無明顯臨床癥狀，此次休寧縣發(fā)生的人感H7N9流感病例，縣畜牧獸醫(yī)部門聯(lián)合衛(wèi)生計(jì)生部門開展了流行病學(xué)調(diào)查，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷，隨后采取撲殺措施，把出現(xiàn)第二例人感病例的風(fēng)險(xiǎn)降到最低。通過分析這起人感H7N9流感病例，對重大動(dòng)物疫病防控，特別是H7N9流感防控具有意義。

1 流調(diào)及采樣

2017年1月14日 晚20點(diǎn)，縣衛(wèi)計(jì)委通報(bào)，縣人民醫(yī)院有一名初步診斷為H7N9流感的患者，據(jù)患者反映近期有活禽接觸史。15日上午6點(diǎn)，縣動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心分4組赴養(yǎng)殖戶及活禽批發(fā)市場開展流行病學(xué)調(diào)查和采樣。

1.1 流調(diào)

1.1.1 基本情況

患者所在村民組共47戶，148人，存欄散養(yǎng)家禽1018羽?；颊哂?016年12月28日和2017年1月4日，分兩次從外村雞販子處，購買10只黃羽肉雞，本村民組還有其他3戶村民同批購買了17只黃羽肉雞。截至調(diào)查時(shí)，除患者家中死亡2只肉雞外，其他戶也死亡2只肉雞。雞販子所販賣的黃羽肉雞來自本市一活禽批發(fā)市場。

1.1.2 臨床癥狀

未見雞冠出血或發(fā)紺、頭部和面部水腫、腳鱗出血等高致病性禽流感臨床癥狀，也未見呼吸急促、咳嗽、喘氣、精神沉郁等癥狀，僅出現(xiàn)黃綠色糞便。據(jù)養(yǎng)殖戶反映死亡的雞也沒有出現(xiàn)腳鱗出血和雞冠出血癥狀。

1.2 樣品采集

參考《高致病性禽流感防治技術(shù)規(guī)范》，分4組采集樣品，一組赴外購黃羽肉雞養(yǎng)殖戶家中，共采集23份全血和雙腔拭子；二組赴村內(nèi)其他散養(yǎng)戶家中，重點(diǎn)采集患者及同批外購黃羽肉雞周邊的散養(yǎng)戶，共采集32份全血和雙腔拭子；三組赴村外養(yǎng)雞大戶家中，采集44份全血和雙腔拭子；四組赴城區(qū)活禽交易市場，采集20份環(huán)境樣，54份全血和雙腔拭子。雙腔拭子采集后，放入密閉的塑料袋內(nèi)（一個(gè)采樣點(diǎn)的樣品，放一個(gè)塑料袋），于保溫箱中加冰、密封，送市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心實(shí)驗(yàn)室檢測。全血經(jīng)離心后，放入離心管中，編號，冷藏，縣動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心檢測。

2 實(shí)驗(yàn)室檢測

2.1 檢測試劑

禽流感病毒 H5（Re-6 株）亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原（哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司出品，批號 2015033）；H7亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原（哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司出品，批號2015031）；禽流感病毒H7亞型RT-PCR檢測試劑盒（北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司產(chǎn)品，批號AIVH7 20161216P）。

2.2 檢測方法

2.2.1 禽流感病原學(xué)檢測

按禽流感病毒RT-PCR檢測方法（NY/T 772-2013）。從樣品中提取病毒 RNA 后，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以RNA為模板，以引物為起點(diǎn)合成與RNA模板互補(bǔ)的cDNA鏈，在TaqDNA聚合酶的作用下，經(jīng)過高溫變性、低溫退火、中文延伸的循環(huán)，使特異DNA片段的拷貝數(shù)放大一倍。經(jīng)過35次循環(huán)，最終使擴(kuò)增DNA片段放大數(shù)百萬倍。將擴(kuò)增DNA片段進(jìn)行電泳，經(jīng)染色后在紫外燈照射下，可見到DNA片段的擴(kuò)增帶，實(shí)現(xiàn)檢測AIV-H7亞型核酸的目的。

2.2.2 禽流感抗體檢測

按高致病性禽流感診斷技術(shù)（GB/T 18936—2003）進(jìn)行血凝和血凝抑制試驗(yàn)。

2.3 檢測結(jié)果

2.3.1 血清學(xué)檢測結(jié)果

共檢測153份家禽血清，H5抗體合格率96.73%，H7抗體陽性率為16.99%。其中4戶外購黃羽肉雞戶所采樣品H7抗體陽性率為95.65%；周邊散養(yǎng)戶所采樣品H7抗體陽性率為0%；養(yǎng)殖大戶所采樣品H7抗體陽性率為4.55%；城區(qū)活禽交易市場所采樣品H7抗體陽性率為3.7%；外購黃羽肉雞戶所采樣品中，H7抗體效價(jià)達(dá)到9孔以上占34.78%，8孔占17.39%，7孔占17.39%，6孔占13.04%，5孔占8.7%，4孔占4.35%，3孔占4.35%。

2.3.2 病原學(xué)檢測結(jié)果

根據(jù)市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果顯示，共檢測32份病原學(xué)樣品，6份陽性，陽性率為18.75%，外購黃羽肉雞戶所檢測樣品的陽性率為38.46%，周邊散養(yǎng)戶及規(guī)模養(yǎng)殖戶所檢樣品陽性率為0%。

3 處置

3.1 家禽處置

為防止陽性帶毒家禽將H7N9流感病毒傳染到本村其他散養(yǎng)家禽或野鳥，參照《高致病性禽流感防治技術(shù)規(guī)范》，對村內(nèi)所有家禽進(jìn)行撲殺，將家禽及其墊料一并深埋無害化處理。

3.2 活禽交易市場處置

城區(qū)內(nèi)兩個(gè)活禽交易市場休市，清洗活禽交易攤點(diǎn)的禽籠、宰殺設(shè)施，指導(dǎo)交易市場管理方對交易攤點(diǎn)每日早晚各用漂白粉消毒一次。

4 討論

4.1 患者H7N9流感病毒傳染源

此H7N9流感患者為一名58歲的男性，發(fā)病前16d和9d，妻子分兩次外購了10只黃羽肉雞，存在家禽暴露史，發(fā)病前一天還從事未充分發(fā)酵的雞糞鋪攤還田，患者自身體質(zhì)較弱。從患者外購的黃羽肉雞雙腔拭子中檢測出H7N9流感病毒，且血清學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示患者外購的黃羽肉雞H7抗體效價(jià)全部為陽性（效價(jià)達(dá)到9孔的占50%）。提示該患者的傳染源很有可能是外購黃羽肉雞及其分泌排泄物。由于H7N9流感當(dāng)前在我國養(yǎng)禽場的具體流行情況尚未明確[1]，所以黃羽肉雞的H7N9流感病毒來源有可能來自本市這家農(nóng)產(chǎn)品批發(fā)市場，可能來自雞販子販賣途中經(jīng)過區(qū)域，也有可能為當(dāng)?shù)匾傍B。由于患者及其家屬從未前往城區(qū)活禽交易市場，所以可以排除本地活禽交易市場暴露傳染。

4.2 處置措施

為避免再次出現(xiàn)人感H7N9病例，根據(jù)市、縣實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，迅速采取撲殺無害化處理措施、消毒滅源措施和定期采樣監(jiān)測措施。在當(dāng)?shù)厝嗣裾?、畜牧獸醫(yī)局工作人員和村級防疫員的共同努力下，完成H7N9人感流感應(yīng)急處置工作。

4.3 活禽批發(fā)市場監(jiān)管

此次被感染的活禽均來自活禽批發(fā)市場，批發(fā)市場銷售的活禽來自外省，作為市場監(jiān)管應(yīng)在活禽進(jìn)場前，快速檢測該批次家禽是否攜帶H7N9流感病原。在農(nóng)業(yè)部2017年4月出臺2516號公告后，市場監(jiān)管方應(yīng)向活禽批發(fā)商販索取活禽H7N9流感抗體檢測報(bào)告。并嚴(yán)格執(zhí)行“1110制度”。

4.4 實(shí)驗(yàn)室診斷重要性

此次人感H7N9流感病例出現(xiàn)后，市縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室迅速開展病原學(xué)和血清學(xué)檢測，通過實(shí)驗(yàn)室診斷，為采取措施提供科學(xué)依據(jù)，充分體現(xiàn)出市縣獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室診斷的重要性。

4.5 強(qiáng)制免疫必要性

自2017年9月起，農(nóng)業(yè)部要求在家禽中開展H5H7二價(jià)苗強(qiáng)制免疫，經(jīng)過強(qiáng)制免疫后，我國人感H7N9流感病毒大幅下降，據(jù)統(tǒng)計(jì)2016年10月1日至2017年第15周全國共610人感染，2017年10月1日至2018年4月16日，全國只有4人感染。

[1]劉沛增，莊青葉.我國 9 省份 H7N9 亞型禽流感和傳染性支氣管炎病原流行病學(xué)調(diào)查[J].畜牧與獸醫(yī)，2014，46（7）：101-105.