劉幫艷， 李金玲，2， 曹國(guó)璠， 鄭 聽， 李永喬， 趙 致，2， 王華磊，2

(1.貴州大學(xué)農(nóng)學(xué)院，貴州貴陽 550025； 2.貴州藥用植物繁育與種植重點(diǎn)(工程)實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽 550025)

太子參為石竹科植物孩兒參[Pseudostellariaheterophylla(Miq.) Pax ex Pax et Hoffm.]的干燥塊根，為名貴中藥材，具有益氣健脾、生津潤(rùn)肺等功效[1-2]。目前，有關(guān)太子參的研究多集中在藥理、藥效、化學(xué)成分及制備工藝等方面[3-10]，隨著人們對(duì)藥用植物來源研究的重視，太子參繁殖方式、播種時(shí)間、播種方式、田間管理及病蟲害防治等相關(guān)研究也在不斷深入[11-15]。海拔作為作物生長(zhǎng)的重要環(huán)境之一，對(duì)作物生長(zhǎng)、生理代謝等具有較大調(diào)節(jié)作用，有研究表明，高海拔環(huán)境能提高人參、牛蒡、當(dāng)歸等根類藥材的產(chǎn)量或藥用成分含量[16-19]。本試驗(yàn)通過對(duì)比分析高海拔環(huán)境下太子參各生育時(shí)期的礦質(zhì)元素、藥用成分及生物產(chǎn)量的積累情況，以期為高海拔栽培推廣太子參提供理論支撐，為高效栽培太子參提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

采自貴州省施秉縣的太子參施太1號(hào)種根，經(jīng)貴州大學(xué)農(nóng)學(xué)院王華磊教授鑒定石竹科植物孩兒參種根。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器 Kjeltec 8400型凱式定氮儀，由丹麥福斯集團(tuán)公

司提供；Optima 8100型電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(inductive coupled plasma emission spectrometer，簡(jiǎn)稱ICP)，由鉑金埃爾默儀器有限公司提供；101-3AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱、SX-12-10型箱式電阻爐控制箱，由天津泰斯特儀器有限公司提供；MM400型球磨儀，由德國(guó)Retsch公司提供。

1.2.2 試劑 磷、鉀、鐵、錳、銅、鋅、硼、鈣、鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液，均購于國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心；標(biāo)準(zhǔn)品D-無水葡萄糖、人參皂苷Rb1，購于中國(guó)食品藥品檢定研究所。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)計(jì)2個(gè)海拔種植太子參，分別為2 157、677 m。海拔 2 157 m 為高海拔環(huán)境，地處貴州省六盤水鐘山區(qū)大箐村(編號(hào)為L(zhǎng)PS)，地理位置為104°49′49.1″ E、26° 43′32″ N，屬北亞熱帶濕潤(rùn)季風(fēng)氣候區(qū)；海拔677 m為太子參常規(guī)栽培海拔，地處貴州省施秉縣甘溪鄉(xiāng)高碑村毛栗坪組(編號(hào)為SBX)，地理位置為108°13′58.5″ E、27°1′47.5″ N，屬亞熱帶濕潤(rùn)季風(fēng)氣候區(qū)。2個(gè)試驗(yàn)地基本環(huán)境情況見表1、表2，采用大田種植太子參，2015年12月進(jìn)行栽種，種根用種量為1 200 kg/hm2，8月采收。每個(gè)海拔設(shè)3個(gè)小區(qū)，每個(gè)小區(qū)面積為1.2 m×10 m，栽培方式及田間管理均同太子參常規(guī)管理。

表1 不同試驗(yàn)地土壤環(huán)境情況

1.4 測(cè)定內(nèi)容和方法

1.4.1 生物量 分別于太子參苗期(3—4月)、塊根初始膨大期(4—5月)、塊根膨大旺盛期(5—6月)、塊根膨大后期(6—7月)及倒苗營(yíng)養(yǎng)回流期(7—8月)，采用“五點(diǎn)法”隨機(jī)連根挖取長(zhǎng)勢(shì)一致的太子參植株，每個(gè)小區(qū)取10株，每個(gè)海拔地每次共取樣30株；洗凈后用吸水紙吸干植株表面水分，將莖、葉、花果(地上部分)與塊根、須根(地下部分)分開，于55 ℃條件下烘干， 用電子天平(精度為0.000 1 g) 分別稱其干質(zhì)量；球磨儀打粉，備用。太子參完全倒苗后進(jìn)行測(cè)產(chǎn)，將塊根洗凈，于55 ℃條件下烘干，選取適量太子參干品打粉，備用。

表2 不同試驗(yàn)地土壤氣候狀況

注：7月為當(dāng)?shù)叵鄬?duì)最熱月，6月為降水量最多月，1月為最冷與降水最少月。

1.4.2 礦質(zhì)元素 稱取約0.5 g太子參樣品粉末于坩堝中，馬弗爐內(nèi)600 ℃灰化，灰分用5 mL 1 ∶1硝酸溶液溶解，超純水定容至25 mL，采用ICP分別測(cè)定磷、鉀、鐵、錳、銅、鋅、硼、鈣、鎂含量；使用濃硫酸消煮樣品，凱氏定氮儀測(cè)定全氮含量。

1.4.3 藥用成分 參照閆亮等的方法[20]進(jìn)行索式提取太子參多糖，硫酸-苯酚法顯色，酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm處的吸光度D490 nm。以D-無水葡萄糖(含量以99.9%計(jì))為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：葡萄糖含量(A)=125.03D490 nm-0.552 1(r2=0.999 1，n=7)，該方程在0～50.5 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

總皂苷測(cè)定方法為：稱取約0.5 g太子參粉末于帶塞錐形瓶中，加20 mL三氯甲烷，80%功率超聲2次，每次1 h；過濾，濾紙同濾渣放入錐形瓶中，精密加入25 mL水飽和正丁醇溶液，超聲2次，每次1 h；過濾，取10 mL濾液，蒸干，甲醇溶解，容量瓶中定容至10 mL；取2 mL置于具塞試管中，加5 mL濃硫酸、0.2 mL香草醛-冰乙酸溶液，搖勻，60 ℃條件下水浴30 min，其間不斷搖動(dòng)；冷卻，酶標(biāo)儀測(cè)定560 nm處的吸光度D560 nm。以人參皂苷Rb1(含量以93.7%計(jì))為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：人參皂苷含量(A)=0.217D560 nm+0.021 9(r2=0.999 4)，該方程在0.101 6～1.525 0 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 太子參生物量的動(dòng)態(tài)積累

試驗(yàn)結(jié)果表明，SBX太子參于2月5日開始出苗，7月15日完全倒苗，從出苗至完全倒苗共160 d；LPS太子參于3月1日開始出苗，8月28日完全倒苗，從出苗至完全倒苗共 181 d，高海拔環(huán)境下的太子參出苗與倒苗時(shí)間較常規(guī)海拔地推遲，生育期較常規(guī)栽培海拔地長(zhǎng)。由圖1-a可見，太子參地上部分干質(zhì)量呈“增加-減少-增加”趨勢(shì)，LPS太子參各生育時(shí)期地上部分干質(zhì)量明顯高于SBX；LPS太子參地下部分干質(zhì)量呈“增加-減少-增加”趨勢(shì)，SBX呈緩慢增加再略減少的趨勢(shì)(圖1-b)；LPS太子參各生育時(shí)期生物量明顯高于SBX，說明高海拔地利于太子參生物量的形成與積累。SBX太子參地上部分干質(zhì)量快速增長(zhǎng)期為4月中旬至5月初，5月初達(dá)到最大值，為2.07 g/株，LPS則為4月中旬至5月中旬，5月中旬達(dá)到最大值，地上部分干質(zhì)量為3.71 g/株；LPS、SBX太子參地下部分干質(zhì)量的積累速度與地上部分干質(zhì)量整體呈一定的正相關(guān)。

2.2 太子參多糖、總皂苷等藥用成分的動(dòng)態(tài)積累

由圖2可知，SBX太子參各生育期多糖含量高于LPS，總皂苷含量低于LPS；LPS、SBX太子參多糖含量在各生育期內(nèi)總體呈先增加后減少再增加趨勢(shì)，倒苗期時(shí)多糖含量分別達(dá)到11.42%、13.97%；SBX太子參總皂苷含量在倒苗前期呈緩慢減少的變化趨勢(shì)，后有所增加，倒苗期時(shí)總皂苷含量為1.63%，LPS太子參總皂苷含量呈“增加-減少-增加-緩慢減少”的波動(dòng)變化趨勢(shì)，倒苗期時(shí)總皂苷含量2.36%。這說明較低海拔利于太子參多糖的形成和積累，高海拔利于太子參總皂苷的形成與積累。

2.3 太子參礦質(zhì)元素的動(dòng)態(tài)變化

2.3.1 大量、中量元素 由圖3可知，在同一個(gè)海拔高度種植的太子參各生育期地上部分的N含量均高于地下部分；不同海拔地上、地下部分的N、P含量變化趨勢(shì)基本一致，總體呈“下降-增加-下降-趨于平緩”的波動(dòng)變化，SBX太子參N、P含量增加高峰期為5月初，LPS則為6月中下旬；LPS太子參植株的N含量較高于SBX，而SBX太子參植株的P含量明顯高于LPS；在整個(gè)生長(zhǎng)期，太子參地上部分K含量明顯大于地下部分；地上部分K含量呈先下降后增加趨勢(shì)，SBX太子參地上部分K含量最低出現(xiàn)在4月中旬， 為35.29 mg/g，LPS則出現(xiàn)在5月中旬，為 24.60 mg/g；地下部分K含量隨太子參生長(zhǎng)總體呈逐漸下降趨勢(shì)； LPS太子參地上部分K含量總體低于SBX，而地下部分K含量總體高于SBX，LPS太子參地上、地下部分的K含量分配較SBX均衡；不同海拔種植的太子參地上部分Ca、Mg含量多呈“下降-上升-下降”變化趨勢(shì)，SBX太子參地上部分Ca含量在塊根膨大后又有增加，地下部分Ca、Mg含量則呈“W”形變化；LPS太子參各生育期Ca、Mg含量稍高于SBX；SBX太子參地上、地下部分Ca、Mg含量第1次峰值出現(xiàn)在5月初，與N、P含量出現(xiàn)峰值時(shí)間一致；LPS地上部分Ca、Mg含量峰值出現(xiàn)在7月初，含量分別為17.78、4.65 mg/g，地下部分Ca、Mg含量第1次峰值分別出現(xiàn)在5月中旬、6月中旬，含量分別為4.72、2.42 mg/g。

2.3.2 微量元素 由圖4可知，海拔高度對(duì)太子參微量元素含量具有明顯的影響。LPS太子參Fe含量高于SBX，其地上、地下部分Fe含量峰值均出現(xiàn)在6月中旬，分別為3.27、2.42 mg/g；SBX太子參地上部分Fe、Mn含量峰值也出現(xiàn)在6月中旬，F(xiàn)e、Mn含量分別為1.02 mg/g、466.09 μg/g，其地下部分Fe、Mn含量則隨生育期逐漸減少；LPS太子參地上、地下部分Mn含量呈“下降-上升-下降”的變化趨勢(shì)，分別在7月初、6月中旬出現(xiàn)峰值，Mn含量分別為421.76、132.63 μg/g；不同海拔太子參地上、地下部分Cu、Zn含量整體呈“下降-上升-下降”的變化趨勢(shì)，SBX地上部分Cu、Zn含量峰值出現(xiàn)在6月初，含量分別為7.02、36.03 μg/g，LPS地上部分Cu、Zn含量峰值出現(xiàn)在7月初，含量分別為8.20、81.26 μg/g；SBX太子參地下部分Cu、Zn含量低于LPS，LPS地下部分Cu含量峰值出現(xiàn)在6月中旬，含量為14.38 μg/g。SBX太子參地上部分B含量呈先增加后下降趨勢(shì)，而其地下部分B含量與LPS地上、地下部分B含量均隨生育期呈“下降—上升—下降”的變化趨勢(shì)。

3 結(jié)論與討論

高海拔區(qū)域地形高，晝夜溫差大，云霧多，濕度大，太陽輻射較強(qiáng)，氣候環(huán)境各異，為植物的生長(zhǎng)提供差異較大的光、溫、水、熱環(huán)境，對(duì)作物生長(zhǎng)及次級(jí)代謝產(chǎn)物積累具有較大的調(diào)節(jié)作用。張秀麗等研究表明，人參總皂苷的含量隨海拔升高而升高[16]；李竹英等研究得出，隨著海拔的升高，牛蒡根中蛋白質(zhì)、氨基酸、淀粉含量增加，而可溶性糖及脂肪含量降低[18]；李明世等研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸揮發(fā)油的含量隨海拔升高呈逐漸增加的趨勢(shì)[19]；研究海拔高度對(duì)天麻生產(chǎn)影響得出，1 km以上的海拔利于天麻產(chǎn)量及品質(zhì)的提高，還能縮短天麻生育期，提高生產(chǎn)效率[21-22]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，海拔為2 157 m高海拔環(huán)境(LPS)栽種的太子參，其地上莖、葉部分及地下根的干物質(zhì)積累在各生育期均高于海拔為677 m的常規(guī)栽培海拔(SBX)，且地上部分莖、葉干質(zhì)量較大時(shí)，其地下根的干物質(zhì)積累速度相對(duì)較快，可能是由于高海拔輻射相對(duì)較強(qiáng)，有利于太子參葉片的形成與生長(zhǎng)，同時(shí)，高海拔晝夜溫差大，利于光合產(chǎn)物的積累；SBX太子參各生育期根部多糖含量高于LPS，總皂苷含量低于LPS，這可能與高海拔環(huán)境脅迫太子參開啟自身抗逆調(diào)節(jié)機(jī)制相關(guān)。

礦質(zhì)元素N、P、K、Mg、Fe、Zn、Cu對(duì)作物光合作用產(chǎn)生一定影響，其吸收與利用影響太子參的產(chǎn)量。高海拔因環(huán)境條件特殊，可能對(duì)各種礦質(zhì)元素的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)具有一定調(diào)節(jié)作用，從而影響各元素在植物體中的含量與分布，改變光合作用的效率，進(jìn)而影響光合產(chǎn)物的形成與積累。LPS、SBX太子參含N較高的時(shí)期為太子參苗期(3-4月)到莖葉茂盛后塊根開始膨大期(4-5月)，因此，基肥中施足N肥是太子參產(chǎn)量與質(zhì)量保證的基礎(chǔ)。在太子參塊根膨大旺盛期(5-6月)太子參地上生物量增加速度相對(duì)較快，積累量大，而此時(shí)太子參中P含量增加，說明該時(shí)期P能促進(jìn)太子參產(chǎn)量的形成。K不但能通過調(diào)節(jié)植物氣孔開閉、促進(jìn)葉綠體內(nèi)電子傳遞等推動(dòng)CO2同化，提高光合效率，而且能促進(jìn)植物碳水化合物輸出及其在塊根、種子等器官中的代謝，有效促進(jìn)塊根等器官的生長(zhǎng)。LPS、SBX太子參在苗期(3-4月)的K含量相對(duì)較高，隨后減少，塊根開始膨大時(shí)又快速增加，說明前期較高的K促進(jìn)了太子參葉片的形成，提高了光合葉面積，后期增加的K利于光合產(chǎn)物向根部轉(zhuǎn)運(yùn)，這與太子參單株地上、地下部分生物積累量的變化相一致。因此，在基肥施足P、K的基礎(chǔ)上，于太子參塊根膨大旺盛期(5-6月)追施P、K肥可保證太子參的產(chǎn)量，提高其質(zhì)量。在各生育時(shí)期，LPS太子參地上部分Ca含量高于SBX，且不同海拔種植的太子參，其地上部分Ca含量均在太子參塊根旺盛膨大期增長(zhǎng)相對(duì)最快，含量也相對(duì)較高，這可能是由于Ca主要通過木質(zhì)部的蒸騰作用向上運(yùn)輸，很難由韌皮部運(yùn)輸，太子參塊根膨大旺盛期時(shí)地上莖發(fā)育成熟，再加上5-7月雨水充足、光照良好，有利于太子參的蒸騰作用，從而促進(jìn)了Ca從根部向地上莖葉部分的運(yùn)輸，且LPS處于高海拔，晝夜溫差大，更利于Ca的運(yùn)輸。SBX太子參N、P、Ca、Mg的變化趨勢(shì)較為一致，可在5月上中旬進(jìn)行混合追施。有研究表明，Mn、B能夠使甜菜、馬鈴薯塊根產(chǎn)量和含糖量增加，其中，B參與植物體內(nèi)糖的運(yùn)輸，當(dāng)B供給充足時(shí)，能促進(jìn)糖的運(yùn)輸；Mn能激活糖酵解和三羧酸循環(huán)反應(yīng)途徑中許多酶的活性，為代謝產(chǎn)物的生成及運(yùn)輸提供足夠的ATP。本試驗(yàn)表明，LPS地上部分Mn、B含量在太子參各生育期總體上低于SBX，這可能是限制LPS太子參多糖向根部轉(zhuǎn)運(yùn)，而使得LPS多糖含量低于SBX的主要原因。

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