黎運(yùn)西 馮晨浩 嚴(yán)達(dá)尊 謝景齊 楊杰明 蔡雪

低密度脂蛋白受體（LDLR）是一種細(xì)胞介導(dǎo)低密度脂蛋白的攝取和代謝的一類跨膜蛋白［1］。迄今共發(fā)現(xiàn)有6類LDLR家族成員：LDLR、極低密度脂蛋白受體（VLDLR）、卵細(xì)胞卵黃生成受體（OVR）、低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白（LRP）、腎炎抗原（Gp330）、Megalin。其中LDLR、VLDLR、OVR和LRP主要結(jié)合含有Apo B、Apo E的脂蛋白，參與膽固醇、甘油三酯的代謝，與脂蛋白代謝密切相關(guān)，在動(dòng)物體內(nèi)蛋白吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和沉積的代謝中發(fā)揮重要功能。本文探討人LDLR基因表達(dá)水平在高膽固醇血癥患者中的變化情況及其與血脂水平的相關(guān)性，為該病預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2016年1月至12月本院高膽固醇血癥患者24例（觀察組），男13例，女11例；平均年齡（60±12）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：血清膽固醇含量＞5.72mmol/L、無免疫性疾病、心肌缺血、肝、腎、甲狀腺功能障礙和癌癥、無服用激素類、免疫抑制類藥物史者。另選擇本院體檢健康者23例為對(duì)照組。男10例，女13例；平均年齡（53±12）歲。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法 （1）生物學(xué)檢測(cè)：用希森美康XN1000血球分析儀檢測(cè)其白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞。用貝克曼5821全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清總膽固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、血清載脂蛋白A1（Apo A1）、血清載脂蛋白B（Apo B）、C反應(yīng)蛋白（CRP）、血糖（GLU）等。（2）LDLR基因的相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)：以含EDTA-K2抗凝全血為原料，使用RNAprep Pure血液總RNA提取試劑盒（離心柱型）提取RNA，使用FastQuant cDNA第一鏈合成試劑盒反轉(zhuǎn)錄成cDNA。用實(shí)時(shí)熒光定量多聚酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）檢測(cè)LDLR基因表達(dá)水平，應(yīng)用中山大學(xué)達(dá)安基因所提供的核酸擴(kuò)增儀，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶為內(nèi)參系統(tǒng)，采用25μl的以下反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增：2×SuperReal PreMix Plus12.5μl、正向引物（10μM）1μl、反向引物（10μM）1μ、lcDNA 模板 2μl、50×ROX Reference Dye 2.5μl、RNanse-free ddH2O 6μl。擴(kuò)增模式：95℃孵育15min預(yù)變性，激活大部分HotStar Taq DNA聚合酶，95℃條件下變性10s、60℃退火20s、72℃延伸31s為一個(gè)循環(huán)進(jìn)行40個(gè)循環(huán)擴(kuò)增，并在每一個(gè)循環(huán)72℃延伸末期進(jìn)行熒光信號(hào)采集。40個(gè)循環(huán)后通過軟件分析獲取CT值，并用公式算出基因模板的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。正態(tài)分布計(jì)量資料以（x±s）表示，用t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布計(jì)量資料以中位數(shù)和四分位數(shù)表示，用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。正態(tài)變量用pearson相關(guān)分析，非正態(tài)變量則用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組各檢測(cè)項(xiàng)目比較 與對(duì)照組比較，高膽固醇血癥患者的白細(xì)胞（WBC）計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（N）、GLU、TC、TG、LDL-C、ApoB、LDLR基因相對(duì)表達(dá)量顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。見表 1。

表1 兩組各檢測(cè)項(xiàng)目比較（x±s）

2.2 高膽固醇血癥患者血脂水平與LDLR水平的相關(guān)性 高膽固醇血癥患者TG水平、ApoA1水平與LDLR基因的相對(duì)表達(dá)量呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表2。

表2 觀察組血脂與LDLR水平的相關(guān)性

3 討論

本資料結(jié)果表明，高膽固醇血癥患者的TC、TG、LDL-C、ApoB升高可能與LDLR基因相對(duì)表達(dá)量改變有關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道，新型降血脂藥通過作用于LDLR而發(fā)揮降血脂作用［2］，提示可通過改變LDLR基因表達(dá)水平的方式進(jìn)行血脂調(diào)節(jié)。另有文獻(xiàn)報(bào)道，嚴(yán)重動(dòng)脈粥樣硬化和高膽固醇血癥的小鼠缺乏黑皮素4型受體和低密度脂蛋白受體兩種物質(zhì)［3］，表明其可能機(jī)制為低密度脂蛋白受體水平的下降負(fù)反饋刺激低密度脂蛋白受體基因的表達(dá)升高。在俄羅斯，家族性高膽固醇血癥由低密度脂蛋白受體的c.1327 T＞C（p.W433R）突變引起［4］，而中國(guó)人家族性高膽固醇血癥患者的表征是低密度脂蛋白受體基因特有的w483x突變或前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9-resistant r410s基因突變［5-6］。

本資料結(jié)果顯示，高膽固醇血癥患者的白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞水平顯著升高，表明高膽固醇血癥患者出現(xiàn)與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的血管炎癥狀態(tài)。高膽固醇血癥患者LDLR基因的mRNA水平的上調(diào)與TG及ApoA1水平均呈正相關(guān)關(guān)系。其機(jī)制可能為TG水平升高和低密度脂蛋白受體水平的下降負(fù)反饋刺激低密度脂蛋白受體基因的mRNA水平的上調(diào)，協(xié)同ApoA1水平的上調(diào)共同調(diào)節(jié)TC和LDL-C水平。

總之，高膽固醇血癥患者LDLR基因的mRNA水平的升高與血脂水平密切相關(guān)，LDLR基因表達(dá)參與高膽固醇血癥降脂作用。

［1］ 李宏,袁施彬.低密度脂蛋白在脂蛋白代謝中的作用及其調(diào)控.中國(guó)畜牧雜志,2010,46(19):72-76.

［2］ Scharnagl H, M arz W. New lipid-lowering agents acting on LDL receptors.Curr Top Med Chem, 2005, 5 (3):233-242.

［3］ Lede V,Franke C,Meusel A,et al. Severe Atherosclerosis and Hypercholesterolemia in Mice Lacking Both the Melanocortin Type 4 Receptor and Low Density Lipoprotein Receptor. PLoS One, 2016,11(12): e0167888.

［4］ Korneva VA,Kuznetsova TY, Murtazina RZ,et al. The Familial Hypercholesterolemia Caused by a Novel Human Low Density Lipoprotein Receptor Gene Mutation c.1327 T＞C (p.W433R).Kardiologiia, 2017,57(2):12-16.

［5］ Jiang L,Sun LY, Pan XD,et al. Characterization of the unique Chinese W483X mutation in the low-density lipoproteinreceptor gene in young patients with homozygous familial hypercholesterolemia. J Clin Lipidol, 2016,10(3):538-546.

［6］ Susan-Resiga D,Girard E,Kiss RS,et al. The Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9-resistant R410S Low Density Lipoprotein Receptor Mutation. J Biol Chem, 2017,292,(5):1573-1590.