汪燕 李華偉 李蘭丁 楊南南 王昊

我國是新生兒缺陷高發(fā)國家，根據(jù)世界衛(wèi)生組織估計，我國新生兒缺陷發(fā)生率約5.6%，且呈逐年上升趨勢［1］，已成為影響兒童健康和出生人口素質(zhì)下降的重大公共衛(wèi)生問題。染色體病是造成新生兒缺陷最常見原因之一，且尚無根治方法，目前國內(nèi)已基本建立“孕中期血清學(xué)篩查+羊水染色體核型分析”為主的產(chǎn)前篩查診斷體系，是發(fā)現(xiàn)染色體病、降低新生兒缺陷的重要手段。本文探討羊水染色體核型分析在妊娠中期產(chǎn)前診斷的胎兒染色體異常中的應(yīng)用。

1 臨床資料

1.1 一般資料 2015年1月至2016年12月杭州市產(chǎn)前診斷中心就診的需進行羊膜腔穿刺術(shù)的高風險孕婦4360例。年齡19～46歲，平均年齡（33.05±4.21）歲。孕17～26周，平均孕（20.52±2.18）周。羊水穿刺產(chǎn)前診斷指征為高齡、21-三體綜合征高風險、18-三體綜合征高風險、胎兒無創(chuàng)DNA檢查高風險、超聲異常、夫婦之一為染色體異常攜帶者、不良孕產(chǎn)史等。抽取羊水進行細胞學(xué)培養(yǎng)與染色體核型分析。

1.2 方法 受檢孕婦在B 超引導(dǎo)下進行羊膜腔穿刺術(shù)，棄去最初的1ml羊水后取20ml羊水送檢。無菌條件下將羊水平均分為兩管各10ml，1500r/min離心8min后棄上清液，留取約0.5ml沉淀加入4ml羊水培養(yǎng)基（BIO-AMF-2，BI，以色列），充分混勻后轉(zhuǎn)入25cm細胞培養(yǎng)瓶（BD公司），置37℃5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6d后更換培養(yǎng)基，再過48h后根據(jù)細胞生長情況，常規(guī)方法收獲細胞、制片顯帶，并進行染色體核型分析。每例羊水總共計數(shù)20個核型、分析6個核型，按照《ISCN2009》的標準描述核型。

2 結(jié)果

2.1 染色體培養(yǎng)情況 4360例羊水標本中，4345例穿刺后培養(yǎng)成功，15例培養(yǎng)失敗，培養(yǎng)成功率99.66。

2.2 染色體異常核型分布 見表1。

表1 248例羊水染色體異常核型分布［n（%）］

2.3 不同羊水穿刺指征下異常核型檢出情況 見表2。

表2 不同指征下異常核型檢出情況

2.4 不同羊水穿刺指征的染色體異常真陽性率 見表3。

表3 不同羊水穿刺指征的染色體異常的真陽性率

3 討論

羊膜腔穿刺術(shù)及羊水細胞染色體核型分析是產(chǎn)前診斷胎兒染色體病，降低出生缺陷的經(jīng)典方法［2］。研究顯示新生兒中染色體異常率約為0.85%，據(jù)以往浙江省及杭州地區(qū)產(chǎn)前診斷羊水中染色體異常發(fā)生率3.60%～3.69%［3-4］。本資料結(jié)果顯示染色體異常檢出率為5.71%，與上述研究有所差異。

杭州地區(qū)產(chǎn)前診斷的指征主要為血清學(xué)篩查高風險（50.61%）、高齡（33.83%）、超聲異常（6.17%）、異常妊娠史（4.72%）及無創(chuàng)DNA檢測異常（3.96%）。血清學(xué)篩查相對于其他產(chǎn)前診斷方法操作簡單，易于開展，成本和流產(chǎn)風險也較低［5］，仍然是目前產(chǎn)前診斷的主要指征。血清學(xué)篩查檢出的染色體異常占所有異常病例29.03%，且不局限于21-三體和18-三體，證明傳統(tǒng)的血清學(xué)篩查不僅可篩選出相應(yīng)的染色體數(shù)目異常，還可提示其他類型染色體異常。但該指征存在一定的假陰性率［6］，本資料也顯示21-三體高風險篩查出染色體異常的真陽性率低（2.62%），因而其臨床應(yīng)用策略仍有待進一步優(yōu)化。

近年來無創(chuàng)產(chǎn)前檢測技術(shù)發(fā)展迅速，目前已能可靠地檢測21/18/13三體組合。本資料結(jié)果顯示非整倍體異常仍為杭州地區(qū)胎兒染色體異常的主要組成部分，常見的21-三體（44.35%）、18-三體（14.52%）及13-三體（2.42%）占全部染色體異常核型61.29%。無創(chuàng)DNA檢測技術(shù)因其真陽性率高且異常核型檢出率較高，已逐漸成為一種更為有效的篩查方法。但研究顯示其仍然存在一定程度漏診風險，建議“慎用于產(chǎn)前篩查高風險預(yù)產(chǎn)期年齡≥35歲高齡孕婦及有其他直接產(chǎn)前診斷指針的孕婦”［7］。

本資料顯示，不同指征的真陽性率和染色體異常檢出率并不平行：真陽性率顯示，無創(chuàng)DNA檢測異常（58.14%）較高，18-三體高風險（13.24%）次之；而異常檢出率顯示，無創(chuàng)DNA檢測異常最高（2.30%），其次是21三體高風險（1.24%）和高齡（1.10%）。提示在分析各指征檢出率數(shù)據(jù)時，不僅要關(guān)注指征的敏感度，更要關(guān)注各指征普及程度對檢出率的影響。推測本地區(qū)染色體異常的總體檢出率較往年大幅提高［4］，可能是“無創(chuàng)DNA檢測異?！敝刚饕雽?dǎo)致的結(jié)果。

［1］ 中華人民共和國衛(wèi)生部. 中國出生缺陷防治報告. 2012. 9.

［2］ Aypar U, Thorland EC, Hoppman N. Prenatal diagnosis of chromosome abnormalities: past, present, and future. Clinical chemistry, 2013,59(10): 1432-1434.

［3］ 朱宇寧, 呂時銘, 陳雁, 等. 12841例羊水染色體核型分析與分子技術(shù)應(yīng)用漏診風險分析. 中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2015, 38(8): 517-521.

［4］ 王昊, 汪燕, 孫博, 等. 杭州地區(qū)2151例羊水染色體檢查結(jié)果分析. 中國優(yōu)生與遺傳雜志, 2013, 21(11): 32-33.

［5］ Syngelaki A, Pergament E, Homfray T, et al. Replacing the combined test by cell-free dna testing in screening for trisomies 21, 18 and 13: impact on the diagnosis of other chromosomal abnormalities . Fetal Diagn Ther, 2014, 35(3): 174-184.

［6］ 劉啟蘭,胡婭莉,許爭峰,等.江蘇地區(qū)以人群為基礎(chǔ)的唐氏綜合征產(chǎn)前篩查和診斷研究.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志,2010, 27(3):340-342.

［7］ 中華人民共和國衛(wèi)生計劃生育委員會婦幼健康服務(wù)司.高通量基因測序產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)規(guī)范(試行),2015.