劉志華 馬晨光

1(中國科學(xué)院深圳先進技術(shù)研究院 深圳 518055)

2(北京予求醫(yī)學(xué)研究院 北京 100022)

1 引 言

隨著人口老齡化的加劇，心血管疾病已經(jīng)成為威脅人類生命的“頭號殺手”。缺血性心肌病亦即冠心病，是一種常見的心血管疾病，是由于冠狀動脈粥樣硬化引起管腔狹窄，因此造成心肌供血供氧障礙而引起的心臟病。在臨床上，缺血性心肌病特別是急性期，病人的死亡率及存活病人心力衰竭的發(fā)病率仍然居高不下。缺血性心肌病嚴重危害著患者的身體健康，對患者乃至其家庭和社會的傷害很大。

一切組織、器官正常的機能、代謝和形態(tài)結(jié)構(gòu)的維持，必須有充分的、與代謝相適應(yīng)的血液灌注。如果血液灌流量絕對或相對不足，均可引起相應(yīng)組織、器官不同程度的機能、代謝紊亂和結(jié)構(gòu)損害，即缺血性損傷[1]。不同組織、器官對缺血的耐受性不同，甚至有相當大的差異，但這種變化如果發(fā)生在重要器官(如心臟)，將會給機體帶來嚴重影響。心肌缺血性損傷(Myocardial Ischemic Injury)是由于多種原因引起的冠狀動脈管腔狹窄或阻塞而導(dǎo)致，以冠狀動脈粥樣硬化最常見[2]。

缺血導(dǎo)致心肌發(fā)生細胞水平的損傷及器官水平的功能障礙。目前國內(nèi)外的研究表明，缺血引起心肌細胞氧化應(yīng)激，表現(xiàn)在細胞內(nèi)活性氧(ROS)增多、線粒體呼吸鏈受損[3,4]；同時也引起心肌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激出現(xiàn)[5,6]，導(dǎo)致細胞凋亡[7-9]及自噬[10,11]，嚴重時引起細胞壞死，即心肌梗死。缺血引起心肌組織嚴重的炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)在炎細胞浸潤，包括巨噬細胞、中性粒細胞及 T 細胞等，同時炎細胞及心肌細胞釋放多種炎癥因子，包括 IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、MCP-1等[12,13]。這些病理學(xué)的改變使心肌細胞出現(xiàn)可逆或不可逆的損傷，對心功能造成極為不利的影響。

一直以來，缺血性心肌損傷的分子病理機制備受國際關(guān)注，國內(nèi)外研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多分子和信號通路參與了其中的發(fā)生、發(fā)展[14-19]。相關(guān)的機理涉及多種受體分子(如腺苷受體、α1受體、AngⅡ 受體和 M2受體等)[20]，各種跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制(如受體-抑制性 G 蛋白-腺苷環(huán)化酶系統(tǒng)、受體-磷脂酶 C-蛋白激酶 C 系統(tǒng)、NO-cGMP 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng))[21,22]，多種信號通路(如MAPKs、AKT、NF-κB)[23,24]，同時還包括各種內(nèi)源性保護蛋白(如熱休克蛋白、金屬硫蛋白、氧自由基清除系統(tǒng))[25]。然而，缺血性心肌損傷是個復(fù)雜的病理過程，這些被發(fā)現(xiàn)的分子并不能徹底地詮釋它的病理表現(xiàn)，其中的許多機制還有待探討。極低密度脂蛋白(Very Low Density Lipoprotein，VLDL)受體是低密度脂蛋白受體超基因家族的一員，能以高親和力結(jié)合含有 apoE的脂蛋白，是機體細胞攝取血液中富含甘油三脂的 VLDL 的主要受體，并與低密度脂蛋白受體在結(jié)構(gòu)上極其相似。這兩種受體均含有 5個功能域：(1)具有含半胱氨酸的數(shù)個重復(fù)序列；(2)EFG 同源域；(3)絲氨酸和蘇氨酸富集區(qū)，此區(qū)域是受體細胞外緊接胞膜的部分，被認為是以 O－O 碳水化合物簇的部位；(4)跨膜部分；(5)胞內(nèi)域，含有一個包被陷窩的靶信號[26]。1992年，Lijima 等[27]成功地克隆了兔 VLDL 受體的 cDNA，闡明了其氨基酸序列及功能域，并基于對家兔內(nèi)各組織 VLDL 受體結(jié)構(gòu)及功能的研究成果，將 VLDL 受體分為兩型：Ⅰ 型為含有O-Link 糖鏈結(jié)合域，主要分布于骨骼肌、心肌、脂肪等組織中；Ⅱ 型則不含有糖鏈結(jié)合域，主要分布于脂肪、脾臟、腎臟等非肌組織中。Ⅰ 型受體比 Ⅱ 型受體難降解，結(jié)合 VLDL 的能力也更強。因此，推測 Ⅰ 型 VLDL 受體在攝取甘油三酯中發(fā)揮了更大作用。

現(xiàn)階段存在的問題是：國內(nèi)外研究并未充分闡明 VLDL 受體的生物學(xué)功能。多數(shù)研究注重于VLDL 受體與能量代謝、脂類代謝的關(guān)系，即便如此，VLDL 受體在能量代謝中的分子作用也未明確定義。關(guān)于 VLDL 受體的其他生物學(xué)功能研究很有限，而這些有限的研究卻表明 VLDL 受體不只是參與脂質(zhì)代謝那么簡單，它在細胞增殖、細胞凋亡、血管新生，甚至炎癥反應(yīng)[28-31]中發(fā)揮了調(diào)控作用。同時，關(guān)于 VLDL 受體發(fā)揮生物學(xué)功能的分子機理也有待明確。有研究表明，它對AKT 信號通路具有抑制作用[30]。VLDL 受體在心血管疾病中的作用更是少有研究，而且多局限在內(nèi)皮細胞和血管平滑肌細胞[29,30]。但這些不多的研究卻提示 VLDL 受體與心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[31]。關(guān)于 VLDL 受體在心肌病理損傷中的作用，目前僅檢索到 1篇發(fā)表在 Journal of Clinical Investigation 期刊上的成果。該文對VLDL 受體在心肌凋亡中的作用進行研究，但關(guān)于心肌損傷的其他表型及其中的分子機理，文中并未深入探討[32]。本文結(jié)合生物信息學(xué)和生物醫(yī)學(xué)實驗的方法和技術(shù)，通過開展實驗驗證，旨在研究并闡明 VLDL 受體對小鼠缺血性心肌損傷的影響及其中的分子機制。

2 實驗方案

2.1 實驗動物分組與模型的建立

實驗動物包括：野生型(Wild Type，WT)小鼠、極低密度脂蛋白受體基因敲除(VLDLR-KO)小鼠及心臟特異性轉(zhuǎn)基因(VLDLR-TG)小鼠。選擇體重在 24～26g、8周齡的雄性小鼠為實驗對象，建立缺血性心肌損傷小鼠模型，進行觀察和研究。

具體實驗分為假手術(shù)(Sham)組和缺血(Ischemia)手術(shù)組兩組。其中，兩個實驗組均包括 WT 小鼠、VLDLR-KO 小鼠及 VLDLR-TG 小鼠各 50只。

對于缺血(Ischemia)手術(shù)組，首先，小鼠戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，左側(cè)胸部備皮，消毒手術(shù)區(qū)域，插管連接小動物呼吸機，沿第 3～4肋間水平切開皮膚，依次分離肌肉及軟組織，暴露心臟，于肺動脈圓錐與左心耳之間距主動脈根部 1mm 處結(jié)扎前降支 30min，觀察縫線下方區(qū)域變白，局部心肌運動減弱。然后，逐層縫合胸壁，待恢復(fù)自主呼吸后拔出通氣導(dǎo)管。最后，待動物清醒后送回飼養(yǎng)室，自由進食和飲水。而假手術(shù)(Sham)組只在前降支處穿過一條短絲線，不作結(jié)扎，其他步驟同缺血(Ischemia)手術(shù)組(即模型組)。

無菌操作取出 1～3天乳鼠心臟，D-Hanks液沖洗，剪碎心室，用 0.06% II 型膠原酶和 25%胰酶分次消化，離心收集細胞后用含 15% 胎牛血清的 DMEM/F12培養(yǎng)液懸浮分散細胞，接種于 100mm 培養(yǎng)皿中，37℃、5% CO2差時貼壁 1.5h。上清接種到明膠包被的 6孔板中，以α-actinin 染色鑒定心肌細胞純度。

取原代培養(yǎng)至第 4天的細胞，用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌細胞 2～3次，然后換成無血清的培養(yǎng)基，并放至 37℃、5% CO2、95% N2密閉的缺氧裝置中培養(yǎng) 16h，以此體外模擬細胞缺血缺氧狀態(tài)。

2.2 缺血缺氧引起心肌損傷反應(yīng)指標的檢測

基于已經(jīng)建成的缺血性心肌損傷小鼠模型和體外細胞缺血缺氧模型，對分組的動物進行相關(guān)指標的檢測，主要包括炎癥反應(yīng)、細胞壞死、凋亡和自噬的檢測。相比于傳統(tǒng)的檢測指標，我們重點關(guān)注缺血缺氧引起的心肌細胞的死亡途徑，包括細胞凋亡、細胞壞死和自噬。具體檢測流程如下：

采用氧化應(yīng)激指標檢測試劑盒進行相應(yīng)檢測。具體地，用 Fe3＋還原法測定血漿 T-AOC，采用 Fenton 反應(yīng)及 Gress 顯色原理測定細胞內(nèi)活性氧(ROS)，黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(SOD)，硫代巴比妥酸法(TBA)測定丙二醛(MDA)含量，硝酸還原酶法測定一氧化氮(NO)。

應(yīng)用實時聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR)與蛋白質(zhì)印跡(Western blot)檢測組織及細胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標志分子 GRP78、Chop、Atf6、Bip、XBP-1的表達水平；同時應(yīng)用 Western blot 檢測組織及細胞中 PERK 及 c-jun 的磷酸化水平。

2.2.1 炎癥反應(yīng)的檢測

(1)心肌組織炎癥反應(yīng)的檢測

①炎性細胞的浸潤：檢測缺血區(qū)巨噬細胞、中性粒細胞及 T 細胞的數(shù)量。各組心肌組織的冰凍切片用 Mac3、CD45、CD4、CD8及 7/4抗體進行免疫組化染色，計數(shù)每組染色陽性細胞數(shù)。

②炎癥因子檢測：目前，心肌細胞代表性炎癥因子有 IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、MCP-1。通過提取組織總 RNA 和蛋白質(zhì)，應(yīng)用 Realtime PCR 與 Western blot 可測定這些炎癥因子的表達。

(2)心肌細胞炎癥反應(yīng)檢測

采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)和 Real-time PCR 檢測培養(yǎng)上清及心肌細胞炎癥因子 IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、MCP-1的表達。

2.2.2 細胞壞死、凋亡和自噬的檢測

采用 Roche 公司的 In situ Cell Death Detection(POD)試劑盒檢測各組凋亡細胞，同時采用 Western bolt 檢測凋亡相關(guān)分子 Bcl2、Bax、Bad、Bcl-xl、cIAP、FLIP 及 caspase8/cleaved caspase8、caspase9/cleaved caspase9、caspase3/cleaved caspase3等蛋白表達水平；采用PI(Propidium Iodide)染色檢測細胞的壞死；電鏡下觀察細胞內(nèi)的自噬體，同時用 Western bolt 檢測 LC3Ⅱ、LC3Ⅰ 的表達水平。

3 結(jié)果與分析

3.1 VLDL 受體對缺血性心肌損傷的影響途徑研究

本文通過在體實驗結(jié)合離體實驗研究 VLDL受體對缺血性心肌損傷的影響。

在體實驗中，通過采用 C57品系的野生型小鼠、VLDLR 基因敲除小鼠及心臟特異性 VLDLR轉(zhuǎn)基因小鼠(均以 C57為背景建立)，建立左冠狀動脈結(jié)扎誘導(dǎo)的小鼠心肌缺血動物模型，研究假手術(shù)組(Sham)與手術(shù)組(Ischemia)之間，以及野生型組與基因敲除組及轉(zhuǎn)基因組之間在心肌損傷方面的差異。

離體實驗中，分離以上 3種乳鼠的心肌細胞，通過正常培養(yǎng)或缺血缺氧培養(yǎng)，以比較正常培養(yǎng)組與缺血缺氧培養(yǎng)組之間，以及野生型組與基因敲除組及轉(zhuǎn)基因組的心肌細胞之間在心肌損傷方面的差異。

具體指標有：

(1)氧化應(yīng)激：測定血漿總抗氧化能力(T-AOC)，測定組織及細胞內(nèi)活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量。

(2)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激：檢測組織及細胞中 PERK、Bip、XBP-1、Chop、Atf6及 c-jun 等的表達水平。

(3)炎癥：檢測心肌組織中炎癥細胞的浸潤，包括巨噬細胞、中性粒細胞及 T 細胞的浸潤；檢測組織及細胞中 IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α、MCP-1的表達。

(4)細胞壞死：測定血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)的水平；檢測心肌組織的壞死面積及細胞實驗中細胞壞死的程度。

(5)細胞凋亡：檢測在體及離體實驗中凋亡細胞的數(shù)量；檢測組織及細胞中凋亡相關(guān)分子 Bcl2、Bax、Bad、Bcl-xl、cIAP、FLIP及 caspase8/cleaved caspase8、caspase9/cleaved caspase9、caspase3/cleaved caspase3等的表達。

(6)細胞自噬：檢測自噬體的形成及自噬相關(guān)分子 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 的比值。

具體研究內(nèi)容如下：

(1) 缺血缺氧誘導(dǎo)心肌細胞 VLDL 受體的表達

乳鼠心肌細胞缺血缺氧培養(yǎng) 16h 后，采用Western blot 檢測 VLDL 受體蛋白水平，結(jié)果如圖1所示。圖1結(jié)果表明，缺血缺氧能誘導(dǎo)心肌細胞 VLDL 受體的表達。

圖1 缺血缺氧引起心肌細胞 VLDL 受體(VLDLR)表達增強Fig.1Increased expression of VLDL receptor(VLDLR) in myocardial cells induced by ischemia and hypoxia

(2) VLDL 受體缺失保護缺血缺氧引起的心肌壞死和凋亡

在小鼠接受心肌 Ischemia 手術(shù)組中，術(shù)后3天分別采用蘇木精-伊紅(Hematoxylin-Eosin，HE)染色法檢測組織壞死程度、 TUNEL 染色檢測細胞凋亡水平，結(jié)果如圖2所示。圖2結(jié)果表明，VLDL 受體缺失保護缺血缺氧引起的心肌壞死和凋亡。

圖2 VLDL 受體缺失保護缺血缺氧引起的心肌壞死和凋亡Fig.2VLDL receptor deletion protects against myocardial necrosis and apoptosis induced by ischemia and hypoxia

(3) VLDL 受體缺失抑制缺血缺氧引起的心肌組織 IL-1β 和 TNF-α 的表達

在小鼠接受心肌 Ischemia 手術(shù)組中，術(shù)后 3天采用免疫組化染色檢測 CD3和 CD45陽性細胞的組織侵潤；乳鼠心肌細胞缺血缺氧培養(yǎng) 16h 后用 ELISA 檢測培養(yǎng)上清液中 IL-1β 和 TNF-α 的水平，結(jié)果如圖3所示。結(jié)果表明，VLDL 受體缺失抑制缺血缺氧引起的心肌組織 IL-1β 和 TNF-α的表達。

圖3 VLDL 受體缺失抑制缺血缺氧引起的心肌組織炎癥反應(yīng)Fig.3VLDL receptor deletion inhibits infl ammation of myocardial tissue induced by ischemia and hypoxia

(4) VLDL 受體缺失抑制缺血缺氧引起的p-AKT 水平下調(diào)

乳鼠心肌細胞缺血缺氧培養(yǎng) 16h 后用Western blot 檢測 p-AKT 蛋白水平，結(jié)果如圖4所示。結(jié)果表明，VLDL 受體缺失抑制缺血缺氧引起 p-AKT 水平下調(diào)。

圖4 VLDL 受體缺失緩解缺血缺氧引起的 p-AKT 水平下調(diào)Fig.4VLDL receptor deletion reduces p-AKT levels induced by ischemia and hypoxia

通過以上在體實驗結(jié)合離體實驗的檢測發(fā)現(xiàn)：缺血缺氧可以誘導(dǎo)心肌細胞 VLDL 受體的表達；而 VLDL 受體缺失不但可以保護缺血缺氧引起的心肌壞死和凋亡，還可以抑制缺血缺氧引起的心肌組織 IL-1β 和 TNF-α 的表達，及可以抑制缺血缺氧引起的 p-AKT 水平下調(diào)。

3.2 VLDL 受體影響缺血性心肌損傷的分子機制的討論

為了使本研究具有系統(tǒng)性和全面性，我們首先開展高通量芯片實驗，然后進行生物信息學(xué)分析，最后對實驗結(jié)果開展生物醫(yī)學(xué)實驗驗證。即生物學(xué)實驗結(jié)合生物信息學(xué)分析的研究思路，通過構(gòu)建生物分子網(wǎng)絡(luò)探討 VLDL 受體影響缺血性心肌損傷的分子機制，包括關(guān)鍵分子與關(guān)鍵信號通路兩個方面。具體如下：

我們對芯片原始數(shù)據(jù)進行標準化處理，消除背景噪音，去除同一實驗的不同芯片之間的實驗誤差。具體地，采用 RMA 算法進行背景校正，采用 Quantile 算法進行數(shù)據(jù)標準化，采用 Pmonly 算法進行 PM(Perfect Match)探針校正，采用 Medianpolish 算法進行表達值的評估。數(shù)據(jù)標準化后采用 Limma 進行差異表達分析，以 P＜0.01為篩選條件，篩選差異表達基因。選取 FDR(False Discovery Rate)＜0.05的差異表達基因，以蛋白互作數(shù)據(jù)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控數(shù)據(jù)、翻譯后修飾數(shù)據(jù)、生物信號通路數(shù)據(jù)為背景信息，應(yīng)用Cytoscape 建立以 VLDL 受體為核心分子的生物分子網(wǎng)絡(luò)。

3.2.1 VLDL 受體發(fā)揮生物學(xué)功能的關(guān)鍵分子研究

生物信息學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵分子：本文采用高通量的基因芯片實驗，發(fā)現(xiàn) VLDL 受體影響哪些基因的表達，即獲得心肌損傷情況下 VLDL受體影響的差異表達基因數(shù)據(jù)集。采用 Broad Institute of MIT and Harvard 開發(fā)的 GSEA 算法進行分析。具體是以 GO(Gene Ontology)、TFT(Transcription Factor Targets)、KEGG、Biocarta 數(shù)據(jù)庫為信息背景，以 nominal P_value＜0.05為篩選條件，分別進行生物學(xué)過程(Biological Process)、轉(zhuǎn)錄因子、信號通路的功能富集分析。

本文發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵分子的過程包括：(1)對差異表達基因以 GO 數(shù)據(jù)庫和 TFT 數(shù)據(jù)庫為分析背景，進行功能富集分析，發(fā)現(xiàn)屬于各生物學(xué)過程的重要分子及表達調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子；(2)以蛋白互作數(shù)據(jù)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控數(shù)據(jù)、翻譯后修飾數(shù)據(jù)為信息建立分子網(wǎng)絡(luò)，基于圖論原理(Graphic Theory)發(fā)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)的拓撲關(guān)系及關(guān)鍵節(jié)點分子。分析生物網(wǎng)絡(luò)的拓撲學(xué)參數(shù)，包括度(Degree)、聚類系數(shù)(Clustering Coefficient)、介數(shù)(Betweenness)、緊密度(Closeness)、同配性系數(shù)(Assortativity Coefficient)綜合評價分子節(jié)點在網(wǎng)絡(luò)中的作用權(quán)重，發(fā)現(xiàn) VLDL 受體為網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮生物學(xué)功能的關(guān)鍵分子。

另外，本文還通過生物醫(yī)學(xué)實驗進一步驗證了關(guān)鍵分子：檢測缺血缺氧狀態(tài)下，上述發(fā)現(xiàn)的關(guān)鍵分子分別在培養(yǎng)的 C57、VLDLR-KO及 VLDLR-TG 乳鼠心肌細胞中的表達水平，確定 VLDL 受體對上述發(fā)現(xiàn)的關(guān)鍵分子是否具有影響；同時，對關(guān)鍵分子也進行基因敲除(如siRNA 轉(zhuǎn)染)或基因過表達(如腺病毒轉(zhuǎn)染)實驗，檢測關(guān)鍵分子是否影響缺血性心肌損傷的各種病理表型(前部分提到的氧化應(yīng)激、炎癥、凋亡、自噬等)；最后，綜合結(jié)果確定 VLDL 受體→分子→心肌損傷病理表型的因果關(guān)聯(lián)性。

3.2.2 VLDL 受體發(fā)揮生物學(xué)功能的關(guān)鍵信號通路研究

(1)基于芯片結(jié)果發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵信號通路

基于生物信息學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)關(guān)鍵信號通路：以KEGG 和 Biocarta 數(shù)據(jù)庫為分析背景，對心肌損傷情況下 VLDL 受體影響的差異表達基因數(shù)據(jù)集進行功能富集分析，計算顯著被抑制及顯著被激活的信號通路。同時，檢測缺血缺氧狀態(tài)下，VLDL 受體是否對上述關(guān)鍵信號通路及其中的分子存在影響；另外對關(guān)鍵信號通路或其中的分子進行抑制或激活，檢測關(guān)鍵信號通路是否影響缺血性心肌損傷的病理表型；最后，綜合結(jié)果分析VLDL 受體→信號通路→心肌損傷病理表型的因果關(guān)聯(lián)性。

(2)研究 VLDL 受體對常見的信號通路的影響

功能模塊是生物網(wǎng)絡(luò)中連接緊密的子網(wǎng)絡(luò)，其緊密度可以用模塊度(Modularity，Q)來衡量，它是該子網(wǎng)絡(luò)中已有的連接數(shù)與子網(wǎng)絡(luò)中可能的最大連接數(shù)的比值。計算公式為：

其中，m 為子網(wǎng)絡(luò)中已有的連接數(shù)；n 為子網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點的個數(shù)。本文取 Q 值大于 0.6進行功能模塊分析。

傳統(tǒng)以單個和少數(shù)幾個基因或蛋白的研究方法有很大的局限性。本文采用生物網(wǎng)絡(luò)的功能模塊計算分析，從整體水平上進行研究，發(fā)現(xiàn)了 MAPKs(ERK、p38、JNK)、AKT、NF-κB 信號通路在缺血性心肌損傷的發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用，VLDL 受體抑制 AKT 信號通路，然而關(guān)于它對 AKT 及其他信號通路在心肌組織中的影響未見研究。本文檢測了缺血缺氧狀態(tài)下，VLDL 受體是否影響這些信號通路；同時，對MAPKs、AKT、NF-κB 信號通路進行抑制或激活，檢測它們是否影響缺血性心肌損傷的病理表型；最后，綜合各種結(jié)果分析并明確了 VLDL 受體→MAPKs、AKT、NF-κB 信號通路→心肌損傷病理表型的因果關(guān)聯(lián)性。

4 結(jié) 論

本文應(yīng)用 C57BL/6品系的野生型小鼠、VLDL 受體基因敲除小鼠和心臟特異性轉(zhuǎn)基因小鼠，通過在體與離體實驗系統(tǒng)研究了 VLDL 受體對小鼠缺血性心肌損傷的影響。另外，檢測了缺血缺氧狀態(tài)下，VLDL 受體對這些信號通路的影響；同時，對 MAPKs、AKT、NF-κB 信號通路進行抑制或激活，觀察它們對缺血性心肌損傷的病理表型的影響；最后，綜合實驗結(jié)果分析并明確了 VLDL 受體→MAPKs、AKT、NF-κB 信號通路→心肌損傷病理表型的因果關(guān)聯(lián)性，闡明了VLDL 受體影響缺血性心肌損傷的分子機制。

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