蘭仕梅 ，楊溢歡 ，杜 港 ，何思佳 ，沙 莎 ,2，孫裕光 ,2

（1.西南大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，重慶402460;2.重慶市獸醫(yī)科學(xué)工程研究中心，重慶402460）

金銀花和連翹是臨床常用中藥，都具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效，金銀花重在疏風(fēng)散熱，連翹解毒消癰優(yōu)于金銀花，素有“瘡家圣藥”之[1,2]稱。二者常用于溫?zé)岵?，金銀花入血分，涼血止痢，治療熱毒血??；連翹入心經(jīng)，清心開竅，治療溫病熱陷心包之高熱神昏，尚可散結(jié)、利尿，治療瘰疬、痰核以及熱淋尿少[3]等。臨床上這兩味中藥經(jīng)常配伍相須為用，以增強其清熱解毒，發(fā)散風(fēng)熱的功效，代表方劑有銀翹散、銀翹白虎湯方劑等。

金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus，SA)是獸醫(yī)臨床上常見的條件致病菌，也是重要的人畜共患致病菌[4]，為革蘭氏陽性菌，常引起動物創(chuàng)傷感染、膿腫、敗血癥等化膿性疾病，是奶牛乳腺炎最主要的病原之一[5]，同時還能污染食物及飼料引起人畜中毒性嘔吐、腸炎等毒素性疾病[6]，是細菌引起的食源性疾病中最突出的病原[7,8]；隨著金黃色葡萄球菌對抗生素的耐藥情況越發(fā)嚴(yán)峻，臨床治療效果明顯下降[9]，給養(yǎng)殖業(yè)帶來慘重的經(jīng)濟打擊。畜禽感染金黃色葡萄球菌屬于中獸醫(yī)所指的溫病，從傳統(tǒng)中藥中篩選出有效藥物預(yù)防和治療由金黃色葡萄球菌引起的疾病，具有十分重要的意義，關(guān)于金銀花、連翹的抗菌作用已有報道[10-12]。但僅兩者配伍后的抗菌報道較少，本研究依據(jù)前人相關(guān)中藥抗菌試驗的基礎(chǔ)上，利用金銀花和連翹配伍構(gòu)成的“銀翹湯”對金黃色葡萄球菌進行抗菌作用的研究?，F(xiàn)將試驗報告如下，為獸醫(yī)臨床用藥提供理論指導(dǎo)和實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材 金銀花、連翹購于重慶市榮昌區(qū)石家藥房。

1.1.2 菌株來源 金黃色葡萄球菌分離自患病雛鴨，保存于-20℃。

1.1.3 主要儀器 超凈工作臺、立式壓力蒸汽滅菌鍋、生化培養(yǎng)箱、牛津杯等。

1.1.4 主要試劑 普通瓊脂培養(yǎng)基、普通肉湯培養(yǎng)基等購于杭州濱河微生物試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 中藥的提取與藥液制備

稱取金銀花和連翹各50g等量混合置于1000ml燒杯中，加10倍量蒸餾水，浸泡30min后，煎煮1.5h，四層紗布過濾，再加8倍量蒸餾水煎煮1.5h后過濾。將兩次所得濾液合并，80℃水浴濃縮到相當(dāng)于每1g生藥1ml，用同樣的方法分別 制 備 濃 度 為 0.5g/ml、0.25g/ml、0.125g/ml 的 藥液，115℃減壓滅菌20min，4℃保存?zhèn)溆?。連翹50g按 前 法 提 取 為 1g/ml、0.5g/ml、0.25g/ml、0.125g/ml的藥液。

1.2.2 牛津杯法藥敏試驗

將金黃色葡萄球菌接種到普通肉湯培養(yǎng)基中，37℃振搖培養(yǎng)12 h，菌液經(jīng)麥?zhǔn)媳葷崾咕簼舛葹?×10 8cfu/mL(0.5個麥?zhǔn)蠞舛?，用滅菌的棉拭子取菌液均勻涂布在普通瓊脂平板上，再將滅菌的牛津杯在酒精燈火焰上稍微烘烤后輕放在平板上，每個牛津杯分別加入230ul的藥液，每個濃度的藥液都要做相同的操作，37℃培養(yǎng)18-24h。分別觀察并測定金銀花、連翹及“銀翹湯”對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑的大小。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)分析

運用生物統(tǒng)計學(xué)方法[13]對試驗數(shù)據(jù)進行方差分析和多重比較。

2 結(jié)果

2.1 牛津杯法抗菌試驗

牛津杯法測定金銀花、連翹及“銀翹湯”對金黃色葡萄球菌的抗菌效果見表1和圖1-12。

圖1

圖2

圖3

圖4

圖5

圖6

圖7

圖8

圖9

圖10

圖11

圖12

2.2 方差分析與多重比較

試驗數(shù)據(jù)進行方差分析和多重比較的結(jié)果見表2和表3。

表2 藥物抑菌試驗結(jié)果方差分析表

表3 不同濃度的金銀花、連翹和“銀翹湯”抑菌試驗結(jié)果多重比較（T法）

根據(jù)表2的運算得出統(tǒng)計結(jié)論。PA＜0.01，差異極顯著。說明同一藥物的不同濃度對抑菌圈直徑的影響極顯著。PB＜0.01，差異極顯著，說明同一濃度的不同藥物對抑菌圈直徑的影響極顯著。PA*B＜0.01，差異極顯著，即不同藥物不同濃度對抗菌直徑的影響極顯著。由表3可以得出統(tǒng)計結(jié)論：12個濃度的藥物中，0.25g/ml的金銀花抗菌效果最好，其次是1g/ml連翹，等量配比 “銀翹湯”的抗菌效果總體上次于單味藥的效果，抗菌效果最佳濃度為0.5g/ml，其次為0.125g/ml濃度。

3 討論

牛津杯抗菌試驗結(jié)果表明，連翹、金銀花及“銀翹湯”對金黃色葡萄球菌具有良好的抗菌效果，統(tǒng)計學(xué)分析表明，不同濃度的不同藥物對抑菌圈直徑的影響極顯著；0.25g/ml的金銀花抗菌效果最好，其次是1g/ml連翹，等量配比“銀翹湯”的抗菌效果總體次于單味藥的效果，抗菌效果最佳濃度為0.5g/ml，其次為0.125g/ml濃度。連翹對金黃色葡萄球菌的抗菌效果隨濃度的遞減而減?。坏蜐舛龋?.25g/ml、0.125g/ml）的金銀花比高濃度（1g/ml、0.5g/ml）的金銀花以及各濃度的連翹都具有更好的抗菌效果，這可能是由于金銀花本身對金黃色葡萄球菌的抗菌作用比連翹更強，但在高濃度時因呈流浸膏狀，主要抗菌成分無法從牛津杯中向瓊脂表面擴散，使得無法觀察到抑菌圈，在低濃度時擴散能力強，且速率快，呈現(xiàn)良好的抗菌效果，在之后的試驗中應(yīng)采取其他方法來補充試驗，以更精確的測定藥物的抗菌效果。

金銀花、連翹都具有清熱解毒，疏散風(fēng)熱的作用功效，在臨床上，二者相須為用，金銀花清宣疏散，連翹消散癰腫；瘡癰是皮膚及皮下組織的化膿性炎癥，病原體多是葡萄球菌，瘡癰與心經(jīng)的熱毒關(guān)系比較密切，而連翹有消癰散結(jié)之功效，長于解心經(jīng)的熱毒。動物感染金黃色葡萄球菌形成了瘡癰，屬于溫?zé)岵》懂?，疾病初起，屬于衛(wèi)分證，發(fā)熱，體溫升高，繼而出現(xiàn)肺胃津傷的氣分證，導(dǎo)致肺失宣降，出現(xiàn)咳嗽，嘔吐，疼痛等癥狀，此時應(yīng)解表發(fā)散風(fēng)熱，用藥金銀花，而將連翹配伍金銀花可達到相須為用的目的，增強治療效果。本試驗中“銀翹湯”對金黃色葡萄球菌表現(xiàn)了良好的抗菌效果，但體外抗菌總體效果次于單味藥物的效果，可能是在體外抗菌試驗中兩者有相互干擾的成分，削減了各自抗菌能力，“銀翹湯”具體的抗菌效果可在今后的體內(nèi)抗菌試驗中展開討論。

4 結(jié)論

本研究表明，金銀花、連翹及“銀翹湯”對金黃色葡萄球菌的抗菌效果均較好，其中0.25g/ml的金銀花抗菌效果最好，其次是1g/ml連翹，等量配比“銀翹湯”的抗菌效果總體上次于單味藥的效果，最佳抗菌濃度為0.5g/ml。獸醫(yī)臨床上，當(dāng)畜禽發(fā)生金黃色葡萄球菌感染時，可以運用金銀花和連翹配伍構(gòu)成的“銀翹湯”進行預(yù)防和治療。

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