賴小麗

惠州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院 廣東惠州 516000

本研究對100件食品樣本采用2種檢測方法進(jìn)行檢測，分析LAMP檢測方法的應(yīng)用效果?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集本省入境檢驗(yàn)檢疫局于2018年6月-2018年12月收集的110件食品樣本作為研究對象，其中，生鮮肉樣品24件，熟肉制品17件，水產(chǎn)品18件，非發(fā)酵豆制品21件，冰激凌5件，冷凍生肉12件，生食類蔬菜5件，鮮榨果汁8件。參考菌株為腸炎沙門菌。

1.2 方法

食品檢驗(yàn)前增菌培養(yǎng)方法：《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)》（GB4789.4-2016）標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)進(jìn)行檢驗(yàn)前增菌培養(yǎng)。各樣本分別取25g裝入無菌均值袋中，袋中裝225mL緩沖蛋白胨水，采用拍打式均質(zhì)器連續(xù)拍擊無菌袋1-2min，置于37℃恒溫箱中，持續(xù)培養(yǎng)12h。冷凍樣品則置于45℃環(huán)境下進(jìn)行解凍，持續(xù)解凍15min。

LAMP檢測方法：各取1mL食品前增菌，離心機(jī)處理2min，轉(zhuǎn)速10000r/min，核算提取上清液，再取1μL上清液作為DNA待檢測模板。依據(jù)文獻(xiàn)[2]設(shè)計(jì)引物，采用煮沸法提取并檢測各樣品DNA，LAMP反應(yīng)體系25μL為：2.5μL（10倍濃度 LAMP緩沖液）+5.0μL（20mmol/L質(zhì)量濃度的 MgSO4）+2.5μL（10mmol/L質(zhì)量濃度的dNTP）+2.5μL（5mmol/L質(zhì)量濃度的甜菜堿）+3μL（LAMP內(nèi)外引物8:1混合物）+1μL（8U/μLBst聚合酶）+7.5μL（超純水），將所有混合物混勻后，再將20μL密封液加入混合液中，最后在EP反應(yīng)管蓋中間用1μL顯色液點(diǎn)中，蓋緊管蓋。反應(yīng)管置于63℃水浴鍋中進(jìn)行反應(yīng)60min，再取出反應(yīng)管，將混合液反復(fù)顛倒反應(yīng)混勻后，觀察混合液顏色。判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽性：反應(yīng)管顯示為綠色，表明有核酸擴(kuò)增；陰性：反應(yīng)管顯示為橙色，表明無核酸擴(kuò)增。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS20.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析、處理，計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)表示，χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測各樣品沙門菌陽性結(jié)果比較

110份食品樣品中，LAMP檢出陽性樣品18份，陽性率為16.36%；分離培養(yǎng)法檢出陽性樣品10份，陽性率為9.09%，低于LAMP陽性檢出率（P＞0.05），見表1。

表1 兩種方法檢測各樣品沙門菌陽性結(jié)果比較[n（%）]

2.2 LAMP檢測法沙門菌檢測效果

以分離培養(yǎng)法結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，LAMP檢測敏感度為90.00%（9/10），特異度為 91.00%（91/100），準(zhǔn)確度為 90.91%（100/110）。

3 討論

本研究顯示，LAMP對110件食品樣品陽性檢出率達(dá)16.36%，略高于分離培養(yǎng)法的9.09%，檢測敏感度為90.00%（9/10），特異度為 91.00%（91/100），準(zhǔn)確度為 90.91%（100/110），具有良好的檢測效能。目前，LMAP檢測法已能夠?qū)ι抽T菌stn、phoP、invA、fimY等基因進(jìn)行檢測，均有較好的檢測敏感度與特異度，檢測速度可縮短至3h，最低檢測濃度可達(dá)到5.6×102CFU/mL，反應(yīng)時間快，無需特殊儀器就能完成檢測[4]。

綜上分析，在食品衛(wèi)生檢驗(yàn)中采用LAMP檢測法檢測沙門氏菌，檢測過程更為快捷、方便，且陽性檢出率高，檢測準(zhǔn)確度較好，是食品樣品沙門菌現(xiàn)場檢測的一種有效方法。