郭 超，張祥生

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一，每年以數(shù)以萬計的速度在增加［1-3］。膀胱癌患者中，發(fā)病率最高的地區(qū)為歐洲、北美，最低的地區(qū)為中非，且男性明顯多于女性［4］。 羧基張力蛋白素（CTEN）是張力蛋白（TENSIN）家族成員之一［5］。 近年來的研究發(fā)現(xiàn)，CTEN與多種腫瘤的侵襲性和預后有明顯的相關(guān)性，在腫瘤進展中起到關(guān)鍵作用，是一個重要的預后因素［6，7］。

該文采用免疫組織化學SP法分別對82例膀胱尿路上皮癌 （bluddar urothelial carcinoma，BUC）組織和膀胱正常組織中CTEN的表達程度進行檢測，研究CTEN的表達與BUC的病理分級、臨床分期的聯(lián)系，為進一步探討CTEN在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及臨床意義提供依據(jù)。

1 資料與方法

1．1 一般資料 收集2015年—2016年解放軍150中心醫(yī)院泌尿外科手術(shù)切除膀胱癌組織82例，所有標本均由筆者所在醫(yī)院病理科醫(yī)師復核分級并有完整的臨床資料，其中男49例，女33例；年齡32～84歲，平均54．5歲。膀胱癌組織病理分級（按WHO 2004標準）：低級別乳頭狀尿路上皮癌55例；高級別乳頭狀尿路上皮癌27例。臨床分期根據(jù)UICC 的 TNM 法進行分類：Ta～T1期 50 例，T2～T4期32例。全部病例術(shù)前均未行放、化療。72例行經(jīng)膀胱尿路腫瘤電切術(shù)，10例行膀胱部分切除術(shù)。對照組15例均為正常膀胱組織。

1．2 主要試劑 兔抗人CTEN單克隆抗體購自美國Abcam公司，DAB顯色試劑盒購自上海生物技術(shù)有限公司，檸檬酸鹽緩沖液 （0．01 mol/L，PH為6．0）購自中杉金橋公司。

1．3 實驗方法

1．3．1 實驗步驟 免疫組化采用SP法。所有組織均經(jīng)多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片5 μm，脫蠟和水化后，PBS洗滌，檸檬酸鹽抗原修復液中進行抗原修復，3%過氧化氫溶液處理，PBS洗滌，正常羊血清封閉（室溫 20～30 min）；PBS 沖洗，滴加1/400稀釋的一抗（兔抗人CTEN單克隆抗體），4℃過夜；PBS沖洗，滴加二抗 （生物素標記的羊抗兔lgG），室溫孵育 20 min；PBS 沖洗，DAB 顯色，蘇木素復染，1%鹽酸乙醇浸洗2 s，流水沖洗2 min，脫水，封片。顯微鏡下觀察。

1.3.2 判斷標準 陽性染色為細胞核或細胞質(zhì)存在不均質(zhì)棕色顆粒。使用半定量積分法分析實驗結(jié)果，隨機觀察切片中的5個高倍視野（400倍），每個視野下計算著色細胞總數(shù)并觀察染色質(zhì)的染色深度。以染色強度和陽性細胞數(shù)這兩方面進行評估。染色強度：不著色或顯示不清者記為0分、淺黃色記為1分、棕黃色記為2分、深褐色記為3分。陽性細胞數(shù)：無陽性細胞為0分，＜25%記1分，25%～50%記 2分，＞50%記 3分。兩者相乘 0分為（-），1～3分為（+），4～5 分為（++），≥6 分為（+++）。弱陽性為（+），中度陽性為（++），強陽性為（+++）。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 19．0統(tǒng)計軟件處理，兩組間計數(shù)資料分析采用χ2檢驗。檢驗水準α=0．05。

2 結(jié)果

CTEN在正常膀胱組織、膀胱癌組織中均有表達，其中，正常膀胱組織中大部分為陰性表達，少部分為陽性表達，陽性表達率為 26．27%（4/15），主要位于細胞質(zhì)中。而在BUC組中，CTEN陽性表達率為 63．41%（52/82）。其中，低級別膀胱癌陽性表達率為 54．54%（30/55），高級別膀胱癌陽性表達率為81．48%（22/27），主要位于細胞質(zhì)中（圖 1）。

圖1 免疫組化檢測CTEN在正常膀胱組織中及膀胱尿路上皮癌不同病理分級中的表達情況（×400）

膀胱癌組織中CTEN的表達陽性率均較正常膀胱黏膜組織高（P＜0．05），見表 1。 并且隨著腫瘤臨床分期和病理分級的升高，CTEN的表達也升高，且免疫組化結(jié)果中染色強度變深，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）。CTEN的表達在不同性別和年齡間的差別無統(tǒng)計學意義（P＞0．05），見表 2。

表1 正常膀胱組織與BUC中CTEN表達的比較（例）

表2 BUC組織中CTEN的表達與臨床病理特征的關(guān)系（例）

3 討論

膀胱癌中超過90%是BUC，可分為非肌層浸潤性和肌層浸潤性。臨床病理研究表明，大多數(shù)非肌層浸潤性膀胱癌患者（70%～80%）普遍易復發(fā)但很少進展，而肌層浸潤性膀胱癌患者則侵襲性大，5年生存率約30%～60%［8-11］。膀胱癌的發(fā)生機制還未完全明確，因此迫切需要從根本上找出參與膀胱癌發(fā)生、發(fā)展及預后的基因或腫瘤標志物，制定準確有效的診斷和治療方法，對指導膀胱癌的臨床預后評估、治療方式的選擇有重大意義，從而進一步減少膀胱癌的發(fā)生和死亡率。

CTEN是張力蛋白（tensin）家族中繼tensin-1、tensin-2、tensin-3的第四個成員，由于其缺乏N-末端蛋白結(jié)合域，所以其較短。CTEN在人體中主要位于前列腺和胎盤組織，而在其他組織中表達低。有研究表明CTEN蛋白在很多惡性腫瘤，如：胸腺瘤、結(jié)腸癌、胃癌、肺癌等組織中都高表達［7，12-20］，被認為是一種致癌基因。另外有細胞學實驗研究表明，CTEN蛋白能夠增加細胞的運動和侵襲能力，這個是腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移的前提條件。

為明確CTEN在膀胱癌組織中是否存在表達異常且發(fā)揮抑癌基因作用，該研究采用免疫組織化學方法檢測CTEN在膀胱癌組織及正常膀胱組織中的表達。結(jié)果顯示在膀胱癌組織中CTEN的表達與正常膀胱組織相比明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義。目前也有研究結(jié)果表明，CTEN在腫瘤進展及預后方面起關(guān)鍵作用，其表達缺失一般提示腫瘤具有高侵襲性，預示患者預后不良、生存率下降。本研究結(jié)果顯示在病理分級及臨床分期更高的膀胱癌組織中CTEN的表達同樣增高，差異有統(tǒng)計學意義。由此可推測可能對膀胱癌的診斷和治療提供輔助參考價值，可能成為預測腫瘤預后的分子標志物和潛在治療靶點。

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