初洪波，劉艷華，成光宇

（長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長春 130021）

“清肝降濁顆?！笔怯砷L春中醫(yī)藥大學(xué)與吉林修正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司合作，以產(chǎn)學(xué)研的方式，研制開發(fā)的用于各類型脂肪肝治療的中藥復(fù)方新藥。清肝降濁顆粒的處方來源于臨床經(jīng)驗(yàn)方，由黃芪、五味子、刺五加、決明子、陳皮、竹茹等中藥組成，具有益氣活血，化瘀通絡(luò)的功能，主要用于各年齡段脂肪肝（氣虛血瘀型）的治療[1-8]。本研究采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選清肝降濁顆粒的提取工藝。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品與試劑 黃芪、五味子、刺五加、決明子、陳皮、竹茹藥材購于吉林省北藥集團(tuán)。五味子醇甲對照品（購于中國食品藥品檢定研究院，批號110857-201201）。試劑甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

1.2 儀器 高效液相色譜儀（日本島津LC-2010A），紫外檢測器，Lab solution色譜數(shù)據(jù)工作站，CP225D型電子分析天平（德國塞多利斯天平有限公司），DZF型真空干燥箱（上海博迅）。

2 處方及制備工藝

2.1 提取工藝路線的設(shè)計(jì)[9-11]本處方是在臨床基礎(chǔ)上總結(jié)出來的經(jīng)驗(yàn)方，由黃芪、五味子、刺五加、決明子、陳皮、竹茹等中藥組成的湯劑，有較好的療效，為了保證療效，仍采用水煎煮的方法進(jìn)行提取。

2.2 提取工藝條件的研究[12-14]對水提取來說，影響提取效果的因素主要有3個(gè)，即：加水倍數(shù)、煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間。使用正交表 L9（34）安排試驗(yàn)，每個(gè)因素選擇了3個(gè)水平，見表1。

表1 水煎煮的因素水平表

2.2.1 考察指標(biāo) 以出膏率和五味子醇甲含量為水提工藝研究的考察指標(biāo)。

2.2.2 樣品制備 按處方比例稱取黃芪15 g、五味子10 g、刺五加10 g、決明子10 g、陳皮10 g、竹茹10 g為1份，共取9份，按照因素水平表的條件進(jìn)行試驗(yàn)，濾過，合并提取液，減壓濃縮，減壓干燥，稱重。

2.2.3 正交試驗(yàn)樣品中紅景天苷含量測定 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅為填充劑；以甲醇為流動(dòng)相A ，水為流動(dòng)相B ，按表2的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為250 nm。

表2 梯度洗脫數(shù)據(jù)

2.2.3.1 對照品溶液制備 取五味子醇甲對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每l mL含0.3 mg的溶液，即得。

2.2.3.2 供試品溶液制備 取各組正交試驗(yàn)樣品粉末（過三號篩）約0.5 g，置25 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理（功率250 W，頻率20 kHz）30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3.3 測定方法 分別精密取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算，即得。結(jié)果見表3。

以出膏率和五味子醇甲含量的綜合評分為考察指標(biāo)進(jìn)行分析，結(jié)果見表4～5。

表3 正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)

表4 正交試驗(yàn) [L9（34 ）] 及結(jié)果

表5 水煎煮提取的方差分析

由方差結(jié)果可知，各因素對試驗(yàn)結(jié)果影響的重要性依次為C＞B＞A，即煎煮次數(shù)C是主要影響因素，煎煮時(shí)間B及加水量A是次要影響因素。結(jié)合直觀分析，煎煮法條件宜為A3B3C3，即：加8倍量水煎煮3次，每次2 h。由于方差分析得出A、B因素的任何水平對試驗(yàn)結(jié)果均無顯著性影響的結(jié)論，為降低生產(chǎn)成本，節(jié)約提取時(shí)間，綜合分析各因素對試驗(yàn)結(jié)果影響的重要程度，確定A3B2C3為最佳提取方案。即：加8倍量水煎煮3次，每次1.5 h。

2.3 制劑成型性研究[15-17]由于干浸膏有很強(qiáng)的吸濕性，直接制成顆粒在制備和貯存過程中都有一定的困難，需加入適量輔料以滿足制備工藝和制劑要求，一般按干浸膏:輔料＝1:0.5～2 的比例加入輔料。

2.3.1 輔料的選擇和用量 糊精、蔗糖是常用的輔料，根據(jù)干浸膏有很強(qiáng)吸濕性的特點(diǎn)，經(jīng)過試驗(yàn)摸索，確定干浸膏:輔料＝1:2 的比例加入適量糊精，用量是按處方在半成品（制顆粒前）時(shí)，加輔料至1000 g。

2.3.2 制顆粒所用濕潤劑的選擇 由于干浸膏、糊精、蔗糖混合后仍有一定的吸濕性，故以不同濃度的乙醇為濕潤劑，制軟材，再制濕顆粒，結(jié)果見表6。

表6 不同濕潤劑制濕顆粒結(jié)果

由以上結(jié)果，選80%乙醇為濕潤劑制顆粒。

2.3.3 濕顆粒干燥溫度的考察 對濕顆粒干燥，選用了不同溫度，干燥6 h，結(jié)果見表7。

表7 濕顆粒干燥溫度試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇濕顆粒干燥條件為：干燥溫度80 ℃，干燥時(shí)間6 h。

最后確定的清肝降濁顆粒提取工藝為：加8倍量水，煎煮3次，每次1.5 h，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.30～1.35（80 ℃）浸膏，減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，加入2倍量的糊精，混勻，以80%乙醇為濕潤劑，制成顆粒，干燥，整粒，即得。

3 小結(jié)

本試驗(yàn)主要采用正交試驗(yàn)對清肝降濁顆粒的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，確定了最佳工藝條件。通過對制劑成型性的考察，選擇了糊精做為輔料。實(shí)驗(yàn)所制得的清肝降濁顆粒呈棕黃色、顆粒成型好，既保證了清肝降濁處方中藥材有效成分的提出，又方便了患者的使用。

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