林 偉 王 珍 魏 群

扁平苔蘚(lichen planus, LP)是一種慢性炎癥性疾病，其病因及發(fā)病機(jī)制未明，近年來許多研究認(rèn)為細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在LP的發(fā)病中起重要作用。CD44分子對T淋巴細(xì)胞的活化、增殖有增強(qiáng)作用，并且發(fā)現(xiàn)在銀屑病、扁平苔蘚皮損中有表達(dá)。本實驗旨在探討LP皮損組織中黏附分子CD44的表達(dá)及其與浸潤淋巴細(xì)胞之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實驗組 在本院經(jīng)臨床及病理檢查確診的扁平苔蘚患者30例，并排除其他疾病，3個月內(nèi)未系統(tǒng)規(guī)律使用免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素及未長期應(yīng)用外用藥物治療，其中男18例，女12例，年齡18～65歲，平均發(fā)病年齡為(35±5.2)歲。對照組分為對照1組和對照2組：①對照1組為來自本院外科手術(shù)患者的健康皮膚組織10例。②對照2組為病理上以真皮層淋巴細(xì)胞浸潤為主的皮膚病(如：蕈樣肉芽腫，Sézary綜合征，紅斑狼瘡等)的病變皮膚組織10例。對照組患者要求未患其他疾病，且年齡、性別、取材部位與LP患者相匹配。

1.2 實驗用試劑 鼠抗人CD44單克隆抗體，免疫組化SP超敏試劑盒，AEC顯色劑，復(fù)合消化酶。以上試劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3 實驗方法 鏈霉菌抗生物素蛋白--過氧化物酶連結(jié)(SP)法：將石蠟切片脫蠟至水化；加3% H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物酶；用復(fù)合消化酶法進(jìn)行抗原修復(fù)；滴加正常羊血清封閉液；依次加入一抗(鼠抗人CD44單克隆抗體)、生物素標(biāo)記的第二抗體、鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液；采用AEC法染色，蘇木素復(fù)染，脫水透明、封片。以PBS緩沖液代替一抗作空白對照。用已知的陽性切片作為陽性對照。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，行χ2檢驗，P<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD44分子在正常皮膚組織及扁平苔蘚皮損的表皮中均可見表達(dá)。在二者表皮中的棘細(xì)胞和基底細(xì)胞表面有表達(dá)，并且在棘細(xì)胞表面的表達(dá)最強(qiáng)，而在顆粒層細(xì)胞及角質(zhì)層細(xì)胞均無表達(dá)，見圖1。兩組比較差異無顯著性(P>0.05)。見表1。

表1 表皮細(xì)胞中CD44分子的表達(dá)情況 例

2.2 正常人皮膚真皮組織中CD44分子的表達(dá)極少，在扁平苔蘚皮損真皮層上部，淋巴細(xì)胞呈帶狀浸潤，淋巴細(xì)胞中CD44分子的表達(dá)呈陽性或強(qiáng)陽性，見圖2。在淋巴細(xì)胞浸潤性皮膚病患者真皮層中，CD44分子在淋巴細(xì)胞中的表達(dá)呈陽性或弱陽性，見圖3。LP與淋巴細(xì)胞浸潤性皮膚病相比，真皮層浸潤淋巴細(xì)胞中CD44分子的表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.01)。見表2。

表2 真皮層淋巴細(xì)胞中CD44分子的表達(dá)情況 例

圖1 LP皮損表皮棘細(xì)胞和基底細(xì)胞及真皮層淋巴細(xì)胞表面，CD44分子呈強(qiáng)陽性表達(dá)(AEC，×100)圖2 LP皮損真皮層淋巴細(xì)胞中，CD44分子呈強(qiáng)陽性表達(dá)(AEC，×400)圖3 淋巴細(xì)胞浸潤性皮膚病真皮層淋巴細(xì)胞中，CD44分子呈弱陽性表達(dá)(AEC，×400)

3 討論

盡管LP確切的病因和發(fā)病機(jī)制還不清楚，許多研究表明T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)對LP的發(fā)病起著關(guān)鍵作用[1]。而CD44分子對T細(xì)胞的活化、增殖有增強(qiáng)作用。CD44分子是分布極為廣泛的細(xì)胞表面跨膜糖蛋白,屬細(xì)胞黏附分子的一種，CD44在器官形成、造血、淋巴細(xì)胞歸巢和遷移、淋巴細(xì)胞活化、激活誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡等方面具有廣泛功能[2]。早期的研究主要集中在CD44和腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系上，近年來CD44在淋巴細(xì)胞激活中的作用引起人們的關(guān)注。

淋巴歸巢[3]是淋巴細(xì)胞循環(huán)和參與炎癥及其免疫反應(yīng)的重要過程，關(guān)鍵環(huán)節(jié)是淋巴細(xì)胞表面黏附分子與血管內(nèi)皮細(xì)胞相互黏附，進(jìn)入血液循環(huán)，到達(dá)靶器官后再黏附游出血管發(fā)揮免疫作用的過程。CD44特異性抗體Hermes-1可以干擾人白細(xì)胞與高內(nèi)皮靜脈的內(nèi)皮結(jié)合，這表明CD44雖然不是淋巴細(xì)胞的歸巢受體但它與歸巢有關(guān)。白細(xì)胞在穿出血管的過程中，第一步都是沿著血管內(nèi)皮滾動，滾動過程中，血管壁細(xì)胞間的黏附變松，白細(xì)胞的CD44介導(dǎo)黏附到血管內(nèi)皮細(xì)胞上[4]。本研究中，CD44分子在皮膚扁平苔蘚中淋巴細(xì)胞表面的強(qiáng)陽性表達(dá)，進(jìn)一步印證了CD44分子在淋巴細(xì)胞向真皮上部歸巢中起著至關(guān)重要的作用,尤其是在淋巴細(xì)胞與血管內(nèi)皮之間的黏附中CD44的作用更顯著。

CD44分子對T細(xì)胞激活過程有增強(qiáng)作用，表現(xiàn)為受抗原刺激后T細(xì)胞上CD44分子表達(dá)暫時性增高。在激活過程中，CD44扮演“共刺激分子”的角色[5，6]，細(xì)胞膜上CD44分子與其配體透明質(zhì)酸結(jié)合，作為共刺激分子同TCR/CD3復(fù)合體接受的刺激一起引起T細(xì)胞的活化與增殖，同時CD44分子作為一種協(xié)同刺激因子可降低TCR活化的閾值。此外Siegelman等發(fā)現(xiàn)，浸潤淋巴細(xì)胞的表面有大量的白細(xì)胞相關(guān)抗原-1(LFA-1)表達(dá)，CD44和LFA-1協(xié)同作用，可使T細(xì)胞與CD3+T相互關(guān)聯(lián)，從而使T細(xì)胞激活。以上表明CD44分子在淋巴細(xì)胞激活過程中生物功能的重要性。

在扁平苔蘚皮損中，T細(xì)胞被活化后，分泌白細(xì)胞介素-2(IL-2)、r-干擾素(IFN-r)、單核細(xì)胞刺激因子(GM-CSF)等細(xì)胞因子，其中IFN-r誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)異?？乖?。同時Sennion等的研究也發(fā)現(xiàn)，在扁平苔蘚患者皮損基底層的角質(zhì)形成細(xì)胞有大量的ICAM-1表達(dá)，而表皮的其他部分則表達(dá)微弱。因此有人推測浸潤淋巴細(xì)胞上的CD44分子可能通過與表皮角質(zhì)形成細(xì)胞上的ICAM-1結(jié)合，而增強(qiáng)細(xì)胞間的黏附，促進(jìn)淋巴細(xì)胞向表皮內(nèi)浸潤[7]。

由此分析，CD44分子在扁平苔蘚發(fā)病中可能參與了T細(xì)胞的浸潤及激活過程，最終導(dǎo)致真皮上部淋巴細(xì)胞帶狀浸潤及基底細(xì)胞液化變性。

對于其他一些病理上以淋巴細(xì)胞浸潤為主的皮膚病中，CD44分子在淋巴細(xì)胞中的表達(dá)呈陽性或弱陽性，但與其在LP皮疹中的表達(dá)相比較，差異具有顯著性。原因可能為T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)在扁平苔蘚的發(fā)病中起了重要作用，同時CD44作為黏附分子參與了T細(xì)胞的活化和增殖，進(jìn)一步說明了CD44分子在扁平苔蘚中表達(dá)的重要意義。

參考文獻(xiàn)

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