王

(開封市中心醫(yī)院五福路院區(qū)，河南 開封 475003)

胃腸間質(zhì)瘤是胃腸道最常見的間葉源性腫瘤[1]，據(jù)統(tǒng)計，胃腸間質(zhì)瘤的發(fā)病率為(1～2)/10萬[2]，主要發(fā)生在中老年，KIT陽性的胃腸道間質(zhì)瘤通常表現(xiàn)為梭型細胞形態(tài)，而KIT陰性的胃腸道間質(zhì)瘤有PDGFRA 突變可以是上皮樣或混合型。目前，胃腸間質(zhì)瘤的確切發(fā)病機制尚不清楚，并且沒有明確的腫瘤標志物預(yù)測其預(yù)后。本研究通過分析胃腸間質(zhì)瘤組織中CD133、CD34、DOG-1表達水平，探討三者對胃腸間質(zhì)瘤臨床診斷與治療的影響。

1 資料與方法

1.1研究對象入組我院自2015年1月至2017年6月間收治的150例胃腸間質(zhì)瘤患者，其中男83例，女67例；腫瘤發(fā)生部位：直腸7例(4.67%)，胃68例(45.30%)，十二指腸13例(8.67%)，空回腸42例(28.00%)，結(jié)腸8例(5.33%)，胃腸道外12例(8.00%)。納入標準：經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為胃腸間質(zhì)瘤；采樣前未經(jīng)過其他治療包括放療及治療胃腸間質(zhì)瘤；18歲以上；無其他重大疾病史。排除標準：有嚴重基礎(chǔ)性疾?。?個月內(nèi)有大手術(shù)或大出血；年齡≤75歲。

1.2試劑與方法本研究中采用的抗體CD133(兔抗人多克隆抗體 1100)，抗體CD34(單克隆抗體 150)，抗體DOG-1(兔抗人多克隆抗體 1100)，均購自美國Sigma公司。免疫組化的具體方法[3]：將載玻片放入烤箱中，60 ℃ 1 h，室溫冷卻載玻片；二甲苯浸洗3次，每次10 min；梯度乙醇水化，依次為100%、85%、75%，每次3 min；蒸餾水浸洗3次，每次3 min；將玻片浸入盛有500 mL 0.01 mol·L-1檸檬酸鹽溶液的燒杯中，保鮮膜覆蓋，微波高火加熱至沸騰，調(diào)整至解凍溫度，12 min；室溫冷卻，蒸餾水浸洗3次，每次3 min；體積分數(shù)3% H2O2浸洗10 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶；蒸餾水浸洗1次，3 min，PBS浸洗2次，每次3 min；100 μL體積分數(shù)10%羊血清室溫封閉10 min；取100 μL各種抗體加在組織上，4 ℃過夜；將玻片從冰箱中取出，復(fù)溫至室溫；PBS浸洗3次，每次3 min；取100 μL二抗加在組織上，37 ℃孵育，30 min；取100 μL稀釋的DAB顯色；蘇木精復(fù)染，溫水核反藍，生物膠封片。用高倍顯微鏡觀察，對視野中的組織切片染色情況進行定性判斷。

1.3判斷指標免疫組化染色陽性細胞數(shù)>10%為陽性，陽性細胞數(shù)≤10%記為陰性[4]，其中CD133蛋白表達于細胞膜和細胞質(zhì)，CD34蛋白表達于細胞質(zhì)，DOG-1蛋白表達于細胞質(zhì)[5]。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 18.0進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料用百分數(shù)表示，比較用χ2檢驗，3種腫瘤標志物相關(guān)性分析用Speraman等級分析，檢驗水準α=0.05[6]。

2 結(jié)果

2.1胃腸間質(zhì)瘤組織中3種腫瘤標志物CD133、CD34、DOG-1蛋白的表達150例胃腸間質(zhì)瘤患者病理標本免疫組化切片結(jié)果顯示，CD133、CD34、DOG-1蛋白陽性率分別為42.00%(63/150)、38.70%(58/150)、84.70%(127/150)。見圖1。

圖1 胃腸間質(zhì)瘤患者的病理檢查結(jié)果

A: HE染色(HE，×200)；B: CD133蛋白陽性表達于細胞質(zhì)(S-P，×200)；C: CD34蛋白陽性表達于細胞膜(S-P，×200)；D: DOG-1蛋白陽性表達于細胞質(zhì)(S-P，×200)

2.2CD133、CD34、DOG-1蛋白表達與胃腸間質(zhì)瘤患者臨床病理特征的關(guān)系不同年齡患者CD133蛋白的陽性率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)；不同腫瘤部位(小腸、胃、其他)患者CD133、CD34、DOG-1蛋白的陽性率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)；不同浸潤程度(漿膜、漿膜外、肌層)患者CD133、CD34、DOG-1蛋白的陽性率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)，不同風險分級(極低、低、中、高)患者CD34、DOG-1蛋白的陽性率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。見表1～3。

表1 CD133、CD34、DOG-1蛋白表達與GIST患者性別、年齡的關(guān)系

表2 CD133、CD34、DOG-1蛋白表達與GIST患者腫瘤直徑及部位的關(guān)系

表3 CD133、CD34、DOG-1蛋白表達與GIST患者浸潤程度及風險分級的關(guān)系

2.3CD133、CD34、DOG-1蛋白在胃腸間質(zhì)瘤組織中表達的相關(guān)性DOG-1與CD133以及CD34的表達均成正相關(guān)(r=0.573、0.368，P<0.05)，而CD133與CD34之間無明顯相關(guān)性(P>0.05)。見表4。

表4 CD133、CD34、DOG-1蛋白在胃腸間質(zhì)瘤組織中表達的相關(guān)性

3 討論

胃腸間質(zhì)瘤是一類起源于胃腸道間葉組織的腫瘤，占胃腸道惡性腫瘤的1%～3%，80%以上的胃腸道間質(zhì)瘤的基因突變類型是KIT或PDGFRA突變，KIT突變的胃腸間質(zhì)瘤通常表現(xiàn)為梭型細胞形態(tài)，而PDGFRA的突變可以是上皮樣或混合型[7]，這些基因的突變伴隨著胃腸間質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展，并且可能會導(dǎo)致多種分子事件的發(fā)生。

CD133是一種質(zhì)膜糖蛋白，相對分子質(zhì)量為120 000，由865個氨基酸構(gòu)成的跨膜蛋白，基因定位于4p15.32，主要在細胞膜及細胞質(zhì)中表達，是人類造血干細胞的生物標志物[8]，CD133蛋白在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，很有可能是腫瘤特異的生物標志物，并且在肝癌、肺癌、胃癌等腫瘤干細胞中表達[9]。此外CD133蛋白可以提高腫瘤細胞的侵襲能力并且能夠增強其生殖能力，因此，在多種惡性腫瘤中CD133表達過高會直接導(dǎo)致腫瘤患者預(yù)后效果不佳及生存率低[10]。CD34屬于鈣黏蛋白家族，選擇性表達于人類的造血干細胞中，并且會隨著細胞的逐漸成熟而表達量逐漸減低直至消失，CD34在60%左右的胃腸間質(zhì)瘤中陽性表達，是胃腸間質(zhì)瘤檢測的一個重要生物指標[11]。

DOG-1是近幾年研究發(fā)現(xiàn)的胃腸間質(zhì)瘤的新的特異性標志物，由DOG-1編碼，是由8個跨膜區(qū)域組成的、鈣調(diào)節(jié)氯通道蛋白。在胃腸間質(zhì)瘤的診斷中，DOG-1的特異性及敏感性均達到100%。

本研究對上面所述的3個指標在胃腸間質(zhì)瘤中的表達情況以及三者表達之間的相關(guān)性進行了分析，結(jié)果表明，150例胃腸間質(zhì)瘤患者病理標本免疫組化切片結(jié)果顯示，CD133、CD34、DOG-1蛋白陽性率分別為42.00%(63/150)、38.70%(58/150)、84.70%(127/150)。不同年齡患者CD133蛋白的陽性率比較均差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)；不同腫瘤部位(小腸、胃、其他)患者CD133、CD34、DOG-1蛋白的陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)；不同浸潤程度(漿膜、漿膜外、肌層)患者CD133、CD34、DOG-1蛋白的陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)，不同風險分級(極低、低、中、高)患者CD34、DOG-1蛋白的陽性率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)；DOG-1與CD133以及CD34的表達均成正相關(guān)(P均<0.05);而CD133與CD34之間的無相關(guān)性(P均>0.05)。這就提示DOG-1可能與CD133和CD34之間協(xié)同促進胃腸間質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展[12]。

綜上所述，CD133、CD34、DOG-1蛋白均高表達于胃腸間質(zhì)瘤患者中，其中DOG-1的陽性表達率最高，并且這3個指標之間可能存在協(xié)同刺激作用，共同促進了胃腸間質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展。

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