楊佳穎，鐘昆芮，胡少偉，蘇 磊，姜艷艷，劉 斌

(北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 102488)

薄荷為唇形科植物薄荷MenthahaplocalyxBriq.的干燥地上部分，是我國常用的辛涼解表藥，歸肺、肝經(jīng)，具有疏散風(fēng)熱、清利頭目、利咽、透疹、疏肝行氣的功效，常用于治療風(fēng)熱感冒、頭痛和目赤等癥[1]，具有抗氧化、抗炎[2]、鎮(zhèn)痛[3]、清涼、止癢[4]等藥理作用，可用于醫(yī)藥[5]、食品[6]、化妝品[7]、香料[8]和煙草工業(yè)[9]等領(lǐng)域。

《中國藥典》2015年版一部規(guī)定薄荷為干燥地上部分入藥，同時規(guī)定薄荷采收期為夏秋兩季莖葉茂盛或花開至三輪時，且藥材中葉的質(zhì)量不得少于總質(zhì)量的30%[1]。然而薄荷葉易碎，在采收、干燥[10-11]和運輸過程中，損失一般遠(yuǎn)高于莖；產(chǎn)地和采收期不同，藥材中莖、葉比例也會存在一定差異，且在實際使用中，由于莖、葉比重不同，調(diào)劑人員稱取薄荷時很難做到莖、葉均勻調(diào)配，同樣會影響薄荷葉在藥材中的比例。因此，在薄荷實際使用中，藥材莖、葉的比例會存在較大差異。莖、葉比例不同，是否會影響薄荷藥材質(zhì)量？是否會影響其臨床藥效的發(fā)揮？目前尚無相關(guān)研究和報道。

薄荷中主要化學(xué)成分有揮發(fā)油類、黃酮類[12]和酚酸類[13]等，《中國藥典》2015年版一部以揮發(fā)油含量為指標(biāo)評價薄荷藥材質(zhì)量。在臨床實際應(yīng)用中，薄荷的主要應(yīng)用形式為水煎劑，表明薄荷藥效物質(zhì)基礎(chǔ)除揮發(fā)油類成分外，還含有大量的非揮發(fā)性成分[14]。課題組前期對薄荷中的抗氧化活性成分開展了大量研究，發(fā)現(xiàn)酚酸類成分對薄荷抗氧化作用[15]的貢獻(xiàn)較大。薄荷酚酸類成分[16]主要有迷迭香酸[17]、紫草酸和反式丹酚酸J等，迷迭香酸在薄荷酚酸類成分中含量最高，且具有極強的清除自由基作用[18]。因此，本研究以迷迭香酸為指標(biāo)，對不同產(chǎn)地和采收期薄荷藥材的質(zhì)量進(jìn)行評價。

采用課題組前期建立的迷迭香酸含量測定方法[15]，對江蘇、北京和安徽的38批不同采收期薄荷莖、葉中的迷迭香酸進(jìn)行含量測定，運用統(tǒng)計學(xué)方法分析迷迭香酸的含量變化，揭示迷迭香酸含量與產(chǎn)地及采收期的關(guān)系，明確薄荷莖、葉比例對藥材質(zhì)量[19]的影響，為確定薄荷最佳采收期提供科學(xué)依據(jù)，為進(jìn)一步完善薄荷藥材質(zhì)量評價方法奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Waters 1525-2996-2707高效液相色譜系統(tǒng)，Breeze 2色譜工作站(美國Waters公司)。Sartorious BT 25S型十萬分之一電子分析天平(北京賽多利斯儀器有限公司)；KQ-500DE超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。Sunfire C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm )(沃特世科技(上海)有限公司)。

1.2試藥 迷迭香酸(批號110721-200613)，中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用。薄荷樣品分別采自江蘇南星藥業(yè)有限責(zé)任公司、安徽藥材培育基地以及北京中醫(yī)藥大學(xué)藥園，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院劉春生教授鑒定為薄荷MenthahaplocalyxBriq.的地上部分。將江蘇、安徽和北京地區(qū)不同月份的薄荷樣本進(jìn)行分揀，使其莖、葉分離，分別稱定各樣品莖、葉質(zhì)量，計算薄荷葉占藥材總質(zhì)量的百分比。見表1。乙腈(美國Fisher公司，色譜純)；水為屈臣氏蒸餾水；其余試劑均為分析純。

表1不同產(chǎn)地采收的薄荷葉質(zhì)量占薄荷總質(zhì)量的百分比

Tab.1 Percentage of mint leaves harvested from different habitats in total mint mass

采收時間江蘇(2013年)/%安徽(2014年)/%北京(2013年)/%4月15日58．754月30日49．2657．675月15日45．5662．155月30日50．0956．656月15日42．4354．8775．276月30日41．1161．5873．267月15日38．2558．3667．277月30日43．1432．8051．008月15日27．4319．4566．738月30日29．6524．5355．769月15日41．9623．9220．089月30日39．3720．639．0510月15日37．2916．8710月30日55．5211月15日34．9211月30日27．7012月15日34．5412月30日31．87

2 方法

2.1色譜條件 采用本課題組已建立的測定薄荷中迷迭香酸含量的HPLC法[15]，色譜柱：Sunfire C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈(A)-5 mL·L-1甲酸水(B)梯度洗脫(0～20 min，22%A～28%A)；流速：1 mL·min-1；檢測波長：330 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。見圖1。

圖1不同產(chǎn)地薄荷莖、葉中迷迭香酸HPLC圖

A.江蘇采收薄荷莖；B.安徽采收薄荷莖；C.北京采收薄荷莖；D.江蘇采收薄荷葉；E.安徽采收薄荷葉；F.北京采收薄荷葉；G.對照品；1.迷迭香酸。

Fig.1 Rosmarinic acid HPLC chromatograms in stems and leaves of mint from different habitats

A.mint stem harvested from Jiangsu；B.mint stem harvested from Anhui；C.mint stem harvested from Beijing；D.mint leaves harvested from Jiangsu；E.mint leaves harvested from Anhui；F.mint leaves harvested from Beijing；G.reference substance；1.rosmarinic acid.

2.2對照品溶液的制備 精密稱定迷迭香酸適量，置于50 mL量瓶中，加甲醇超聲溶解，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取上述溶液1 mL，置于2 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3樣品溶液的制備 取薄荷粉末0.1 g，過100目篩，精密稱定，置于圓底燒瓶中，精密加入30 mL體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇，稱定質(zhì)量，回流提取40 min，放冷至室溫后，再稱定質(zhì)量，用體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4含量測定 對不同產(chǎn)地、不同采收時間薄荷莖和葉的樣品進(jìn)行含量測定，迷迭香酸的回歸方程為：y=3.08×106x+32 947.43(r=0.999 6)。

3 結(jié)果與分析

3.1薄荷中迷迭香酸總含量與采收期的相關(guān)性分析 以薄荷藥材中的迷迭香酸總量為縱坐標(biāo)(y)、采收時間為橫坐標(biāo)(x)，繪制3個產(chǎn)地薄荷藥材中迷迭香酸總量隨時間變化的曲線，見圖2。

圖2各產(chǎn)地不同采收期薄荷中迷迭香酸的總量

A.江蘇采收薄荷迷迭香酸總量；B.安徽采收薄荷迷迭香酸總量；C.北京采收薄荷迷迭香酸總量。

Fig.2 Total rosmarinic acid in mint from different habitats in different harvest times

A.total rosmarinic acid in mint habitats from Jiangsu；B.total rosmarinic acid in mint habitats from Anhui；C.total rosmarinic acid in mint habitats from Beijing.

由圖2可知，江蘇4，7和9月采收的薄荷中迷迭香酸含量較高；安徽4和7月采收的薄荷中迷迭香酸含量較高；北京7和8月中旬采收的薄荷中迷迭香酸含量較高。

3.2薄荷莖、葉中迷迭香酸含量與采收期的相關(guān)性分析 采用SPSS 19.0軟件，計算不同產(chǎn)地薄荷莖、葉中迷迭香酸含量的標(biāo)準(zhǔn)差、平均值以及變異系數(shù)，通過分析變異系數(shù)，比較薄荷莖、葉中迷迭香酸含量的波動，結(jié)果見表2。

由表2可知，各產(chǎn)地薄荷莖中迷迭香酸的含量變異系數(shù)較大，薄荷葉中迷迭香酸含量變異系數(shù)較小，即不同采收期薄荷葉中迷迭香酸的含量較穩(wěn)定。

表2不同產(chǎn)地薄荷莖、葉迷迭香酸含量的變異系數(shù)

Tab.2 Coefficient of variation of rosmarinic acid content in stems and leaves of mint from different habitats

產(chǎn)地部位標(biāo)準(zhǔn)差/mg·g-1平均值/mg·g-1變異系數(shù)/%江蘇莖0．90371．389365．05葉1．84504．165044．30安徽莖1．19661．762067．91葉1．51384．121936．73北京莖1．05531．917359．98葉6．996122．997947．00

3.3薄荷莖、葉中迷迭香酸含量的比較分析 2013年江蘇、安徽和北京采收的薄荷莖中迷迭香酸含量的平均值為1.389 3，1.762 0和1.917 3 mg·g-1；薄荷葉中迷迭香酸含量的平均值為4.165 0，4.121 9和22.997 9 mg·g-1。對薄荷莖、葉中迷迭香酸含量進(jìn)行比較，分別繪制各產(chǎn)地不同采收期薄荷莖、葉中迷迭香酸含量的比較柱形圖，見圖3。

圖3各產(chǎn)地不同采收期薄荷莖、葉中迷迭香酸含量比較

Fig.3 Comparison of rosmarinic acid content in stems and leaves of mint in different harvest periods from different habitats

由圖3可知，各產(chǎn)地薄荷葉中迷迭香酸的含量顯著高于薄荷莖中迷迭香酸的含量。

3.4薄荷莖、葉中迷迭香酸含量與產(chǎn)地的相關(guān)性分析 采用SPSS 19.0軟件，運用Spearman等級相關(guān)系數(shù)對迷迭香酸含量與產(chǎn)地間是否顯著相關(guān)進(jìn)行分析。

薄荷莖的相關(guān)系數(shù)為0.239，雙側(cè)顯著性值P=0.102>0.05，即薄荷莖中迷迭香酸含量與產(chǎn)地?zé)o顯著相關(guān)性。薄荷葉的相關(guān)系數(shù)為0.591，雙側(cè)顯著性值P=0.000<0.05，即薄荷葉中迷迭香酸含量與產(chǎn)地存在顯著相關(guān)性。

綜上所述，薄荷莖中迷迭香酸含量與產(chǎn)地不存在顯著相關(guān)；薄荷葉中迷迭香酸含量與產(chǎn)地存在顯著相關(guān)，薄荷葉中迷迭香酸的含量受產(chǎn)地因素影響。

4 討論

實驗結(jié)果顯示，采收時間不同，薄荷中迷迭香酸的含量差異較大，因此選擇適宜的采收時間尤為重要；以迷迭香酸含量為考察指標(biāo)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，江蘇省產(chǎn)薄荷藥材的最佳采收期為4，7和9月，安徽省最佳采收期為4和7月，北京最佳采收期為7和8月。因此，江蘇和安徽兩省薄荷的采收期可在傳統(tǒng)采收期夏秋兩季的基礎(chǔ)上增加4月這一采收時間，使薄荷資源的利用更為有效。

不同產(chǎn)地薄荷葉中迷迭香酸的含量雖有差異但普遍高于薄荷莖中迷迭香酸的含量、且穩(wěn)定性好。因此，控制薄荷藥材中葉的比例對于控制藥材質(zhì)量具有重要意義，這為《中國藥典》2015年版一部中的規(guī)定“薄荷葉的比例不得少于總量的30%”[1]提供了合理解釋和科學(xué)依據(jù)。

綜上所述，產(chǎn)地、采收期和采收部位均對薄荷藥材中迷迭香酸的含量有較大影響。因此，在采收時為了提高迷迭香酸的得率，可選用薄荷葉或葉比例較高的薄荷藥材。針對不同產(chǎn)地選擇適宜的采收期并控制薄荷藥材中的莖葉比例，從而保證其有效成分的含量，對提高薄荷資源利用率和完善薄荷藥材的質(zhì)量控制具有重大意義。

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