潘凌子 大連市血液中心 血型室 （遼寧 大連 116001）

微生物檢驗(yàn)是運(yùn)用微生物學(xué)相關(guān)理論與方法，對(duì)待檢測樣本中微生物種類、性質(zhì)、數(shù)量及其影響進(jìn)行檢驗(yàn)與分析的過程。膜過濾法微生物檢驗(yàn)技術(shù)作為近年來廣泛應(yīng)用于各行業(yè)領(lǐng)域的一種全新微生物檢驗(yàn)技術(shù)，具有適用范圍廣、檢測結(jié)果可永久保存、檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度高以及可獲得定量檢測結(jié)果等一系列優(yōu)勢，應(yīng)用效果備受肯定。本文即針對(duì)膜過濾法微生物檢驗(yàn)技術(shù)及其應(yīng)用問題展開分析與探討。

1.膜過濾法微生物檢驗(yàn)概述

以得到定量檢測結(jié)果。

2.膜過濾法微生物檢驗(yàn)應(yīng)用

基于膜過濾法進(jìn)行微生物檢驗(yàn)是目前國際范圍內(nèi)所公認(rèn)的一種微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法，在西方國家藥典標(biāo)準(zhǔn)、EPA、以及FDA等組織中得到了肯定，目前在環(huán)境、食品及飲料、制藥、以及化品等工業(yè)品質(zhì)檢測控制領(lǐng)域中得到了非常廣泛的應(yīng)用[1,2]。

在微生物檢驗(yàn)領(lǐng)域中，與常規(guī)直接檢驗(yàn)方法相比，應(yīng)用膜過濾法檢驗(yàn)主要具備以下幾個(gè)方面的優(yōu)勢：第一，可提高所檢測樣品的覆蓋范圍，具有更好的適用性價(jià)值；第二，可以通過膜過濾濃縮效應(yīng)的方式，提高微生物檢驗(yàn)的準(zhǔn)確度；第三，可以通過保存帶菌落濾膜的方式永久保存檢驗(yàn)檢測記錄；第四，可以將濾膜上所培養(yǎng)菌落與檢測樣品直接對(duì)應(yīng)，

2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器

實(shí)驗(yàn)試劑主要包括金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌，均由上海東琴環(huán)保生物科技有限公司提供；藍(lán)色素、紅色素均由上海東琴環(huán)保生物科技有限公司提供；沙氏瓊脂培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基由上海撫生實(shí)業(yè)有限公司提供。實(shí)驗(yàn)儀器為微生物過濾器，儀器型號(hào)為Millif l ex Plus，由默克公司提供。

2.2 樣品前處理

精密稱取1.0g劑量色素樣品置入9.0mL劑量無菌生理鹽水中，充分混合均勻后備用。用5.0mL劑量生理鹽水對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌以及白色念珠菌菌種斜面進(jìn)行沖洗，以菌懸液終濃度2.0×103～3.0×104CFU/mL為最終調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)[3-5]。

2.3 實(shí)驗(yàn)方法

2.3.1 常規(guī)法

將0.1mL劑量菌懸液與9.9mL劑量無菌生理鹽水充分混合均勻后靜置備用，吸取1.0mL劑量混合物2份至無菌平板中，分別置入15.0mL～20.0mL劑量胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基，在36.0?C恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為2～3d。針對(duì)白色念珠菌，置入15.0mL～20.0mL劑量沙氏瓊脂培養(yǎng)基，在30.0?C恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為3d～5d?；厥諏?shí)驗(yàn)中將0.1mL劑量菌懸液與9.9mL劑量無菌生理鹽水稀釋后色素樣品中，充分混合均勻后靜置備用，吸取1.0mL劑量混合物2份至無菌平板中，分別置入15.0mL～20.0mL劑量胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基，在36.0?C恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為2～3d。針對(duì)白色念珠菌，置入15.0mL～20.0mL劑量沙氏瓊脂培養(yǎng)基，在30.0?C恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為3～5d。

表1. 藍(lán)色素中各菌種檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)比表

2.3.2 膜過濾法

將0.1mL劑量菌懸液與9.9mL劑量無菌生理鹽水充分混合均勻后靜置備用，吸取1.0mL劑量混合物2份至無菌平板中，將每份樣品均移至帶濾過膜與含50.0mL劑量洗液的膜過濾裝置內(nèi)進(jìn)行過濾處理。用150.0mL～500.0mL劑量洗液進(jìn)行清洗。然后將薄膜移至2個(gè)不同TSA平皿表面，在36.0?C恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為2～3d。針對(duì)白色念珠菌，置入15.0mL～20.0mL劑量沙氏瓊脂培養(yǎng)基，在30.0?C恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為3～5d?；厥諏?shí)驗(yàn)中將0.1mL劑量菌懸液與9.9mL劑量無菌生理鹽水充分混合均勻后靜置備用，吸取1.0mL劑量混合物2份至無菌平板中，將每份樣品均移至帶濾過膜與含50.0mL劑量洗液的膜過濾裝置內(nèi)進(jìn)行過濾處理。用150.0mL～500.0mL劑量洗液進(jìn)行清洗。然后將薄膜移至2個(gè)不同TSA平皿表面，在36.0?C恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為2～3d。針對(duì)白色念珠菌，置入15.0mL～20.0mL劑量沙氏瓊脂培養(yǎng)基，在30.0?C恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為3～5d。

表2. 紅色素中各菌種檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)比表

2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表（見表1～2）所示。結(jié)合表中數(shù)據(jù)可見：常規(guī)法對(duì)各種菌種的回收率均低于50%，不符合檢測要求，主要原因是色素中含有抑菌物質(zhì)導(dǎo)致顏色干擾，菌落數(shù)難以準(zhǔn)確辨識(shí)。而應(yīng)用膜過濾法對(duì)各種菌種的回收率均高于70%，符合標(biāo)準(zhǔn)要求，提示本方法對(duì)色素微生物檢驗(yàn)具有良好可行性。

本文在分析膜過濾法微生物檢驗(yàn)技術(shù)基本原理與優(yōu)勢的基礎(chǔ)之上，以牙膏膏體色素原料中的微生物檢驗(yàn)為例，對(duì)比分析常規(guī)檢驗(yàn)方法與膜過濾法在微生物檢驗(yàn)方面的應(yīng)用價(jià)值，經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)膜過濾法對(duì)色素微生物檢驗(yàn)具有良好可行性，望能夠引起各方人員的關(guān)注與重視。

參考文獻(xiàn)

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