鐘文文,許俊杰,孫 晴

(臨沂大學(xué)藥學(xué)院,山東臨沂 276000)

磷是動物必需的礦物質(zhì)元素，對動物的生長、發(fā)育及機(jī)體代謝具有重要作用。磷是雞蛋形成必需的元素，同時磷是核酸、磷脂合成的原料，也是維持骨骼完整性的必需物質(zhì)（Boling等，2000）。家禽日糧大部分由谷物類原料構(gòu)成，而植物中70%的磷是以植酸磷的形式存在，由于家禽機(jī)體植酸酶的活性較低，對植物原料中磷的利用率低（Nelson，1976）。植酸能結(jié)合礦物質(zhì)，降低礦物元素的生物學(xué)利用率和營養(yǎng)物質(zhì)的消化率，同時它也可以結(jié)合蛋白，抑制木聚糖酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶的活性（Caldwell，1992）。Boling 等（2000）報道，低磷日糧添加60 g/kg檸檬酸可以肉雞日增重及脛骨灰分含量。Snow等（2004）研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，檸檬酸提高磷的利用效率與添加植酸酶和維生素D3的效果一致。目前關(guān)于除檸檬酸以外的有機(jī)酸對蛋雞磷利用率影響的研究報道較少。因此，本試驗在磷缺乏日糧中添加檸檬酸、丁酸和富馬酸，研究其對蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、磷利用率、脂代謝及回腸微生物組分的影響，為有機(jī)酸的應(yīng)用、提高磷有效利用率、降低過量磷排放問題提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及分組 選取健康、產(chǎn)蛋率相近的32周齡海蘭褐蛋雞1200只，試驗采用2（低磷和高磷）×4（不添加有機(jī)酸、檸檬酸、富馬酸、丁酸）因子設(shè)計，共設(shè)8個組，每組5個重復(fù)，每個重復(fù)30只。試驗日糧參考NRC（1994）肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，磷水平設(shè)為60%和100%，有機(jī)酸添加量為8 g/kg配合飼料。日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.2 飼養(yǎng)管理 蛋雞采用3層階梯籠養(yǎng)，每籠3只雞。采用人工光照和自然光照相結(jié)合，光照時間為16 h，舍內(nèi)相對濕度為65%～70%。試驗雞只全期自有采食和飲水，按照常規(guī)程序進(jìn)行免疫和消毒。預(yù)飼期2周，試驗期10周。

表1 日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 測定指標(biāo)

1.3.1 生產(chǎn)性能 試驗期間每天按重復(fù)記錄產(chǎn)蛋個數(shù)，稱量蛋重，每周按重復(fù)記錄采食量，計算產(chǎn)蛋率、平均日采食量、蛋重和料蛋比。

1.3.2 蛋品質(zhì)測定 試驗結(jié)束后，每個重復(fù)隨機(jī)選8枚雞蛋，每組40枚進(jìn)行蛋品質(zhì)測定。蛋品質(zhì)指標(biāo)采用日立全自動蛋品質(zhì)分析儀測定（DET-6000）。

1.3.3 脛骨礦物質(zhì)含量測定 試驗結(jié)束后，每組隨機(jī)選取8只雞進(jìn)行屠宰，采集蛋雞脛骨，用于測定 灰 分（GB/T 6438-2007）、鈣（GB/T6437-202）和磷（GB/T 6436-200）。

1.3.4 血清指標(biāo)測定 試驗結(jié)束后，每組隨機(jī)選取8只雞頸靜脈采血5 mL，3000 r/min離心10 min后用于測定血清膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和堿性磷酸酶。采用試劑盒法測定，試劑盒購自南京建成生物工程有限公司。

1.3.5 回腸細(xì)菌含量的測定 雞只屠宰后，收集空腸，參考Jahanian和Golshadi（2015）研究方

法測定回腸大腸桿菌、沙門氏菌和乳酸桿菌含量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 采用SPSS 19.0版多因素方差分析（Multi-way ANOVA）處理數(shù)據(jù)，各處理間的平均值比較采用Tukey氏多重比較進(jìn)行差異顯著性檢驗。以P＜0.05作為差異顯著標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對蛋雞生產(chǎn)性能的影響 由表2可知，日糧添加檸檬酸顯著提高蛋重（P＜0.05）；磷缺乏日糧組蛋重顯著降低2.23%（P＜0.05），有機(jī)酸和日糧磷水平對產(chǎn)蛋率和蛋重的影響具有顯著的交互效應(yīng)（P＜0.05）。各處理組對蛋雞采食量無顯著影響（P＞0.05），但有機(jī)酸和日糧磷水平對料蛋比的影響具有顯著的交互效應(yīng)（P＜0.05）。

2.2 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對蛋品質(zhì)的影響

由表3可知，磷缺乏日糧（不添加有機(jī)酸）蛋殼厚度顯著降低4.65%（P＜0.05），且有機(jī)酸和日糧磷水平對蛋殼厚度的影響具有顯著的交互效應(yīng)（P＜0.05）。日糧磷水平和有機(jī)酸對蛋殼強(qiáng)度、蛋黃顏色和哈夫單位均無顯著影響（P＞0.05）。與對照組、檸檬酸組和丁酸組相比，日糧添加富馬酸蛋黃指數(shù)顯著提高2.02%，3.18%和2.48%（P＜ 0.05）。

2.3 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對蛋雞脂代謝指標(biāo)的影響 由表4可知，日糧添加有機(jī)酸顯著增加蛋雞血清高密度脂蛋白水平（P＜0.05）。對照組血清甘油三酯水平顯著高于其他各組（P＜0.05）。日糧添加丁酸顯著降低蛋雞血清甘油三酯水平（P＜0.05）。日糧磷水平對蛋雞血清脂代謝指標(biāo)均無顯著影響（P＞0.05）。磷缺乏日糧降低血清膽固醇含量，但添加有機(jī)酸后膽固醇含量顯著增加（P＜0.05），且日糧磷水平和有機(jī)酸對蛋雞血清膽固醇的影響具有顯著的交互效應(yīng)（P ＜ 0.05）。

2.4 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對蛋雞脛骨礦物質(zhì)含量及血清堿性磷酸酶活性的影響 由表5可知，磷缺乏日糧顯著降低蛋雞脛骨灰分和鈣的含量（P＜0.05）。與對照組相比，日糧添加富馬酸蛋雞脛骨灰分的含量顯著提高3.05%（P＜0.05）。日糧添加有機(jī)酸對蛋雞脛骨磷的含量無顯著的影響（P＞0.05），但磷缺乏日糧添加檸檬酸顯著提高蛋雞脛骨磷含量（P＜0.05），且日糧磷水平和有機(jī)酸對蛋雞脛骨磷含量的影響具有顯著的交互效應(yīng)（P＜0.05）。磷缺乏日糧組血清堿性磷酸酶的活力顯著高于添加有機(jī)酸組（P＜0.05），且日糧磷水平和有機(jī)酸對血清堿性磷酸酶活力的影響具有顯著的交互作用（P＜0.05）。

表2 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

表3 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對蛋品質(zhì)的影響

2.5 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對蛋雞回腸細(xì)菌含量的影響 由表6可知，日糧磷水平對蛋雞回腸細(xì)菌含量無顯著影響（P＞0.05）。日糧添加有機(jī)酸顯著影響蛋雞回腸大腸桿菌、沙門氏菌和乳酸桿菌含量（P＜0.05）。與對照組和富馬酸組相比，丁酸組蛋雞回腸大腸桿菌含量顯著降低12.78%和10.49%（P＜0.05）。與對照組相比，日糧添加檸檬酸和富馬酸蛋雞回腸乳酸桿菌含量顯著提高12.38%和18.62%（P＜0.05）。日糧磷水平和有機(jī)酸對蛋雞回腸細(xì)菌含量的影響無顯著的交互效應(yīng)（P＞0.05）。

表4 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對蛋雞脂代謝的影響

表5 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對脛骨礦物質(zhì)含量及血清堿性磷酸酶活力的影響

3 討論

3.1 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對蛋雞生產(chǎn)性能的影響 畜禽養(yǎng)殖過程中，磷對環(huán)境的影響受到人們廣泛關(guān)注。單胃動物的日糧主要由油籽蛋白和谷物構(gòu)成，其含較高水平的磷，但磷又主要由植酸磷形式存在（賀建華，2005）。由于腸道植酸酶的活力很低，家禽對植物中磷的利用率不高，因此需要額外在飼料中補(bǔ)充磷。磷是家禽日糧中最貴的礦物質(zhì)元素，同時提高家禽磷的水平也增加了磷排放對環(huán)境的污染。前人研究表明，有機(jī)酸可以釋放植酸結(jié)合的磷，提高磷的利用率（Liem等，2008）。本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧添加檸檬酸和丁酸可以顯著提高蛋雞的產(chǎn)蛋率，同時日糧添加有機(jī)酸也提高了蛋重。同時，磷缺乏日糧添加有機(jī)酸可以提高產(chǎn)蛋率，降低料蛋比，這與Dehghani-Tafti和 Jahanian（2016）的研究結(jié)果一致。有機(jī)酸可以降低腸道pH，抑制植酸對礦物元素的螯合，從而使植酸鹽被內(nèi)源性植酸酶水解（Applegate等，2003；Maenz等，1999）。

表6 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對蛋雞回腸細(xì)菌含量的影響

3.2 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對蛋雞血清脂代謝指標(biāo)的影響 日糧添加有機(jī)酸顯著降低血清膽固醇含量，同時顯著提高血清高密度脂蛋白水平。目前，關(guān)于有機(jī)酸提高血清高密度脂蛋白水平的機(jī)制尚不清楚，但有機(jī)酸對高密度脂蛋白的影響可能與其作為添加劑對機(jī)體健康有益相關(guān)。Dehghani-Tafti和Jahanian等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加檸檬酸可以提高肉雞血清高密度脂蛋白，這與本試驗研究結(jié)果一致。

3.3 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對蛋雞脛骨礦物質(zhì)含量及血清堿性磷酸酶活力的影響 本研究發(fā)現(xiàn)，缺磷日糧顯著降低蛋雞脛骨灰分的含量。但缺磷日糧組蛋雞脛骨磷含量表現(xiàn)為最高，這可能與蛋雞飼喂缺磷日糧后，機(jī)體對磷的吸收能力加強(qiáng)有關(guān)，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。缺磷日糧中添加檸檬酸提高了蛋雞脛骨磷含量，這與Rafacz-Livingstion等（2005）在肉雞上的研究結(jié)果一致，這可能與檸檬酸改變腸道pH，使其有利于植酸鹽的水解有關(guān)（Liem等，2008）。Boling等（2000）研究報道，檸檬酸可以結(jié)合鈣離子，降低其與植酸結(jié)合，阻止其形成不溶性植酸鈣，從而使內(nèi)源性植酸酶更能發(fā)揮作用。

3.4 磷缺乏日糧添加有機(jī)酸對蛋雞回腸細(xì)菌含量的影響 本研究發(fā)現(xiàn)，日糧磷水平對蛋雞回腸細(xì)菌含量無顯著影響，但日糧添加丁酸可顯著降低回腸大腸桿菌的含量。日糧添加有機(jī)酸同時可以降低回腸沙門氏菌的含量。有機(jī)酸在食品工業(yè)中使用較廣泛，其可以防止食品變質(zhì)，延長食品保質(zhì)期（楊佳馥，1994）。同時，有機(jī)酸在食品生產(chǎn)和加工過程中也可以控制微生物和食物源性病原體的污染（Ricke，2003）。Liem 等（2008）研究發(fā)現(xiàn)，富馬酸和檸檬酸是弱酸，其可以抑制沙門氏菌和大腸桿菌的繁殖，而對腸道中的有益菌（如乳酸桿菌）無抑制作用，這與乳酸桿菌對pH不敏感（Ferket等，2002）及富馬酸和檸檬酸解離速度緩慢有關(guān)（Skinner等，1991）。

4 結(jié)論

缺磷日糧添加檸檬酸和丁酸可以提高蛋雞產(chǎn)蛋率和蛋重，改善料蛋比。磷缺乏日糧添加有機(jī)酸可以提高蛋殼厚度及蛋雞脛骨磷的含量。

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