劉濤，張璐，張凡

(江漢大學(xué)附屬醫(yī)院，武漢430015)

膠質(zhì)瘤抑癌候選基因2(GLTSCR2)是一種抑癌基因，主要定位于細(xì)胞核，可通過p53依賴性信號(hào)通路抑制細(xì)胞增殖并對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)行調(diào)控[1～4]。研究發(fā)現(xiàn)，在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤和結(jié)腸癌等惡性腫瘤細(xì)胞中GLTSCR2低表達(dá)，其低表達(dá)與患者預(yù)后不良有關(guān)[5]。本研究探討GLTSCR2在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2011年7月～2012年7月江漢大學(xué)附屬醫(yī)院收治的前列腺癌患者45例。所有患者符合《前列腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)》[6]，并經(jīng)術(shù)后組織病

理檢查明確診斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往行外科手術(shù)、化療或放療等抗腫瘤治療；②有前列腺炎病史，術(shù)前1周發(fā)生急性尿潴留；③術(shù)前2周接受前列腺按摩或直腸指檢，術(shù)前1個(gè)月接受前列腺穿刺?；颊吣挲g(64.3±7.1)歲，Gleason評(píng)分(4.7±0.7)分，血清前列腺特異性抗原(PSA)水平(29.4±3.1)ng/mL，吸煙29例；TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期25例，Ⅲ、Ⅳ期20例；組織分化程度：高中分化31例，低未分化14例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移6例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例。同期選擇該院收治的前列腺增生患者40例，年齡(65.1±7.8)歲。所有患者經(jīng)術(shù)后組織病理檢查明確診斷。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①慢性前列腺炎；②合并惡性腫瘤、全身嚴(yán)重感染；③術(shù)前2周接受前列腺按摩或直腸指檢，術(shù)前1個(gè)月接受前列腺穿刺。本研究經(jīng)江漢大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者或其家屬知情同意。

1.2 前列腺組織GLTSCR2蛋白表達(dá)檢測(cè) 采用免疫組化法。取手術(shù)切除的前列腺癌組織及其配對(duì)的癌旁正常組織以及手術(shù)切除的前列腺增生組織，液氮中保存。實(shí)驗(yàn)前取部分組織，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。將切片置于60 ℃烤箱烤片2 h，二甲苯脫臘，梯度乙醇脫水；3% H2O2室溫孵育15 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶活性；微波加熱抗原修復(fù)；加入山羊血清封閉液室溫孵育20 min，再加入GLTSCR2一抗4 ℃孵育過夜；次日PBS沖洗3次，加入生物素標(biāo)記的羊抗小鼠IgM二抗，37 ℃孵育15 min；DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。GLTSCR2蛋白陽性染色主要定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核，呈褐色或棕褐色顆粒。隨機(jī)選擇5個(gè)400倍視野，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)。根據(jù)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占比例綜合判定GLTSCR2蛋白表達(dá)。染色強(qiáng)度：-為0分，+為1分，++為2分，+++為3分。陽性細(xì)胞所占比例：≤25%為1分，>25%～≤75%為2分，>75%為3分。二者乘積為0～9分，其中0～2分為低表達(dá)、3～9分為高表達(dá)。

1.3 隨訪 前列腺癌患者從術(shù)后開始，每3個(gè)月隨訪1次，隨訪方式包括門診及住院復(fù)查、電話隨訪等，隨訪截至2017年3月31日。比較不同GLTSCR2蛋白表達(dá)者預(yù)后情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)或Fishers確切概率法。生存分析采用Kaplan-Meier法及Log-rank檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同前列腺組織GLTSCR2蛋白表達(dá)比較 前列腺癌組織GLTSCR2蛋白低表達(dá)34例份(75.6%)、癌旁正常組織為23例份(51.1%)、前列腺增生組織為13例份(32.5%)。前列腺癌組織GLTSCR2蛋白低達(dá)率明顯高于癌旁正常組織和前列腺增生組織(χ2分別為5.789、15.881，P均<0.05)，而癌旁正常組織與前列腺增生組織比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.004，P>0.05)。

2.2 前列腺癌組織GLTSCR2蛋白表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見表1。

2.3 前列腺癌組織不同GLTSCR2蛋白表達(dá)者生存時(shí)間比較 34例前列腺癌組織GLTSCR2蛋白低表達(dá)者平均生存時(shí)間為31.4個(gè)月，11例前列腺癌組織GLTSCR2蛋白高表達(dá)者平均生存時(shí)間為61.2個(gè)月。前列腺癌組織GLTSCR2蛋白低表達(dá)者平均生存時(shí)間明顯短于GLTSCR2蛋白高表達(dá)者(χ2=5.081，P<0.05)。見圖1。

表1 前列腺癌組織GLTSCR2蛋白表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

圖1 前列腺癌組織不同GLTSCR2蛋白表達(dá)者生存曲線

3 討論

PSA是前列腺癌較敏感的血清腫瘤標(biāo)志物，可用于前列腺癌的早期篩查，但仍有部分患者確診前就錯(cuò)過了根治性手術(shù)的最佳時(shí)機(jī)，只能采取藥物或手術(shù)去勢(shì)治療。藥物或手術(shù)去勢(shì)治療雖然可以明顯延緩前列腺癌進(jìn)展，但接近90%患者經(jīng)過15～30個(gè)月的雄激素治療后出現(xiàn)雄激素抵抗，引起前列腺癌復(fù)發(fā)[7]。因此，探討前列腺癌的發(fā)病機(jī)制并進(jìn)行干預(yù)，對(duì)改善患者預(yù)后具有重要意義。

GLTSCR2是最新發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞核蛋白，可參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡等多種生物學(xué)過程[8,9]。Lee等[10]研究發(fā)現(xiàn)，GLTSCR2可抑制細(xì)胞周期進(jìn)展并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，可能作為一種抑癌基因參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。Kim等[11]研究發(fā)現(xiàn)，敲除小鼠GLTSCR2基因能促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖。Moon等[12]報(bào)道，GLTSCR2低表達(dá)與乳腺癌患者瘤體體積和預(yù)后不良密切相關(guān)。Kim等[13]研究證實(shí)，上調(diào)GLTSCR2表達(dá)可抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲和遷移。但亦有報(bào)道認(rèn)為，下調(diào)肺癌A549細(xì)胞GLTSCR2表達(dá)，可抑制MDM2介導(dǎo)的p53降解途徑，并阻斷細(xì)胞周期進(jìn)展[14]。Zhang等[15]研究亦認(rèn)為，在不同組織中GLTSCR2參與的信號(hào)通路不同，從而使GLTSCR2表現(xiàn)出抑癌和促癌雙重作用。以上研究表明GLTSCR2可能具有組織特異性，對(duì)不同組織來源的腫瘤細(xì)胞具有不同的生物學(xué)功能。既往有研究報(bào)道，正常前列腺組織p53蛋白低表達(dá)，而前列腺癌組織p53蛋白過表達(dá)，其表達(dá)變化與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)[16]。p53是GLTSCR2調(diào)控的重要靶基因，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)GLTSCR2能夠通過抑制MDM2介導(dǎo)的降解途徑促進(jìn)p53表達(dá)，進(jìn)而參與調(diào)控細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡等生物學(xué)過程[17]。Kalt等[18]研究表明，GLTSCR2能夠通過抑制腫瘤細(xì)胞代謝，阻斷腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。然而關(guān)于GLTSCR2在前列腺癌組織中的表達(dá)及其作用機(jī)制相關(guān)研究較少。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，前列腺癌組織GLTSCR2蛋白低表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織和前列腺增生組織，而癌旁正常組織與前列腺增生組織比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明GLTSCR2蛋白在前列腺癌組織中可能具有抑癌基因作用。本研究還發(fā)現(xiàn)，GLTSCR2蛋白低表達(dá)與Gleason評(píng)分和血清PSA水平有關(guān)，提示GLTSCR2蛋白低表達(dá)可能參與前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程。本研究前列腺癌組織GLTSCR2蛋白低表達(dá)者生存時(shí)間明顯短于GLTSCR2蛋白高表達(dá)者，提示GLTSCR2蛋白表達(dá)變化可能有助于評(píng)估前列腺癌患者預(yù)后。

綜上所述，GLTSCR2蛋白在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中具有抑癌基因作用；前列腺癌組織GLTSCR2蛋白表達(dá)越低，患者預(yù)后越差。

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