廖天江

摘要：以黑曲霉作為發(fā)酵菌，在35℃環(huán)境下，按照接種量5%、料水比80%的奈件進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)，并對發(fā)酵產(chǎn)物的粗蛋白、蛋白酶、纖維素酶含量和氨基酸總量進(jìn)行檢測。為了研究發(fā)酵沙棘籽渣對蛋雞生產(chǎn)性能及腸道菌群的影響，試驗(yàn)選取36羽270日齡蛋雞，以玉米豆粕型為基礎(chǔ)日糧，對4組蛋雞分別飼喂添加0、0.4%、0. 8%或1.2%發(fā)酵沙棘籽渣的基礎(chǔ)日糧，進(jìn)行為期6周的飼養(yǎng)試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果顯示沙棘籽渣經(jīng)黑曲霉發(fā)酵后，粗蛋白含量和蛋白酶含量顯著提高。與對照組相比，添加發(fā)酵沙棘籽渣對蛋雞產(chǎn)蛋率和飼料轉(zhuǎn)化率均有一定的改善作用，各試驗(yàn)組腸道中大腸桿菌數(shù)（單位為CFU/g）分別降低10. 66%、6.23%和4.67%（P<0.01）：添加0.8%的發(fā)酵后沙棘籽渣，雙歧桿菌數(shù)量有極顯著提高（P<0.01）。試驗(yàn)證明黑曲霉發(fā)酵可以提高沙棘籽渣的飼料價值，其不僅可以提高蛋雞的生產(chǎn)性能，而且可以優(yōu)化腸道中的菌群結(jié)構(gòu)。

關(guān)鍵詞：沙棘籽渣;發(fā)酵;蛋雞;生產(chǎn)性能;腸道菌群

中圖分類號：S 831.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1001-0769（2018）10-0061-03

沙棘為胡頹子科沙棘屬落葉灌木或小喬木，生長適應(yīng)性強(qiáng)，是我國廣泛栽培的資源植物，果實(shí)營養(yǎng)價值豐富，飼料開發(fā)價值高。在沙棘果榨取果汁過程中，有果渣和籽渣的殘?jiān)铮卸喾N營養(yǎng)成分和生物活性物質(zhì)，如氨基酸、生物堿類、揮發(fā)油類、維生素、微量元素等，具有一定的營養(yǎng)價值，能提高飼料利用率，還具有增強(qiáng)免疫、抗應(yīng)激、調(diào)節(jié)新陳代謝等作用，對畜禽的生長和生產(chǎn)性能的提高具有不同程度的促進(jìn)作用。

本試驗(yàn)利用黑曲霉發(fā)酵沙棘籽渣為試驗(yàn)材料，通過試驗(yàn)分析黑曲霉發(fā)酵對沙棘籽渣營養(yǎng)成分的影響，進(jìn)一步探討飼料中添加發(fā)酵沙棘籽渣對蛋雞生產(chǎn)性能的影響，分析蛋雞腸道菌群的變化，構(gòu)建不同比例發(fā)酵籽渣與蛋雞生產(chǎn)性能及腸道菌群之間的量效關(guān)系，為在家禽養(yǎng)殖業(yè)利用沙棘籽渣提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗(yàn)菌株

黑曲霉由西北農(nóng)林科技大學(xué)提供。將由斜面上刮下的黑曲霉孢子加入到用無菌水配制的20%的甘油中，然后接種到無菌的冷藏管中，低溫保存。

1.1.2試驗(yàn)原料

沙棘籽渣由天水昌盛食品有限責(zé)任公司提供。沙棘果實(shí)經(jīng)低溫冷凍處理，再經(jīng)機(jī)械擠壓使沙棘籽粒與果皮、果汁分離，所得沙棘籽粒烘烤至含水量為3%。再將沙棘籽粉碎，粉碎度為100目，儲存沙棘籽粉末，備用。

1.1.3培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（Potato Dextrose Agar，PDA）培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、瓊脂20 g、葡萄糖20 g、蒸餾水1 000 mL。將去皮切塊的馬鈴薯置于鍋中，加水1 000 mL煮1 h，取雙層紗布過濾液，加糖和瓊脂，溶解，補(bǔ)水至1 000 mL，121℃滅菌20 min。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)

接種黑曲霉菌絲到PDA培養(yǎng)基上，恒溫培養(yǎng)（28℃）72 h。

1.2.2種子液的制備

用無菌水沖洗擴(kuò)大培養(yǎng)的黑曲霉，置于50 mL離心管（己滅菌）中，制成孢子懸浮液，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

1.2.3固態(tài)發(fā)酵

按照80%的料液比，取500 g沙棘籽渣，與水混勻裝入聚丙烯袋中，高壓滅菌25 min，溫度121℃。將上述原料降至室溫接種黑曲霉種子液（接種量為5%），置于35℃發(fā)酵72 h。發(fā)酵結(jié)束后，樣品55℃烘干并粉碎。

1.2.4日糧添加試驗(yàn)

試驗(yàn)在天水市麥積區(qū)甘泉鎮(zhèn)養(yǎng)雞場進(jìn)行。選用270日齡蛋雞36羽，分為4組，每個組3羽，3個平行樣，分別添加0、0. 4%、0.8%或1.2%的發(fā)酵沙棘籽渣到1（對照組）、2組、3組和4組蛋雞飼料的基礎(chǔ)日糧中，基礎(chǔ)日糧為玉米一豆粕型，試驗(yàn)期為42 d。

基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）：玉米（63.7%）、豆粕（24.5%）、貝殼粉（2%）、石粉（4.5%）、食鹽（0.3%）、預(yù)混料（5%）、賴氨酸（0.93%）、蛋氨酸（0.35%）、蛋氨酸十胱氨酸（0.63%）、粗蛋白質(zhì)（16.85%）、鈣（3.64%）、總磷（0.61%）和非植酸磷（0.39%）。

預(yù)混料為每千克飼料提供8 000 IU維生素A、2 000 IU維生素D、20 IU維生素E、1.5 mg維生素K3、2 mg維生素B.、6 mg維生素B2、8 mg泛酸、30 mg煙酸、0.2 mg生物素、0.5 mg葉酸、0.01 mg維生素B12、60 mg鐵、10 mg銅、70 mg鋅、80 mg錳、0.5 mg碘和0.24 mg硒。

1.3測定方法

1.3.1沙棘籽渣粗蛋白、蛋白酶、纖維素酶含量和氨基酸總量測定方法

粗蛋白用定氮儀（瑞典特卡托，F(xiàn)OSS-2300）測定;按中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB-T28715-2012測定蛋白酶含量;氨基酸用全自動氨基酸分析儀（L-8900，日本日立）測定;按中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)NY/T912 2004測定纖維素酶含量。

1.3.2生產(chǎn)性能指標(biāo)

料蛋比=試驗(yàn)期內(nèi)耗飼料總量/試驗(yàn)期產(chǎn)蛋總重×100%。

產(chǎn)蛋率=總產(chǎn)蛋數(shù)/蛋雞數(shù)×100%。

破軟蛋率=（破蛋總數(shù)+軟蛋總數(shù)）/產(chǎn)蛋總數(shù)×100%。

平均蛋重=產(chǎn)蛋總重/產(chǎn)蛋數(shù)×100%。

1.3.3腸道菌群的測定

試驗(yàn)結(jié)束后，每個平行樣品隨機(jī)選1羽雞，屠宰后用細(xì)線緊緊扎住回腸和盲腸入口處，然后取下盲腸，測定內(nèi)容物中大腸桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌的含量。

在超凈臺中，取0.5 g內(nèi)容物置于無菌試管內(nèi)，加入無菌水4.5 mL，振蕩20 min混合均勻，再取0.5 mL混合液，加4.5 mL滅菌的生理鹽水，依此做四個濃度梯度：10^-1、10^-2、10^-3和10^-4。將不同梯度的稀釋液分別接種于相應(yīng)的選擇性培養(yǎng)基上，檢測4個稀釋梯度，做3個平行樣，培養(yǎng)24 h，溫度37℃，用CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)乳酸桿菌和雙歧桿菌48 h，細(xì)菌數(shù)量采用平板菌落計(jì)數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，菌落在30～300個為宜，單位為CFU/g。

1.4飼養(yǎng)管理

采用籠養(yǎng)，光照16 h/d，雞舍內(nèi)光照、溫度和濕度按養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)控制，舍內(nèi)保持清潔衛(wèi)生，自由采食和飲水，按照一般程序進(jìn)行免疫、飼養(yǎng)管理。

1.5數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)分析使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，用“平均值（x）±標(biāo)準(zhǔn)差（SD）”表示分析結(jié)果。

2結(jié)果與分析

2.1發(fā)酵后沙棘籽渣中粗蛋白、蛋白酶、纖維素酶含量和氨基酸總量變化

由表1可見，與對照組相比，經(jīng)黑曲霉發(fā)酵后的沙棘籽渣粗蛋白和蛋白酶含量增加顯著（P<0.05），分別增加了7. 11%、705. 56%;纖維素酶含量和氨基酸總量有所下降，但無顯著差異。黑曲霉是食品工業(yè)上重要的發(fā)酵用菌，可產(chǎn)生蛋白酶、淀粉酶、果膠酶等。本試驗(yàn)中沙棘籽渣經(jīng)黑曲霉發(fā)酵后，各樣品粗蛋白含量與對照樣品中粗蛋白含量相比較，都有顯著提高，這可能與黑曲霉本身含有的菌體蛋白有關(guān)，這和已有的研究結(jié)果基本一致，可能是由于黑曲霉可以將樣品中的非蛋白氮轉(zhuǎn)化成蛋白氮，從而提高了粗蛋白含量。

2.2發(fā)酵后沙棘籽渣對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可見，與1組（對照組）相比，2組、3組、4組產(chǎn)蛋率和平均蛋重分別提高4. 60%、6.68%、6. 19%和3.61%、4.11%、5.41%，均有顯著差異（P<0.05）;與1組相比，2組、3組和4組料蛋比和破蛋率無顯著差異。沙棘的果實(shí)中含有多種活性成分，其中黃酮類有20多種，酯類有20多種，維生素類有10多種及多種甾體類化合物，發(fā)酵沙棘籽渣也含有豐富生物活性物質(zhì)，對促進(jìn)動物生長及提高生產(chǎn)性能有明顯促進(jìn)作用，比如黃酮類物質(zhì)可促進(jìn)母雞激素的分泌，促進(jìn)產(chǎn)蛋率提升;多酚類化合物可以提升飼料的營養(yǎng)價值及動物的生產(chǎn)性能。本試驗(yàn)表明，飼料添加發(fā)酵沙棘籽渣可提升蛋雞的平均蛋重及產(chǎn)蛋率，降低破（軟）蛋率及料蛋比，說明發(fā)酵后沙棘籽渣對飼料的轉(zhuǎn)化率有一定的改善作用。

2.3發(fā)酵后沙棘籽渣對蛋雞腸道菌群的影響

由表3可見，與1組相比，2組、3組和4組盲腸大腸桿菌數(shù)量（單位為CFU/g）分別減少10. 66%、6. 23%、4.67%（P<0.01）;3、4組沙門氏菌數(shù)量（單位為CFU/g）與1組相比，分別降低11. 04%、9.68%，有極顯著降低（P<0. 01）;3組樣品添加0.8%的發(fā)酵后沙棘籽渣，盲腸雙歧桿菌數(shù)量與1組相比極顯著提高（P<0. 01）;2組、3組和4組乳酸桿菌數(shù)量與對照組相比無差異（P>0.05）。畜禽類動物腸道內(nèi)有多種細(xì)菌構(gòu)成的腸道菌群，這些細(xì)菌包括有益于宿主健康的有益菌，也包括對動物健康產(chǎn)生危害的有害菌（如致病性大腸桿菌和沙門氏菌）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加發(fā)酵沙棘籽渣能夠極顯著增加雙歧桿菌的含量，降低大腸桿菌和沙門氏菌的含量，調(diào)節(jié)腸道微生物菌群的平衡，促進(jìn)腸道有益細(xì)菌的生長，改善腸道微生物菌群的結(jié)構(gòu)，這和沙棘果渣對腸道微生物菌群的調(diào)節(jié)和促進(jìn)腸道有益細(xì)菌的生長的研究結(jié)果基本一致。結(jié)果表明，蛋雞日糧中添加0.8%的發(fā)酵后沙棘籽渣腸道菌群結(jié)構(gòu)較佳。

3結(jié)論

采用黑曲霉作為發(fā)酵菌，在35℃環(huán)境下，按照接種量5%，料液比80%的條件進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)，并對發(fā)酵產(chǎn)物的粗蛋白、蛋白酶、纖維素酶含量和氨基酸總量進(jìn)行檢測。試驗(yàn)結(jié)果表明，沙棘籽渣經(jīng)黑曲霉發(fā)酵后，粗蛋白含量和蛋白酶含量顯著提高。說明黑曲霉發(fā)酵可以提高沙棘籽渣的飼料價值，并可以作為飼料原料加以利用。

日糧中添加發(fā)酵后的沙棘籽渣，與對照組相比，可提高蛋雞的產(chǎn)蛋率和平均蛋重，降低料蛋比和破（軟）蛋率，對飼料轉(zhuǎn)化率有一定的改善作用，還可優(yōu)化腸道中的菌群結(jié)構(gòu)。試驗(yàn)結(jié)果表明，蛋雞日糧中添加0.8%的發(fā)酵后沙棘籽渣效果較佳。