黃君君　馬香　唐鴻倩　劉柱　唐燕瓊

摘 要 香蕉枯萎病嚴(yán)重危害香蕉產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。本研究從肽適體文庫(kù)中篩選獲得對(duì)香蕉枯萎病致病菌尖孢鐮刀菌有抑制作用的人工肽適體SNP-D4。通過(guò)構(gòu)建人工肽適體體外重組表達(dá)載體，獲得SNP-D4體外重組蛋白。結(jié)果表明，通過(guò)抑菌活性檢測(cè)表達(dá)人工肽適體SNP-D4的大腸桿菌全蛋白提取液，能夠特異性抑制尖孢鐮刀菌孢子的萌發(fā)，使其萌發(fā)率降低至19.60%。本研究篩選得到的人工肽適體SNP-D4可應(yīng)用于研發(fā)環(huán)境友好型特異抗真菌生物制劑，為香蕉枯萎病防治提供新的技術(shù)手段。

關(guān)鍵詞 香蕉枯萎?。浑倪m體；尖孢鐮刀菌；載體構(gòu)建；抑菌活性

中圖分類(lèi)號(hào) S46 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

Abstract Banana fusarium wilt was a serious disease which causes great damages to banana-developing industries. Fusarium oxysporum f. sp. cubense FOC4 was considered as the essential pathogen. In this study， the artificial pepaptamer SNP-D4 was identified from our created pepaptamers library for the inhibition of Fusarium oxysporum f. sp. cubense FOC4. The recombinant expression vector SNP-D4 was constructed and expressed. The results of antifungal activity test revealed that the total protein extract of Escherichia coli containing SNP-D4 expression could specifically inhibite up to 19.60% of the germination rate for F. oxysporum FOC4. Collectively， our present study implied that the artificial pepaptamer SNP-D4 could be applied to develop environment-friendly biological agents for the control of specific fungal disease， offering a new technique for the prevention and control of banana fusarium wilt.

Key words banana fusarium wilt；pepaptamers；Fusarium oxysporum；vector construction；antifungal activity

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2018.05.022

香蕉枯萎病是一種侵染香蕉植株維管束的真菌引起的土傳病。由尖孢鐮刀菌古巴專(zhuān)化型（Fusarium oxysporum f. sp. cubense，F(xiàn)OC）真菌侵染香蕉根部引起的土傳維管束病害[1]，難以根治，對(duì)香蕉產(chǎn)業(yè)造成了毀滅性危害[2]。其中尖孢鐮刀菌4號(hào)生理小種（Fusarium oxysporum f. sp. cubense tropical race 4，F(xiàn)OC4）的毒力和致病能力都遠(yuǎn)超其他生理小種[3]，且具有極強(qiáng)的抗逆性，可在土壤中存活20 a之久[4]，會(huì)常造成大面積毀園[5]，是威脅我國(guó)香蕉產(chǎn)業(yè)的主要因素之一。尖孢鐮刀菌以菌絲體、大型分生孢子和小型分生孢子的形式附著于根系表皮細(xì)胞[6]，通過(guò)分泌一系列毒素破壞根系的膜結(jié)構(gòu)，造成植株代謝紊亂[7]，感染后期可直接侵染植株維管束，導(dǎo)致維管束木質(zhì)化[8]。目前，對(duì)香蕉枯萎病仍缺乏有效的防護(hù)措施[9]，相關(guān)的防治研究主要集中在化學(xué)農(nóng)藥篩選方面，也有部分研究者尋找有效的生物防治手段[10]。

肽適體（peptide aptamer或pepaptamers）是一種篩選自人工合成的隨機(jī)氨基酸文庫(kù)，可高特異性、高親和力結(jié)合靶標(biāo)蛋白質(zhì)的短肽[11]。其主要結(jié)構(gòu)包括一段結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的支架蛋白（scaffold protein）和兩端固定在支架蛋白上的可變肽段[12]（圖1），其中的可變肽段通常由8～20個(gè)氨基酸組成，具有識(shí)別和結(jié)合特異靶蛋白的能力。人工肽適體的篩選和應(yīng)用是目前生物抗菌劑研發(fā)的熱點(diǎn)，其具有以下3個(gè)方面優(yōu)勢(shì)：第一，靶標(biāo)特異性極高，可以區(qū)分同一蛋白家族的不同成員；其二，分子量較抗體小，但對(duì)靶蛋白的識(shí)別與結(jié)合能力與抗體相當(dāng)；其三，體內(nèi)可折疊為穩(wěn)定的三級(jí)構(gòu)象，與一般的游離氨基酸相比更有利于保持較高生物學(xué)活性[13]。

目前肽適體在腫瘤治療[14]、食品安全[15]、植物生物技術(shù)[16]等方面中的巨大潛力已被發(fā)現(xiàn)[17]。在植物病害防治中的應(yīng)用主要是作為植物病毒的干擾劑，通過(guò)阻斷病毒感染周期的特定環(huán)節(jié)阻礙病毒感染植物[18]。Rudolph等[19]以番茄斑萎病毒的核衣殼為靶標(biāo)篩選到肽適體，轉(zhuǎn)化煙草Nicotiana benthamiana中，使其同時(shí)對(duì)番茄斑萎病毒 （TSWV）、番茄退綠葉斑病毒（TCSV）， 花生環(huán)斑病毒 （GRSV）， 菊花莖部壞疽病毒（CSNV）等產(chǎn)生抗性。

利用肽適體防治植物真菌病害的研究還有待開(kāi)拓。本實(shí)驗(yàn)室前期以改造的葡萄球菌核酸酶（Staphylococcal Nuclease，SNase，下文簡(jiǎn)稱(chēng)SN）為支架蛋白，將可編碼16個(gè)隨機(jī)氨基酸的文庫(kù)DNA插入SNase中，獲得系列質(zhì)粒pTRG-SNase-peptide（簡(jiǎn)稱(chēng)pTRG-SNP，后文中SNase-peptide均縮寫(xiě)為SNP），構(gòu)成一個(gè)庫(kù)容量約為1.5～2.0×107 的肽適體文庫(kù)，同時(shí)構(gòu)建了僅表達(dá)肽適體支架蛋白的pTRG-SN質(zhì)

粒[20]。本研究通過(guò)尖孢鐮刀菌孢子萌發(fā)試驗(yàn)，直接篩選肽適體文庫(kù)，獲得能夠特異性抑制尖孢鐮刀菌的人工肽適體SNP-D4，通過(guò)體外表達(dá)SNP-D4并進(jìn)行抑菌活性檢測(cè)，證明人工肽適體SNP-D4能夠特異性抑制尖孢鐮刀菌孢子的萌發(fā)。本研究的結(jié)果為研發(fā)抗尖孢鐮刀菌的生物抗菌劑提供了新思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株和病原菌 供試菌株：大腸桿菌reporter，大腸桿菌BL21（DE3）。病原菌：尖孢鐮刀菌熱帶四號(hào)小種（Fusarium oxysporum f. sp. cubense tropical race 4，F(xiàn)OC4）。以上菌株均由本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基：胰蛋白胨1.0 g，酵母提取物0.5 g，NaCl 0.5 g，蒸餾水100 mL， pH 7.0，121 ℃滅菌20 min； LB固體培養(yǎng)基：在LB液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加瓊脂糖1.5 g即成，pH 7.0，121 ℃滅菌20 min；0.3%營(yíng)養(yǎng)液：葡萄糖0.3 g，酵母提取物0.3 g，胰蛋白胨0.03 g，蒸餾水100 mL，pH 7.0，121 ℃滅菌20 min。

1.2 方法

1.2.1 肽適體文庫(kù)的篩選 將肽適體文庫(kù)轉(zhuǎn)入制備好的大腸桿菌reporter感受態(tài)細(xì)胞中，分離單菌落并使用特異性引物F1和R1驗(yàn)證，之后分別保存菌種。將保存的菌株分別接種至5 mL含四環(huán)素（Tet，終濃度50 μg/mL）的LB液體培養(yǎng)基中，37 ℃，150 r/min搖床過(guò)夜；按1%接種量將菌液接種至20 mL的LB液體培養(yǎng)基（含Tet，終濃度50 μg/mL）中，加入異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（Isopropyl β-D-1-Thiogalactopyranoside，簡(jiǎn)稱(chēng)IPTG，終濃度100 μmol/L），15 ℃，150 r/min誘導(dǎo)過(guò)夜。收集菌體，用4 mL 50 mmol/L磷酸緩沖溶液（Phosphate Buffered Saline，簡(jiǎn)稱(chēng)PBS）懸浮，進(jìn)行超聲破碎。超聲5 s，間隙6 s，功率35%，共20 min。收集上清，即細(xì)菌全蛋白提取液。將10 μL轉(zhuǎn)入pTRG-SNP載體的reporter菌株細(xì)菌全蛋白提取液、10 μL 4×106個(gè)/mL尖孢鐮刀菌孢子懸液、10 μL 0.3%營(yíng)養(yǎng)液混勻，同時(shí)以PBS處理作為空白對(duì)照，轉(zhuǎn)入pTRG-SN載體的reporter菌株的細(xì)菌全蛋白提取液作為陰性對(duì)照，0.3%惡霉靈處理作為陽(yáng)性對(duì)照，不同處理組均在28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)12 h后于光學(xué)顯微鏡40×物鏡下觀(guān)察孢子萌發(fā)情況。

1.2.2 功能性肽適體的鑒定 將篩選到的菌株劃線(xiàn)活化，37 ℃培養(yǎng)過(guò)夜。每種菌株挑選3個(gè)單菌落，再次劃線(xiàn)活化，37 ℃培養(yǎng)過(guò)夜；挑單菌落于5 mL LB液體培養(yǎng)基（含Tet，終濃度50 μg/mL）中，37 ℃ 250 r/min培養(yǎng)過(guò)夜；提取質(zhì)粒并測(cè)序。

1.2.3 重組載體構(gòu)建 利用目的片段特異性引物F2/R2擴(kuò)增肽適體SNP-D4以及肽適體支架蛋白SN核苷酸序列，利用PCR產(chǎn)物回收試劑盒回收目的片段。將上述目的片段及pET28a空載體分別用限制性?xún)?nèi)切酶Nco I和Xho I進(jìn)行雙酶切，之后回收酶切產(chǎn)物。將上述酶切產(chǎn)物用T4連接酶連接，得到連接產(chǎn)物。

1.2.4 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化和陽(yáng)性克隆子鑒定 將連接產(chǎn)物通過(guò)熱激法轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞，之后涂布到含卡那霉素（Kan，終濃度50 μg/mL）的LB固體培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)過(guò)夜。之后挑取陽(yáng)性克隆子，分別使用載體特異性引物F2/R2和目的片段特異性引物F3/R3進(jìn)行PCR驗(yàn)證。最后將經(jīng)驗(yàn)證的陽(yáng)性克隆提取質(zhì)粒并測(cè)序。

1.2.5 重組蛋白的表達(dá) 將構(gòu)建重組載體陽(yáng)性克隆接種至5 mL LB液體培養(yǎng)基（含Kan，終濃度50 μg/mL），37 ℃，150 r/min搖床過(guò)夜；將活化的菌液按1%接種量接種至50 mL的LB液體培養(yǎng)基（含Kan，終濃度50 μg/mL）中；加入IPTG （終濃度100 μmol/L），15 ℃，150 r/min誘導(dǎo)過(guò)夜。

1.2.6 抑菌試驗(yàn) 通過(guò)上述方法誘導(dǎo)重組菌株大量表達(dá)外源蛋白SN和SNP-D4之后，之后采用超聲波破碎獲得細(xì)菌全蛋白提取液，采用BCA法（使用GENEray公司的BCA法蛋白定量試劑盒）測(cè)定全蛋白濃度。將細(xì)菌全蛋白提取液蛋白濃度均稀釋至30 mg/mL，將10 μL細(xì)菌全蛋白提取液、10 μL 4×106個(gè)/mL尖孢鐮刀菌孢子懸液、10 μL 0.3%營(yíng)養(yǎng)液混勻，同時(shí)以PBS處理組為空白對(duì)照，3組處理均在28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)12 h后，在光學(xué)顯微鏡40×物鏡下觀(guān)察孢子萌發(fā)情況，每組取3個(gè)不同的視野，觀(guān)察并統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率。萌發(fā)率=萌發(fā)孢子數(shù)/總孢子數(shù)×100%。重復(fù)3次取平均值。

1.3 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用SAS 9.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 肽適體文庫(kù)篩選

從肽適體文庫(kù)中分離鑒定得到32個(gè)肽適體單克隆。初步抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在32個(gè)肽適體單克隆中，發(fā)現(xiàn)5種肽適體對(duì)尖孢鐮刀菌孢子具有抑制作用，其中SNP-D4效果最佳。從圖2中可看出，在相同處理時(shí)間下，PBS處理組與轉(zhuǎn)入pTRG-SN載體的reporter菌株的細(xì)菌全蛋白提取液處理組的孢子幾乎全部萌發(fā)，形成明顯的菌絲體，出現(xiàn)菌絲結(jié)團(tuán)現(xiàn)象，說(shuō)明PBS與轉(zhuǎn)入pTRG-SN載體的reporter菌株的細(xì)菌全蛋白提取液對(duì)孢子的萌發(fā)不具抑制作用，而SNP-D4處理組的孢子大多數(shù)未萌發(fā)，少數(shù)萌發(fā)的孢子的菌絲長(zhǎng)度明顯短于陰性對(duì)照組，并未出現(xiàn)菌絲結(jié)團(tuán)現(xiàn)象，其抑制效果幾乎與0.3%惡霉靈處理組相當(dāng)，說(shuō)明SNP-D4本身對(duì)孢子的萌發(fā)具有一定抑制作用。

紅色圓圈標(biāo)記的為未萌發(fā)的孢子，紅色箭頭標(biāo)記的為萌發(fā)受到抑制的孢子。

為了確定具有孢子萌發(fā)抑制活性的SNP-D4的序列信息，提取表達(dá)SNP-D4的質(zhì)粒并測(cè)序，得到SNP-D4全長(zhǎng)576 bp，編碼191個(gè)氨基酸，整體蛋白分子量大小為21 ku（圖3）。其編碼的可變肽段序列為共16個(gè)氨基酸（圖3中紅色邊框標(biāo)記的部分）。

2.2 人工肽適體SNP-D4原核表達(dá)載體構(gòu)建

通過(guò)菌落PCR驗(yàn)證陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子擴(kuò)增結(jié)果如圖4所示，表達(dá)SN的候選菌落使用2種引物擴(kuò)增分別獲得724、537 bp的單一條帶，表達(dá)SNP-D4的候選菌落使用2種引物擴(kuò)增分別獲得769、582 bp的單一條帶，而且PCR產(chǎn)物單一，無(wú)其他雜帶或污染，符合預(yù)期。提取重組質(zhì)粒并測(cè)序，將測(cè)序結(jié)果與SN和SNP-D4的核酸序列進(jìn)行比對(duì)，序列一致，表明已經(jīng)成功構(gòu)建可外源表達(dá)SN和SNP-D4的重組載體。

2.3 外源表達(dá)人工肽適體SNP-D4抑菌效果評(píng)估

通過(guò)抑菌實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證外源表達(dá)人工肽適體SNP-D4的抑菌效果，孢子萌發(fā)率統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)圖5。從圖5可見(jiàn)，用表達(dá)人工肽適體SNP-D4的細(xì)菌全蛋白提取液處理時(shí)，尖孢鐮刀菌孢子萌發(fā)率僅為19.60%，與之相比，用PBS處理時(shí)的萌發(fā)率為78.33%，二者之間差異極顯著（p<0.01），用肽適體支架蛋白SN的細(xì)菌全蛋白提取液處理時(shí)，孢子萌發(fā)率為72.10%，與空白對(duì)照PBS并未有顯著差異，表明本研究所篩選的人工肽適體SNP-D4能夠特異性抑制尖孢鐮刀菌的孢子萌發(fā)。另外肽適體支架蛋白SN對(duì)尖孢鐮刀菌的孢子萌發(fā)沒(méi)有顯著影響，說(shuō)明發(fā)揮抑菌功能的是肽適體SNP-D4的可變肽段部分。

3 討論

香蕉枯萎病是香蕉產(chǎn)業(yè)的重要真菌病害之一，長(zhǎng)期以來(lái)都引起人們的高度重視。目前可以用于防治香蕉枯萎病的化學(xué)藥劑包括惡霉靈、多菌靈[21]等。Borges 等[22]在枯萎病菌侵染前用甲萘醌亞硫酸氫鈉（一種維生素K）處理香蕉苗，發(fā)現(xiàn)處理后的香蕉苗中，植物抗毒素快速且大量合成，能夠延緩枯萎病癥狀的發(fā)生。但是，化學(xué)藥劑有效成分難以分離和鑒定，而且通常價(jià)格昂貴，并且化學(xué)藥劑的大量使用存在污染環(huán)境等問(wèn)題。生物防治方面的研究主要包括篩選拮抗菌[23]、農(nóng)作物間作及輪作[24]等，其中拮抗菌是一種非常重要的防治手段。李載淵等[25]通過(guò)生長(zhǎng)對(duì)峙實(shí)驗(yàn)從五指山原始林區(qū)采集的土樣中選擇性分離得到702 株稀有放線(xiàn)菌，最終經(jīng)過(guò)復(fù)篩，獲得一株對(duì)尖孢鐮刀菌具有高活性的拮抗菌210-1-61。但是，拮抗菌也存在抑菌機(jī)理不清楚，以及破壞土壤微生物生態(tài)平衡等問(wèn)題。因此，為了有效防止尖孢鐮刀菌引起的香蕉枯萎病，仍需要探索新型、環(huán)保的有效技術(shù)手段。

肽適體作為一種新型生物材料，被廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)方面，而其在生物農(nóng)藥方面主要是用作抗病毒制劑[26]。針對(duì)特定的生理功能分析，如病毒DNA復(fù)制復(fù)合體組裝等[27]，是通過(guò)篩選特定病毒靶標(biāo)具有高特異性的肽適體，達(dá)到干擾病毒功能的作用。本研究首次嘗試將肽適體應(yīng)用于抑制尖孢鐮刀菌，成功篩選到能夠特異性抑制香蕉枯萎病致病菌尖孢鐮刀菌的肽適體，并獲得其外源表達(dá)蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，含有外源表達(dá)人工肽適體SNP-D4的細(xì)菌全蛋白提取液可將FOC4的孢子萌發(fā)率降低至19.60%，而人工肽適體的支架蛋白并未對(duì)孢子萌發(fā)率有顯著影響（處理后萌發(fā)率為72.10%），說(shuō)明發(fā)揮抑菌功能的為人工肽適體SNP-D4可變肽段部分的16個(gè)氨基酸。綜上所述，人工肽適體SNP-D4能夠特異性抑制尖孢鐮刀菌孢子萌發(fā)，具有作為一種新型生物農(nóng)藥的潛力。

參考文獻(xiàn)

[1] Poetz R C. Fusarium wilt of banana is caused by several pathogens referred to as Fusarium oxysporum f. sp. cubense[J]. Phytopathology，2006，96（6）：653-656.

[2] 周紅玲，陳 石，鄭加協(xié). 香蕉抗枯萎病機(jī)理的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)園藝文摘，2013（1）：55-57.

[3] Molina A B，F(xiàn)abregar E，Sinohin V G，et al. Recent occurrence of Fusarium oxysporum f. sp. cubense tropical race 4 in Asia[J]. Acta Hort，2009（828）：109-116.

[4] 林祖興，陳 騰. 海南香蕉鐮刀菌枯萎病綜合防治措施[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2007（3）：46-48.

[5] 黎永堅(jiān)，于 莉. 香蕉枯萎病發(fā)病機(jī)制及其防治技術(shù)研究[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006，22（8）：515-519.

[6] 殷曉敏，徐碧玉，鄭 雯，等. 香蕉枯萎病菌侵染香蕉根系的組織學(xué)過(guò)程[J]. 植物病理學(xué)報(bào)，2011，41（6）：570-575.

[7] 許文耀，兀旭輝，林成輝. 香蕉枯萎病菌粗毒素的毒性及其模型[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)，2004，25（4）：25-29.

[8] De Ascensao A R，Dubery I A. Panama disease： cell wall reinforcement in banana roots in response to elicitors from Fusarium oxysporum f. sp. cubense race four[J]. Phytopathology，2000，90（10）：1 173-1 180.

[9] Guo L J，Han L J，Yang L Y，et al. Genome and transcriptome analysis of the fungal pathogen Fusarium oxysporum f. sp cubense causing banana vascular wilt disease[J]. PLoS One，2014，9（4）： e73945.

[10] 孫 勇，曾會(huì)才，彭 明，等. 香蕉枯萎病致病分子機(jī)理與防治研究進(jìn)展[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)，2012，33（4）：759-766.

[11] Hopper S F，Crnkovic M I，Tomai E，et al. Peptide aptamers： specific inhibitors of protein function[J]. Curr MolMed，2004，4（5）：529-538.

[12] Groner B，Borghouts C，Kunz C. Peptide aptamer libraries[J]. Comb Chem High Throughput Screen，2008，11（2）：135-145.

[13] 江 麗，蘭小鵬. 適體家族新成員——肽適體[J]. 中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)，2009，25（2）：99-103.

[14] Butz K， Denk C， Ullmann A，et al. Induction of apoptosis in human papillomavirus-positive cancer cells by peptide aptamers targeting the viral E6 oncoprotein[J]. Proc Natl Acad Sci USA，2000，97（12）：6 693-6 697.

[15] Dong Y Y，Xu Y，Yong W，et al. Aptamer and its potential applications for food safety[J]. Critical Reviews in Food Science and Nutrition，2014，54（12）：1 548-1 561.

[16] Gong P C，Quan H，He C Y. Targeting MAGO proteins with a peptide aptamer reinforces their essential roles in multiple rice developmental pathways[J]. The Plant Journal，2014，80（5）：905-914.

[17] Colombo M，Mizzotti C，Masiero S，et al. Peptide aptamers： The versatile role of specific protein function inhibitors in plant biotechnology[J]. Journal of Integrative Plant Biology，2015，57（11）：892-901.

[18] Sera T. Use of peptide aptamers， cationic peptides and artificial zinc finger proteins to generate resistance to plant viruses[J]. Curr Opin Virol，2017，26：120-124.

[19] Rudolph C，Schreier P H，Uhrig J F. Peptide-mediated broad-spectrum plantresistance to tospoviruses[J]. Proc Natl Acad Sci USA，2003，100（8）：4 429-4 434.

[20] Liu P，Chen Y，Wang D，et al. Genetic selection of peptide aptamers that interact and inhibit both small protein B and alternative ribosome-rescue factor A of Aeromonas veronii C4[J]. Frontiers in Microbiology，2016，7：1228.

[21] 李 赤，于 莉，陳永欽，等. 9種殺菌劑對(duì)香蕉枯萎病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定[J]. 中國(guó)南方果樹(shù)，2008，37（2）：44-45.

[22] Borges A A，Borges-Perez A，F(xiàn)ernandez-Falcon M. Effect of menadione sodium bisulfite： an inducer of plant defenses on the dynamic of banana phytoalexin accumulation during pathogenesis[J]. J Agric Food Chem，2003，51（18）：5 326-5 328.

[23] 張妙宜，陳志杰，陳宇豐，等. 1株拮抗細(xì)菌的分離鑒定及其對(duì)香蕉枯萎病等病原菌的抑制活性測(cè)定[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)，2017，38（11）：2 151-2 159.

[24] 辛 侃，趙 娜，鄧小墾，等. 香蕉-水稻輪作聯(lián)合添加有機(jī)物料防控香蕉枯萎病研究[J]. 植物保護(hù)，2014，40（6）： 36-41.

[25] 李載淵，廖東奇，陳漢清，等. 一株拮抗香蕉枯萎鐮刀菌稀有放線(xiàn)菌的分離及鑒定[J]. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2010，29（2）：303-309.

[26] Lopez-Ochoa L，Ramirez-Prado J，Hanley-Bowdoin L. Peptide aptamers that bind to a geminivirus replication protein interfere with viral replication in plant cells[J]. Journal of Virology，2006，80（12）：5 841-5 853.

[27] Reyes M I，Nash T E，Dallas M M，et al. Peptide aptamers that bind to geminivirus replication proteins confer a resistance phenotype to tomato yellow leaf curl virus and tomato mottle virus infection in tomato[J]. Journal of Virology，2013，87（17）：9 691-9 706.