程有普

摘要 [目的]篩選防治葡萄霜霉病的有效藥劑。[方法]采用葉盤漂浮法測定6種殺菌劑對葡萄霜霉病菌的室內(nèi)毒力，并對其進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)。[結(jié)果] 6種殺菌劑對葡萄霜霉病菌的EC50在0.325～5.256 μg/mL；3次施藥后7 d平均防效在84.07%～93.10%，其中30%吡唑醚菌酯WG、22.5%啶氧菌酯SC和50%氟醚菌酰胺WG的防效超過90%。[結(jié)論] 6種殺菌劑能較好地防治葡萄霜霉病，30%吡唑醚菌酯WG、22.5%啶氧菌酯SC和50%氟醚菌酰胺WG的防效較高，可在生產(chǎn)上進(jìn)一步推廣使用。

關(guān)鍵詞 葡萄霜霉?。欢玖?；防效；殺菌劑

中圖分類號 S482.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2018）02-0109-03

Abstract [Objective] The study aimed to screen out effective fungicides for control of grape downy mildew.[Method] Toxicity of six kinds of fungicides was determined by using leaf disc method and efficacy of the fungicides was tested by field trials.[Result] The EC50 values of the six fungicides to Plasmopara viticola were in the range of 0.325-5.256 μg/mL，and the average control efficacy of the fungicides ranged from 84.07% to 93.10% at the 7th day after the third spraying.The control efficacy of 30% Pyraclostrobin WG，22.5% picoxystrobin SC，and 50% LH-2010A WG were all above 90%.[Conclusion] The six tested fungicides are all effective against the grape downy mildew.30% pyraclostrobin WG，22.5% picoxystrobin SC and 50% LH2010A WG with high control efficacy，can be further popularized in agricultural production.

Key words Grape downy mildew；Toxicity；Efficacy；Fungicide

葡萄霜霉病是葡萄各產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生的一種病害[1]。該病主要為害葡萄葉片，引起葉片干枯早落，降低樹勢，嚴(yán)重影響葡萄的產(chǎn)量及品質(zhì)，降低植株的抗寒性。在每年的多雨潮濕季節(jié)，該病發(fā)生尤為嚴(yán)重[2]。化學(xué)防治一直是葡萄生產(chǎn)中防治霜霉病病的重要手段，許多內(nèi)吸殺菌劑因其良好的治療作用得以廣泛使用，但內(nèi)吸殺菌劑對病原菌的作用位點(diǎn)往往比較單一，長期大量頻繁地使用，抗藥性問題較為突出[3-5]，并且產(chǎn)生的抗性有可能被穩(wěn)定遺傳[6-7]。同時(shí)，由于抗性的產(chǎn)生，人們加大農(nóng)藥使用量所帶來的污染、藥害等問題不容樂觀[8-9]。因此，生產(chǎn)中迫切需要篩選出適于本地的高效殺菌劑，了解其藥效及安全使用技術(shù)。筆者研究了6種內(nèi)吸殺菌劑對葡萄霜霉病菌的室內(nèi)毒力及田間藥效，旨在為生產(chǎn)中有效防控葡萄霜霉病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試藥劑。

60%醚菌酯WG（海南博士威農(nóng)用化學(xué)有限公司）、50%烯酰嗎啉WP（河北冠龍農(nóng)化有限公司）、30%吡唑醚菌酯WG（陜西美邦農(nóng)藥有限公司）、50%氟醚菌酰胺WG（山東省聯(lián)合農(nóng)藥工業(yè)有限公司）、66.5%霜霉威鹽酸鹽AS（天津市施普樂農(nóng)藥技術(shù)發(fā)展有限公司）、22.5%啶氧菌酯SC（美國杜邦公司）。6種原藥（95%醚菌酯、95%烯酰嗎啉、98%吡唑醚菌酯、98%氟醚菌酰胺、96%霜霉威鹽酸鹽、97%啶氧菌酯）由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所提供。

1.1.2 試驗(yàn)材料。

葡萄霜霉病菌[Plasmopara viticola（Berk.et Curtis） Berl.et de Toni]采自天津農(nóng)學(xué)院西校區(qū)葡萄試驗(yàn)田，采集新鮮、癥狀典型、葉背霉層量大的病葉供試驗(yàn)用。

1.2 方法

1.2.1 室內(nèi)毒力測定。

用蒸餾水洗去病葉表面的孢子囊，然后將病葉置于培養(yǎng)箱中，18 ℃、飽和濕度、暗培養(yǎng)，促使新孢子囊產(chǎn)生。24 h后用潔凈軟毛筆將新孢子囊刷入無菌蒸餾水中，利用顯微鏡和Neubauer血球計(jì)數(shù)板，調(diào)節(jié)孢子囊懸浮液濃度為5×105個(gè)/mL，備用[10-11]。

采用葉盤漂浮法[12-14]測定6種殺菌劑對葡萄霜霉病菌的室內(nèi)毒力。原藥先用少量丙酮（霜霉威鹽酸鹽直接用水，烯酰嗎啉用二甲基甲酰胺）溶解，再加蒸餾水配成母液。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，將各原藥配成系列濃度藥液，倒入直徑9 cm的培養(yǎng)皿中，每皿20 mL，設(shè)蒸餾水對照，4次重復(fù)。取當(dāng)年無病葡萄枝條上第4～5位葉片，用打孔器打取直徑1.5 cm的葉盤，背面朝上放在培養(yǎng)皿藥液表面，15個(gè)葉盤/皿，每個(gè)葉盤中央接種20 μL孢子囊懸浮液。在18 ℃、16 h光照/8 h黑暗條件下培養(yǎng)6～8 d，當(dāng)對照葉盤發(fā)病均勻時(shí)調(diào)查發(fā)病情況。根據(jù)病斑面積占葉盤面積的百分率對病葉進(jìn)行分級：0級，無病斑；1級，5%以下；3級，6%～25%；5級，26%～50%；7級，51%～75%；9級，≥76%。計(jì)算病情指數(shù)和防治效果[15]。

利用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)，得出各殺菌劑對葡萄霜霉病菌的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)及抑制中濃度（EC50）。

1.2.2 田間藥效試驗(yàn)。

試驗(yàn)在天津農(nóng)學(xué)院西校區(qū)葡萄試驗(yàn)田內(nèi)進(jìn)行，葡萄品種為北紅葡萄，樹齡14年，籬架式栽培，株行距為1.0 m×1.5 m，砂質(zhì)壤土，管理較粗糙，每年都有葡萄霜霉病發(fā)生。試驗(yàn)共設(shè)7個(gè)處理，6種藥劑及其施用濃度見表2，設(shè)清水對照。隨機(jī)區(qū)組排列，4次重復(fù)，共28個(gè)小區(qū)，每小區(qū)8株葡萄，于葡萄霜霉病發(fā)病初期開始噴藥，噴藥器械為SX-LK16C型手動噴霧器，采用全株莖葉均勻噴霧法，噴藥液量為1 500 L/hm2。整個(gè)試驗(yàn)過程連續(xù)噴藥3次，噴藥間隔期為7～10 d，并于第1次噴藥前、第2次噴藥后7 d及第3次噴藥后7 d調(diào)查發(fā)病情況，每小區(qū)調(diào)查10枝新梢上的所有葉片，按照病斑面積占整葉面積的百分比，采用6級記載法對病葉進(jìn)行分級，計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 17.0軟件處理，用Duncans新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 6種殺菌劑對葡萄霜霉菌的室內(nèi)毒力 由表1可知，6種內(nèi)吸殺菌劑對葡萄霜霉病菌均表現(xiàn)出較高的抑菌活性，藥后6～8 d的EC50在0.325～5.256 μg/mL。其中，97%啶氧菌酯和98%吡唑醚菌酯的抑菌活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他4種殺菌劑，EC50分別為0.325、0.444 μg/mL，其活性超過了生產(chǎn)中防治霜霉病效果較好的95%烯酰嗎啉（EC50為3.227 μg/mL）。98%氟醚菌酰胺的抑制活性和95%烯酰嗎啉基本相當(dāng)，EC50為3.690 μg/mL。相比之下，96%霜霉威鹽酸鹽和95%醚菌酯的抑菌活性稍弱。從EC50來看，二者抑菌活性相近，但95%醚菌酯的EC90遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于96%霜霉威鹽酸鹽，說明95%醚菌酯對葡萄霜霉病菌的整體抑制效果比96%霜霉威鹽酸鹽差。

2.2 6種殺菌劑對葡萄霜霉病的田間防效

由表2可知，在葡萄霜霉病發(fā)病初期連續(xù)施藥3次，6種內(nèi)吸性殺菌劑均顯示出較好防效。其中，以30%吡唑醚菌酯WG的施用效果最佳，第2及第3次噴藥后7 d的平均防效均高于90%，防效高且穩(wěn)定，有效地控制了葡萄霜霉病的擴(kuò)展蔓延。22.5%啶氧菌酯SC、50%氟醚菌酰胺WG在第3次施藥后7 d的平均防效也超過90%，顯示出對該病具有較強(qiáng)的控病能力，上述3種藥劑在第3次施藥后7 d的防效無顯著差異。相比之下，60%醚菌酯WG對葡萄霜霉病的田間防效稍低，第2、第3次施藥后7 d的平均防效分別為82.13%和84.07%，極顯著低于前面3種殺菌劑的平均防效。考慮到30%吡唑醚菌酯WG、22.5%啶氧菌酯SC和50%氟醚菌酰胺WG對葡萄霜霉病的較高防效，可進(jìn)一步在生產(chǎn)上推廣使用。66.5%霜霉威鹽酸鹽AS和50%烯酰嗎啉WP防效相當(dāng)，略低于90%。總體來看，6種殺菌劑第3次藥后7 d的防效高于第2次藥后7 d的防效。

整個(gè)試驗(yàn)過程中，未觀察到供試藥劑對葡萄葉片及果穗產(chǎn)生任何藥害，說明試驗(yàn)劑量下6種殺菌劑對葡萄植株安全。

3 結(jié)論與討論

室內(nèi)毒力測定及田間藥效試驗(yàn)結(jié)果表明，供試的6種殺菌劑對葡萄霜霉病菌均有較高的抑菌活性，能在發(fā)病初期有效地控制葡萄霜霉病的發(fā)生。其中，吡唑醚菌酯抑菌活性強(qiáng)，防效高，發(fā)病初期連續(xù)噴施30%吡唑醚菌酯WG 1 500倍2～3次，防治效果超過90%，顯著高于同類型殺菌劑60%醚菌酯WG 2 800倍。其他4種殺菌劑在試驗(yàn)劑量下連續(xù)噴施2～3次，防效均在85%以上。

吡唑醚菌酯、啶氧菌酯和醚菌酯均為甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，通過結(jié)合真菌細(xì)胞線粒體bc1復(fù)合物上的QO位點(diǎn)，中斷電子傳遞，阻止ATP合成。3種殺菌劑由于化學(xué)結(jié)構(gòu)上的差異，在與Q0位點(diǎn)結(jié)合時(shí)，位置會略有不同，表現(xiàn)為3種同類藥劑抑菌活性不一[16]。這可能是該試驗(yàn)中吡唑醚菌酯和啶氧菌酯的抑菌活性顯著高于醚菌酯的一個(gè)重要原因。甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑作用機(jī)理獨(dú)特，與市場上銷售的其他類殺菌劑（如苯并咪唑類、二甲酰亞胺類、14-脫甲基化酶抑制劑、苯基酰胺類）無交互抗藥性[17]。氟醚菌酰胺是一種新型的含氟苯甲酰胺類殺菌劑，結(jié)構(gòu)式上的氟原子賦予其較高的抑菌活性，主要通過影響病原菌呼吸鏈電子傳遞系統(tǒng)抑制病菌生長[18]；霜霉威鹽酸鹽屬于氨基甲酸酯類殺菌劑，通過干擾卵菌細(xì)胞膜中磷脂和脂肪酸的生物合成，抑制菌絲生長、孢子囊形成以及萌發(fā)；烯酰嗎啉是嗎啉類專殺卵菌藥劑，通過干擾病菌細(xì)胞壁分子結(jié)構(gòu)重排，破壞細(xì)胞壁壁膜的形成[19]?？傊┰嚨?種藥劑隸屬于作用機(jī)制不同的4類殺菌劑，具有保護(hù)、內(nèi)吸、治療作用，對葡萄霜霉病防效高。若長期頻繁地使用同一種農(nóng)藥，很容易產(chǎn)生抗藥性。因此，生產(chǎn)中應(yīng)盡量將內(nèi)吸性殺菌劑與保護(hù)性殺菌劑混用或?qū)⒉煌饔脵C(jī)制且無交互抗藥性的內(nèi)吸殺菌劑混用或輪換使用，不僅能夠減緩抗性，還能達(dá)到兼治多種病害、延長持效期、減少施藥次數(shù)的目的。根據(jù)該試驗(yàn)結(jié)果，可考慮將吡唑醚菌酯或啶氧菌酯與氟醚菌酰胺、霜霉威鹽酸鹽、烯酰嗎啉等混用或輪換使用。

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