陳冬梅 李曉霞 孫劍峰 文立波

摘 要：為評估甘肅省豬瘟免疫效果，對2015-2017年甘肅省豬瘟免疫抗體水平進(jìn)行了監(jiān)測，三年中分別在甘肅各地州市種豬場、規(guī)模養(yǎng)豬場、散養(yǎng)戶和其他場地采集樣本共23 051份，采用阻斷酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-linked Immuno Sorbent Assay，ELISA）方法進(jìn)行監(jiān)測。結(jié)果表明：三年間甘肅省豬場豬瘟抗體總陽性率為79.04%：2015年場豬瘟抗體陽性率為78.96%，2016年豬瘟抗體陽性率為78.97%，2017年豬瘟抗體陽性率為79.19%。三年間種豬場豬瘟抗體陽性率均高于90%，規(guī)?；B(yǎng)豬場的豬瘟抗體陽性率達(dá)82%以上，散養(yǎng)戶豬瘟抗體陽性率只有73%，其他場地豬瘟抗體陽性率72%～78%。通過對近三年豬瘟抗體水平的監(jiān)測，為研究制定甘肅省豬瘟凈化策略，加強(qiáng)豬場防疫監(jiān)管提供了技術(shù)支持。

關(guān)鍵詞：甘肅??；豬瘟；抗體檢測；免疫效果

中圖分類號：S858.28 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1001-0769（2018）04-0067-04

豬瘟是由豬瘟病毒引起豬的一種急性、高熱性、高傳染性、高致死性疾病，對養(yǎng)豬業(yè)的危害極大，本病遍布全世界，世界動物衛(wèi)生組織將此病列為A類傳染病，是影響?zhàn)B豬業(yè)的頭號傳染病。就目前養(yǎng)豬生產(chǎn)條件和動物疫病控制水平看，豬瘟仍然是我國生豬生產(chǎn)的主要難題，豬瘟防治效果決定養(yǎng)豬的成敗。免疫接種是防治豬瘟的主要措施。因此，通過對免疫豬群進(jìn)行抗體水平檢測，及時(shí)掌握豬群的免疫水平，了解免疫狀況，建立科學(xué)的免疫程序，將對控制豬瘟的防控起著至關(guān)重要的作用。

1 材料方法

1.1 材料

1.1.1 被檢血清樣本

2015-2017年三年間從甘肅全省3 207個采樣點(diǎn)（種豬場51個、商品代豬場1 661個、散養(yǎng)戶1 354個、其他場點(diǎn)141個）共采集樣本23 051份。

1.1.2 試劑

豬瘟病毒抗體檢測試劑盒（CSFV-AB），由北京愛德士元亨生物科技有限公司提供。

1.2 檢測方法

1.2.1 檢測原理及方法

利用阻斷酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-linked Immuno Sorbent Assay，ELISA）原理來檢測豬血清或血漿中豬瘟病毒抗體，如果被檢樣本中存在豬瘟病毒抗體，它們就會阻斷辣根過氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRPO）標(biāo)記的抗豬瘟病毒的單克隆抗體。單克隆抗體與豬瘟病毒抗原的結(jié)合可以通過辣根過氧化物酶與底物的顯色程度進(jìn)行判定，即用酶標(biāo)儀在單波長450 nm或雙波長450 nm與620 nm測定該反應(yīng)體系的吸光度。當(dāng)被檢樣本中含有豬瘟病毒抗體（陽性結(jié)果）時(shí)，顯色就會變淺，當(dāng)被檢樣本中不含有抗豬瘟病毒抗體（陰性結(jié)果）時(shí)，顯色就會變深。樣本的阻斷率可以通過450 nm波長樣本吸光度與陰性對照吸光度的比值來確定。本實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照豬瘟抗體檢測試劑盒說明書操作。

1.2.2 判定標(biāo)準(zhǔn)

在陰、陽性對照血清成立的前提下，即當(dāng)陰性對照的平均OD450>0.50，陽性對照的阻斷率大于50%時(shí)，試驗(yàn)結(jié)果有效。如果被檢測樣本的阻斷率大于或等于40%，該樣本就可以判斷為陽性；如果被檢測樣本的阻斷率小于或等于30%，該樣本就可以判斷為陰性；如果被檢測樣本的阻斷率介于30%～40%之間，判為可疑，該樣本需數(shù)日后重新檢測。

2 結(jié)果與分析

2015-2017年在甘肅省進(jìn)行豬瘟免疫抗體水平監(jiān)測，三年中分別在各地州市種豬場、規(guī)模養(yǎng)豬場、散養(yǎng)戶和其他場地采集樣本共23 051份，豬瘟免疫抗體檢測結(jié)果見表1。

2.1 不同年份血清樣本抗體總陽性率比較

2015-2017年，對甘肅省進(jìn)行豬瘟免疫抗體水平監(jiān)測結(jié)果表明：2015-2017年三年間甘肅省豬場豬瘟抗體總陽性率為79.04%：2015年場豬瘟抗體陽性率為78.96%，2016年豬瘟抗體陽性率為78.97%，2016年豬瘟抗體陽性率為79.19%。豬瘟抗體總陽性率呈逐年上升的趨勢，均超國家規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)，表明甘肅省對豬場的豬瘟疫苗免疫情況較好，免疫效果達(dá)到較高水平（圖1）。

2.2 不同來源、不同年份樣本陽性率比較

2015-2017年在甘肅省各地州市采集豬血清樣本23 051份，用ELISA方法進(jìn)行豬瘟抗體檢測，結(jié)果顯示：2015-2017年甘肅省種豬場豬瘟抗體陽性率均高于90%，規(guī)模化養(yǎng)豬場的豬瘟抗體陽性率達(dá)82%以上，散養(yǎng)戶豬瘟抗體陽性率只有73%，其他場地豬瘟抗體陽性率72%～78%。不同群體間的數(shù)據(jù)差異較大 （圖2和表1）。種豬場豬瘟免疫的整體效果很好，散養(yǎng)戶豬群豬瘟免疫效果不太理想，種豬場豬瘟抗體陽性率達(dá)92%左右，顯著高于其他豬場；規(guī)?；B(yǎng)豬場的抗體陽性率均達(dá)到80%以上，而散養(yǎng)戶的抗體陽性率相對較低，陽性率僅為73%，其原因可能是不同規(guī)?；i場的飼養(yǎng)管理和免疫方案等存在差異，但所有豬群豬瘟免疫抗體合格率均達(dá)到了國家農(nóng)業(yè)部的免疫要求。

3 討論

豬瘟是我國中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）優(yōu)先凈化的12種動物疫病之一，國內(nèi)大部分規(guī)?；i場雖然通過規(guī)范疫苗免疫程序和逐步完善綜合防控措施，使豬瘟得到一定程度的控制，但仍然不能徹底清除，其根源主要在于隱性感染的種豬通過水平傳播和垂直感染的方式不斷散播豬瘟病毒，近年來，豬瘟在我國以慢性、非典型特征為主，影響母豬繁殖性能，并引起豬體免疫抑制，從而加重了豬場的經(jīng)濟(jì)損失。

豬瘟在我國已實(shí)行計(jì)劃免疫多年，特別是2007年國家將豬瘟免疫納入重大動物疫病強(qiáng)制免疫的范疇，使得豬瘟的免疫步入科學(xué)化、規(guī)模化的軌道。我國主要用弱毒疫苗來免疫接種預(yù)防豬瘟，但目前在疫苗免疫接種上普遍存在一個很大的誤區(qū)，即僅僅注重免疫密度，卻忽視了免疫接種的質(zhì)量。養(yǎng)豬場按照免疫接種計(jì)劃定期應(yīng)用豬瘟病毒ELISA 抗體檢測試劑盒監(jiān)測豬群免疫抗體水平，可科學(xué)地評估豬瘟疫苗免疫抗體水平和免疫效果，為合理制定和調(diào)整豬瘟疫苗免疫程序提供可靠依據(jù)，對防控與消滅豬瘟具有重要意義。

為有效做好豬瘟的防疫工作，切實(shí)了解近幾年我省豬瘟疫苗免疫實(shí)施情況和評估免疫效果。我們在2015-2017年對甘肅省部分種豬場、規(guī)模養(yǎng)豬場、散養(yǎng)戶和其他場地采集的血清樣本，采用豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒進(jìn)行豬瘟抗體水平監(jiān)測分析。

2015-2017年三年中分別在各地州市種豬場、規(guī)模養(yǎng)豬場、散養(yǎng)戶和其他場地采集樣本共23 051份，豬瘟免疫抗體水平監(jiān)測結(jié)果表明：三年間甘肅省所用豬場豬瘟抗體總陽性率為79.04%：2015年場豬瘟抗體陽性率為78.96%，2016年豬瘟抗體陽性率為78.97%，2016年豬瘟抗體陽性率為79.19%。豬瘟抗體總陽性率呈逐年上升的趨勢，均超國家規(guī)定的70%標(biāo)準(zhǔn)。表明甘肅省豬場的豬瘟防控已經(jīng)取得較好成效。

不同來源、不同年份豬瘟樣本陽性率結(jié)果表明：2015-2017年甘肅省種豬場豬瘟抗體陽性率均高于90%，規(guī)?；B(yǎng)豬場的豬瘟抗體陽性率達(dá)82%以上，散養(yǎng)戶豬瘟抗體陽性率只有73%，其他場地豬瘟抗體陽性率72%～78%。不同群體間的數(shù)據(jù)差異較大。但同一豬群在三年內(nèi)的抗體陽性率比較平穩(wěn)，沒有太大的起伏變化。分析原因可能與豬場的重視程度及較大規(guī)模豬場免疫程序、方案科學(xué)，免疫操作合理，免疫頻率合適有關(guān)。種豬場和規(guī)模養(yǎng)豬場對防疫比較重視，加之都有嚴(yán)格的免疫程序和操作規(guī)程，所以免疫抗體水平普遍較高。散養(yǎng)戶相對重視眼前利益，近三年全省豬瘟發(fā)病較低，沒有大規(guī)模豬瘟流行，所以散養(yǎng)戶存在應(yīng)付免疫的情況，相對免疫抗體合格率較低。

豬瘟群體免疫合格率在一定程度上可以反映豬場豬瘟抗體的免疫效果，因此，要提高豬場的生產(chǎn)效益與經(jīng)濟(jì)效益，必須要有科學(xué)的防控疫病制度，重視豬場的疫病監(jiān)測工作，并使之制度化、合理化、 常態(tài)化是科學(xué)防控疫病的一種重要措施。加強(qiáng)免疫監(jiān)測，對監(jiān)控豬瘟發(fā)展方向，根除豬瘟具有重要作用。我國已把豬瘟的凈化提到了議事日程，農(nóng)業(yè)部明確要求豬瘟2020年達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)，豬瘟抗體的免疫監(jiān)測是凈化的嚴(yán)格重要環(huán)節(jié)。

近年來甘肅省大力推行豬瘟強(qiáng)制免疫，豬瘟防控水平取得了顯著成效。每年在全省開展豬瘟免疫抗體水平監(jiān)測，及時(shí)掌握豬瘟群體免疫力，對于豬瘟的預(yù)防、控制和凈化具有積極的推動作用。但是，要到2020年底全省豬場豬瘟達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)，還面臨著嚴(yán)峻考驗(yàn)，需繼續(xù)在各地州市縣持續(xù)開展豬瘟疫情監(jiān)測工作，同時(shí)需要對養(yǎng)殖戶推廣科學(xué)的免疫程序和豬瘟防疫知識，保障甘肅省養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。