張桂春

[摘要] 目的 對(duì)MP1干式分析儀與日立7100全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)同型半胱氨酸（HCY）結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析及偏倚進(jìn)行評(píng)估。方法 參考美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（CLSI）EP9-A2文件規(guī)定，以大型生化分析儀的檢測(cè)結(jié)果為比較方法（X），MP1干式分析儀及配套的試劑盤(pán)的檢測(cè)結(jié)果為實(shí)驗(yàn)方法（Y），計(jì)算X和Y之間預(yù)期偏差的可信區(qū)間，以行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的15%的偏差要求為標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)其進(jìn)行偏倚評(píng)估。結(jié)果 HCY在醫(yī)學(xué)決定水平處的預(yù)期偏倚低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的允許誤差范圍，線性回歸方程級(jí)相關(guān)性良好（r2>0.95）。結(jié)論 MP1干式分析儀檢測(cè)HCY臨床可接受，可以保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

[關(guān)鍵詞] MP1;比對(duì)研究;偏倚評(píng)估

[中圖分類(lèi)號(hào)] R392 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1672-5654（2018）08（b）-0176-04

即時(shí)檢驗(yàn)（point-of-care testing，POCT）是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)發(fā)展的新領(lǐng)域，它具有操作簡(jiǎn)便、高效快捷、試劑穩(wěn)定，容易使用和小型化，順應(yīng)了現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)快節(jié)奏的工作方式，使患者得到及時(shí)的診斷和治療。當(dāng)診斷技術(shù)與其他技術(shù)全面發(fā)展之后，人們治療與認(rèn)識(shí)疾病的水平也有序提升，POCT使用范圍不斷拓展，技術(shù)應(yīng)用得到突飛猛進(jìn)的發(fā)展，關(guān)注度不斷提升[1]。

微流控芯片技術(shù)是新世紀(jì)主要的現(xiàn)代化技術(shù)，其將化學(xué)與生物領(lǐng)域中涉及的細(xì)胞裂解、分選、培養(yǎng)，樣品檢測(cè)、分離、反應(yīng)、制備等過(guò)程匯集到便捷化的小芯片中[2]。微流控檢測(cè)芯片一般具有樣品消耗少、檢測(cè)速度快、操作簡(jiǎn)便、多功能集成、體小和便于攜帶等優(yōu)點(diǎn)，因此特別適合發(fā)展POCT診斷，具有簡(jiǎn)化診斷流程、提高醫(yī)療結(jié)果的巨大潛力。寧波美康保生生物醫(yī)學(xué)工程有限公司研究發(fā)明的MP1干式分析儀屬于以微流控芯片技術(shù)為基礎(chǔ)的現(xiàn)代化POCT設(shè)備，其主要優(yōu)點(diǎn)是成本低、檢測(cè)不需要使用很多試劑、需血量少、精準(zhǔn)度高，在我國(guó)這種使用試劑量大、醫(yī)療系統(tǒng)龐大的國(guó)家中適合廣泛應(yīng)用。

該研究依據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）文件NCCLS EP9-A2提出的各項(xiàng)基本要求，針對(duì)MP1干式分析儀和相應(yīng)試劑盤(pán)中HCY項(xiàng)目的分析結(jié)果，實(shí)施有效評(píng)價(jià)，明確其能夠在臨床中廣泛應(yīng)用。

1? 材料與方法

1.1? 樣本

參照文件[3]，收集寧波美康盛德醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所血清，選擇HCY項(xiàng)目中濃度不同的、沒(méi)有溶血血清的、新鮮的樣本，一共40例，在4℃的冰箱中保存，供之后使用。

1.2? 儀器與試劑

MP1干式分析儀和相應(yīng)的試劑：寧波美康保生生物醫(yī)學(xué)工程有限公司研究并生產(chǎn)的MP1干式分析儀和相應(yīng)的試劑盤(pán)片，其中，所以試劑盤(pán)片都只能單次、單人使用。

規(guī)模較大的生化分析儀和試劑：日立7100全自動(dòng)生化分析儀，美康生物科技股份有限公司提供了相應(yīng)的HCY檢測(cè)試劑盒（批號(hào)為：17031505）。

1.3? 方法

1.3.1 測(cè)定樣本? 結(jié)合EP9-A2文件的基本要求，每天將不同濃度的、滿足要求的血清樣本收集起來(lái)，數(shù)量為8份，連續(xù)收集5 d。用兩種方法每天測(cè)定8個(gè)樣本，每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定2次，共測(cè)定5 d。每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)定2次，確定第1次測(cè)定順序，第2次反序測(cè)定。

1.3.2 檢驗(yàn)離群值? 結(jié)合文件要求[3]，檢驗(yàn)方法間與方法內(nèi)的離群值。雙份測(cè)定的相對(duì)差值比1/4大的平均值數(shù)據(jù)應(yīng)該作為離群數(shù)據(jù)，將其刪除。

1.3.3 數(shù)據(jù)作圖? 圖1散點(diǎn)圖：實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)兩次測(cè)定所有樣本均值（Yi）對(duì)比較方法所有樣本2次重復(fù)測(cè)定均值（Xi），繪制散點(diǎn)圖;圖2散點(diǎn)圖：實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)兩次測(cè)定所有樣本的值（Yij）對(duì)比較方法所有樣本兩次重復(fù)測(cè)定均值（Xi），繪制散點(diǎn)圖;圖3偏倚圖：所有測(cè)定樣本的均值差（Yi-Xi）和（Yi+Xi）/2比較之后，繪制偏倚圖，其中心線水平是零;圖4偏倚圖：?jiǎn)未螠y(cè)定值和平均差值（Yij-Xi）和（Yi+Xi）/2比較之后，繪制偏倚圖，其中心線水平是零。

1.3.4 比較方法? （X）檢驗(yàn)適合的范疇，分析回歸情況，計(jì)算各個(gè)系數(shù)，若結(jié)合數(shù)據(jù)資料，計(jì)算出r≥0.975（或r2≥0.95），則表示X的范圍比較合適，認(rèn)為數(shù)據(jù)范疇能夠抵消X變量的存在的誤差，而且能夠通過(guò)回歸直線分析，來(lái)對(duì)截距與斜率進(jìn)行預(yù)估。反之，需要增加樣本量再重新分析數(shù)據(jù)[4]。

1.3.5 線性回歸分析? 兩方法之間的線性回歸方程具體計(jì)算公式是：Y=a+bX。

1.3.6 可信區(qū)間與預(yù)期偏倚? 結(jié)合臨床研究的相關(guān)要求，明確醫(yī)學(xué)研究情況，通過(guò)回歸方程，得到95%可信區(qū)間與預(yù)期偏倚。因CLIA88未規(guī)定HCY的允許誤差范圍，故以行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（YY/T 1258-2015）要求的≤15%為偏差要求，比較預(yù)期偏差的可信區(qū)間，并進(jìn)行判斷比較。

1.4? 統(tǒng)計(jì)方法

使用 Excel 軟件處理數(shù)據(jù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)研究。

2? 結(jié)果

2.1? 散點(diǎn)圖和偏倚圖分析

以MP1干式分析儀為實(shí)驗(yàn)方法（X），日立7100全自動(dòng)生化分析儀為比較方法（Y），經(jīng)組間與組內(nèi)檢驗(yàn)離群值之后，繪制偏倚圖與散點(diǎn)圖。從散點(diǎn)圖中，能夠了解到，兩種儀器具有良好的線性關(guān)系，圖1、2為HCY在MP1干式分析儀和日立7100全自動(dòng)生化分析儀研究結(jié)果的散點(diǎn)圖，能夠了解到，兩種儀器具有良好的關(guān)聯(lián)性，之間的關(guān)系是直線關(guān)系。圖3、4是檢查兩種儀器重復(fù)測(cè)定2次的均值間的差異和兩種儀器測(cè)定值間的差異，主要研究系統(tǒng)中是否會(huì)存在誤差，從圖片中表現(xiàn)的情況來(lái)分析，MP1干式分析儀和日立7100全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定的HCY的結(jié)果分布具有合理性，差值并不大。

2.2? 方法內(nèi)和方法間離群值檢驗(yàn)

方法內(nèi)離群值檢驗(yàn)，分別計(jì)算MP1干式分析儀和日立7100全自動(dòng)生化分析儀重復(fù)測(cè)定的差值絕對(duì)值的均值，以4倍的平均絕對(duì)差值作為2種檢測(cè)系統(tǒng)重復(fù)測(cè)定絕對(duì)差值的可接受限。經(jīng)計(jì)算結(jié)果顯示：2種檢測(cè)系統(tǒng)均沒(méi)有超出控制限，故方法內(nèi)沒(méi)有離群值。見(jiàn)表1。

方法間離群值檢驗(yàn)，計(jì)算MP1干式分析儀和日立7100全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值及平均值，相對(duì)差值及平均值，以4倍的差值作為可接受限。經(jīng)計(jì)算結(jié)果無(wú)雙份測(cè)定差值超過(guò)控制限的測(cè)定結(jié)果，故方法間沒(méi)有離群值。見(jiàn)表2。

2.3? X值合適范圍的檢驗(yàn)及線性回歸分析

MP1干式分析儀測(cè)試到的各種數(shù)據(jù)，相對(duì)于日立7100全自動(dòng)生化分析儀測(cè)試得到的各種數(shù)據(jù)，予以線性回歸方程分析，截距和斜率計(jì)算分別為b=1.006 7，a=0.187 9，結(jié)果見(jiàn)表3。兩臺(tái)儀器所測(cè)的HCY項(xiàng)目的相關(guān)系數(shù)r2為0.995 1。

2.4? 計(jì)算HCY在給定濃度處的偏差

HCY的醫(yī)學(xué)決定水平分別為25 μmol/L、100 μmol/L，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中HCY的允許誤差是15%，依據(jù)兩種基本的檢測(cè)方法，臨床上能夠接受的誤差水平是相對(duì)偏倚比“1/2允許誤差”小。通過(guò)回歸方程計(jì)算的預(yù)期偏差可以參考表4，兩臺(tái)儀器檢測(cè)HCY這一項(xiàng)目偏倚時(shí)使用的方法都能夠接受，也就是說(shuō)，兩臺(tái)儀器檢測(cè)的結(jié)果之間能夠進(jìn)行比較。

注*允許誤差在預(yù)期偏差可信區(qū)的上下限之間，那么實(shí)驗(yàn)方法與比對(duì)方法是相當(dāng)?shù)?允許誤差比預(yù)期偏差可信區(qū)上限大，能夠接受;允許誤差比預(yù)期偏差可信區(qū)下限小，不能夠接受。

3? 討論

隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，POCT 技術(shù)的水平也全面提升，其在輔助診斷疾病的過(guò)程中，發(fā)揮著關(guān)鍵作用。與此同時(shí)，控制檢驗(yàn)質(zhì)量也顯得尤為關(guān)鍵，臨床實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量目標(biāo)主要是保障檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性、精準(zhǔn)性[5-7]，結(jié)合醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室CLSI文件中 POCT 09-A提出的各項(xiàng)基本要求[8]，必須全面評(píng)估寧波美康保生生物醫(yī)學(xué)有限公司研究生產(chǎn)的MP1干式分析儀應(yīng)用在臨床過(guò)程中的可靠性與精準(zhǔn)性。

HCY是蛋氨酸代謝重要中間產(chǎn)物，屬含硫氨基酸。在臨床上，高HCY常作為動(dòng)脈粥樣硬化和心腦血管疾病獨(dú)立危險(xiǎn)因子使用[9]。急性腦梗死患者HCY水平明顯高于健康體檢者，并且隨著神經(jīng)損傷程度的加重而升高，這表明HCY可能與急性腦梗死發(fā)病密切相關(guān)[10]。使用不同系統(tǒng)檢測(cè)同一個(gè)標(biāo)本，結(jié)果必然是不同的，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行全面評(píng)估是實(shí)驗(yàn)室研究中主要的問(wèn)題。

該研究根據(jù)CLSI EP9-A2文件的要求，分析了MP1干式分析儀與日立7100全自動(dòng)生化分析儀的研究結(jié)果，為實(shí)驗(yàn)室研究提供了數(shù)據(jù)資料。研究表明，兩種方法具有很好的重復(fù)性，方法之間和方法內(nèi)部的差異都在能夠接受的范圍內(nèi)，所以，二者沒(méi)有離群值。對(duì)日立7100測(cè)定結(jié)果（X）和MP1分析儀測(cè)定結(jié)果（Y）進(jìn)行線性回歸分析，兩者線性關(guān)系良好，r2=0.995 1，說(shuō)明選擇的樣本濃度滿足要求，能夠?qū)煞N檢測(cè)方法存在的偏倚進(jìn)行全面評(píng)估。進(jìn)一步通過(guò)偏差估計(jì)發(fā)現(xiàn)，MP1干式分析儀的偏倚評(píng)估結(jié)果表明，在醫(yī)學(xué)決定水平處，HCY檢測(cè)項(xiàng)目的偏差比行業(yè)規(guī)定的偏差標(biāo)準(zhǔn)都小，說(shuō)明兩種檢測(cè)系統(tǒng)的結(jié)果一致性較強(qiáng)，臨床能夠接受系統(tǒng)的誤差，結(jié)果能夠進(jìn)行比較，保證了測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。

與傳統(tǒng)的全自動(dòng)生化分析儀相比，POCT分析儀操作非常便利，檢測(cè)效率高，成本低，大概10 min就能夠得到很多檢測(cè)結(jié)果;而且因?yàn)闇y(cè)定使用的試劑盤(pán)片是利用微流控芯片技術(shù)與真空冷凍干燥技術(shù)研發(fā)的，檢測(cè)試劑以?xún)龈尚∏虻男问皆诒P(pán)片中存放，能夠便捷地?cái)y帶;與此同時(shí)，這個(gè)儀器廣泛應(yīng)用，在野戰(zhàn)外科、手術(shù)室、醫(yī)院各個(gè)科室、重癥監(jiān)護(hù)室、急診室以及家庭診療、小型診所等都能夠應(yīng)用，測(cè)試結(jié)果的可靠性不會(huì)受到影響，檢測(cè)之后，不需要清洗，保養(yǎng)與維修儀器都很便利。

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（收稿日期：2018-05-16）