范麗霞,胡曉蘋,劉文波,RAJAOFERA Mamy Jayne Nelly,唐中發(fā),繆衛(wèi)國*

(1.海南大學(xué) 食品學(xué)院,海南 ?？?570228；2.海南大學(xué) 熱帶農(nóng)林學(xué)院,海南 ?？?570228)

鏈霉菌屬(Streptomyces sp.)是放線菌的一個(gè)大屬,其所產(chǎn)生的活性物質(zhì)約占所有放線菌所產(chǎn)生物活性物質(zhì)的2/3以上［1］。其中,鏈霉菌屬所產(chǎn)抗生素的產(chǎn)量約占微生物所產(chǎn)抗生素總量的70%［2］。目前,從海洋鏈霉菌中不斷有新穎的具有生物活性的化合物分離出來［3-7］,正逐漸成為研究的熱點(diǎn)。而且,由于鏈霉菌所產(chǎn)抗生素多是天然的、綠色藥劑,具有抗性機(jī)制多樣、對(duì)環(huán)境安全等特點(diǎn)而被廣泛關(guān)注［8］。然而,微生物源抗生素的產(chǎn)量低也依然是個(gè)問題,制約著抗生素的開發(fā)［9-10］。

實(shí)驗(yàn)室從海南熱帶海洋的鹽堿土壤中分離出一株鏈霉菌Z331-A,具有廣譜活性,且活性穩(wěn)定,是一種極具經(jīng)濟(jì)價(jià)值和開發(fā)潛力的微生物?？紤]到鏈霉菌代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量受發(fā)酵條件影響較大［11］,極其影響后期活性產(chǎn)物的分離及其他的開發(fā)研究,所以鏈霉菌發(fā)酵工藝的建立尤為重要。響應(yīng)面法是生物研究中優(yōu)化培養(yǎng)基的重要方法,不僅能充分地反映試驗(yàn)中各因素和水平的效果,直觀地分析各因素之間的交互作用,克服了正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)只能處理離散的水平值的缺陷,還能找出試驗(yàn)中各因素的最佳組合并預(yù)測響應(yīng)值的最優(yōu)值［12-13］。

為提高鏈霉菌Z331-A中抑菌活性物質(zhì)的產(chǎn)量和進(jìn)一步開發(fā)該菌,本研究采用響應(yīng)面法對(duì)其液體發(fā)酵培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,以期為進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)、活性產(chǎn)物分離和應(yīng)用等提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 供試菌株與試劑

鏈霉菌(Streptomyces)Z331-A：分離自海南近海鹽堿性土壤,保存于海南大學(xué)食品學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室；枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)ATCC6633：廣東省微生物菌種保藏中心。

麥芽提取物、酵母提取物、胰蛋白胨、蛋白胨、可溶性淀粉、無水葡萄糖、碳酸鈣(均為生化試劑或分析純)：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；磷酸氫二鉀(分析純)：廣州化學(xué)試劑廠；結(jié)晶硫酸鎂、硝酸鉀、硫酸亞鐵、氯化鈉(均為分析純)：西隴化工股份有限公司；黃豆粉：山東朝旭食品有限公司。

1.1.2 培養(yǎng)基的配制

基礎(chǔ)培養(yǎng)基(高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基)：可溶性淀粉20 g,硝酸鉀1 g,磷酸氫二鉀0.5 g,硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5 g,NaCl 0.5 g,FeSO4·7H2O 0.01 g,水1 000 mL,pH值7.4～7.6。

發(fā)酵培養(yǎng)基：

①高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基：同基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

②ISP-2液體培養(yǎng)基：酵母提取物4 g,葡萄糖4 g,麥芽提取物10 g,碳酸鈣2 g,水1 000 mL,pH值7.4～7.6。

③黃豆粉液體培養(yǎng)基：黃豆粉40 g,蛋白胨2 g,葡萄糖20 g,水1 000 mL,pH自然。

④LB液體培養(yǎng)基：蛋白胨10 g,酵母膏5 g,NaCl 10 g,蒸餾水1 000 mL,pH7.0。

⑤馬鈴薯葡萄糖肉湯(potato dextrose broth,PDB)培養(yǎng)基：葡萄糖20 g,馬鈴薯200 g,水1 000 mL,自然pH值。

⑥酵母浸出粉胨葡萄糖(yeastextractpeptonedextrose,YEPD)培養(yǎng)基：葡萄糖20 g,胰蛋白胨20 g,酵母粉10 g,自來水1 000 mL,pH自然。

1.2 儀器與設(shè)備

HMS-310振蕩培養(yǎng)箱：天津恒奧科技發(fā)展有限公司；SW-CJ-2FD雙人單面凈化工作臺(tái)：蘇州凈化設(shè)備有限公司；BCD-245D美菱冰箱：合肥美菱股份有限公司；CL-321型臺(tái)式高壓滅菌鍋：日本ALP公司；SPX-250智能生化培養(yǎng)箱：寧波海曙賽福實(shí)驗(yàn)儀器廠；UV-1800紫外可見分光光度計(jì)：島津(中國)有限公司；BM340超低溫冰箱：法國Froilabo公司。

1.3 方法

1.3.1 菌株活化及發(fā)酵方法

取冷凍于甘油管的菌株Z331-A,按1%的接種量接種于裝液量為40 mL/100 mL的高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基中,28℃、180 r/min搖瓶培養(yǎng)2～3 d后得到一級(jí)種子液。按3%的接種量接種到裝液量為40 mL/100 mL的高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基中,28℃、180 r/min搖瓶培養(yǎng)2～3 d后得到二級(jí)種子液,再按3%的接種量接種到裝液量為40 mL/100 mL的發(fā)酵培養(yǎng)基中,28℃、180 r/min搖瓶培養(yǎng)7 d,得發(fā)酵產(chǎn)物。

1.3.2 發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選

將種子培養(yǎng)基以3%接種量接入6種常用的放線菌培養(yǎng)基中(高氏一號(hào)、黃豆粉、PDB、LB、YEPD、ISP-2液體培養(yǎng)基),28℃、180 r/min培養(yǎng)7 d,測定在不同培養(yǎng)基中發(fā)酵液對(duì)測試菌枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑大小,確定最佳發(fā)酵培養(yǎng)基,進(jìn)行3次重復(fù)。

1.3.3 抑菌活性物質(zhì)測定

菌株Z331-A經(jīng)過菌種活化后發(fā)酵,發(fā)酵條件為：28℃,裝液量為40 mL/100 mL,180 r/min,培養(yǎng)7 d得發(fā)酵產(chǎn)物后,9 000 r/min離心、去沉淀,即獲得發(fā)酵上清液,0.22μm的濾膜過濾,即為待測無菌發(fā)酵液。

本試驗(yàn)以枯草芽孢桿菌為測試菌,采用紙片擴(kuò)散法,每個(gè)紙片含相應(yīng)的發(fā)酵液25μL,陽性對(duì)照為黃胺藥敏紙片(300μg/片),以十字交叉法測定待測無菌發(fā)酵液對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌圈大小,每組3個(gè)重復(fù)。

1.3.4 單因素試驗(yàn)

在其他發(fā)酵培養(yǎng)條件一致的情況下,研究發(fā)酵時(shí)間(1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d、9 d、10 d、11 d、12 d、13 d、14 d、15 d)、裝液量(10 mL/100 mL、20 mL/100 mL、30 mL/100 mL、40 mL/100 mL、50 mL/100 mL)、接種量(2%、4%、6%、8%、10%)、培養(yǎng)溫度(20℃、24℃、28℃、32℃、36℃)、搖瓶轉(zhuǎn)速(160r/min、180r/min、200r/min、220r/min、240r/min)對(duì)鏈霉菌Z331-A發(fā)酵液抑菌圈直徑大小的影響。

1.3.5 Plackett-Burman設(shè)計(jì)確定關(guān)鍵影響因素

根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,采用Plackett-Burman(PB)試驗(yàn)設(shè)計(jì)以影響菌株培養(yǎng)條件的發(fā)酵時(shí)間、裝液量、接種量、搖瓶轉(zhuǎn)速、培養(yǎng)溫度5個(gè)因素為自變量,發(fā)酵液抑菌圈直徑(Y)為響應(yīng)值,確定各因素的高(1)低(-1)水平值,進(jìn)行PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)。PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素與水平見表1。

表1 Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素與水平Table 1 Factors and levels of Plackett-Burman experiments design

1.3.6 中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)PB試驗(yàn)結(jié)果,確定發(fā)酵時(shí)間、接種量、搖瓶轉(zhuǎn)速為主要考察因素,以單因素試驗(yàn)結(jié)果的最適條件作為中心水平,即0水平［14-15］,并以之為中心,利用響應(yīng)面分析法的中心組合設(shè)計(jì)(central composite design,CCD)試驗(yàn)對(duì)鏈霉菌Z331-A發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。

1.3.7 數(shù)據(jù)處理

采用最小顯著差法(leastsignificantdifference,LSD)對(duì)結(jié)果進(jìn)行顯著差異分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選

由圖1可知,在高氏一號(hào)、黃豆粉、PDB、YEPD、LB、ISP-2這6種液體培養(yǎng)基中,菌株Z331-A在ISP-2培養(yǎng)基中發(fā)酵時(shí)對(duì)供試細(xì)菌(枯草芽孢桿菌)產(chǎn)生的抑菌圈直徑最大,為17.11 mm,其次為高氏一號(hào)培養(yǎng)基(15.29 mm),YEPD培養(yǎng)基(13.13 mm),LB培養(yǎng)基(12.34 mm),黃豆粉培養(yǎng)基(11.2 mm),PDB培養(yǎng)基(9.5 mm),所以選用ISP-2培養(yǎng)基作為后續(xù)試驗(yàn)的發(fā)酵培養(yǎng)基。

圖1 發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選Fig.1 Screening of fermentation medium

2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果分析

2.2.1 發(fā)酵時(shí)間對(duì)發(fā)酵液抑菌活性的影響

考察發(fā)酵時(shí)間對(duì)抑菌圈直徑的影響,結(jié)果見圖2。由圖2可知,隨著發(fā)酵時(shí)間的延長,抑菌圈直徑呈先增加后減小的趨勢。發(fā)酵液的抑菌活性從第3天開始產(chǎn)生,當(dāng)發(fā)酵時(shí)間為3～7 d時(shí),發(fā)酵液對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑迅速增加；當(dāng)發(fā)酵時(shí)間為7 d時(shí),發(fā)酵液抑菌圈直徑達(dá)到最大值,為20.85 mm。繼續(xù)延長發(fā)酵時(shí)間,抑菌圈直徑開始減小。這可能與底物消耗和有害物質(zhì)的積累產(chǎn)生的負(fù)面影響有關(guān)［16］。因此,選擇最佳發(fā)酵時(shí)間為7 d。

圖2 發(fā)酵時(shí)間對(duì)抑菌圈直徑的影響Fig.2 Effect of fermentation time on inhibition zone diameter

2.2.2 裝液量對(duì)發(fā)酵液抑菌活性的影響

考察裝液量對(duì)抑菌圈直徑的影響,結(jié)果見圖3。由圖3可知,隨著裝液量的增加,抑菌圈直徑呈先增加后減小的趨勢。當(dāng)裝液量為10 mL/100 mL～30 mL/100 mL時(shí),抑菌圈直徑迅速增加；當(dāng)裝液量為30 mL/100 mL時(shí),發(fā)酵液抑菌圈直徑達(dá)到最大值,為20.4 mm。繼續(xù)增加裝液量,抑菌圈直徑開始下降。這可能是由于通氣量減少,菌株生長受到抑制,導(dǎo)致抑菌活性下降。因此,選擇最佳裝液量為30 mL/100 mL。

圖3 裝液量對(duì)抑菌圈直徑的影響Fig.3 Effects of liquid volume on inhibition zone diameter

2.2.3 接種量對(duì)發(fā)酵液抑菌活性的影響

考察接種量對(duì)抑菌圈直徑的影響,結(jié)果見圖4。由圖4可知,隨著接種量的增加,抑菌圈直徑呈先增加后減小的趨勢。當(dāng)接種量為2%～6%時(shí),發(fā)酵液對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑迅速增加；當(dāng)接種量為6%時(shí),發(fā)酵液抑菌圈直徑達(dá)到最大值,為20.01 mm。繼續(xù)增加接種量,抑菌圈直徑開始緩慢下降。原因可能是種子液濃度過低,會(huì)導(dǎo)致生長緩慢,而種子液濃度過高,會(huì)引起菌體過早進(jìn)入衰亡期,從而發(fā)酵能力下降［17］。因此,選擇最佳接種量為6%。

圖4 接種量對(duì)抑菌圈直徑的影響Fig.4 Effect of inoculum on inhibition zone diameter

2.2.4 搖瓶轉(zhuǎn)速對(duì)發(fā)酵液抑菌活性的影響

圖5 搖瓶轉(zhuǎn)速對(duì)抑菌圈直徑的影響Fig.5 Effect of shaker speed on inhibition zone diameter

考察搖瓶轉(zhuǎn)速對(duì)抑菌圈直徑的影響,結(jié)果見圖5。由圖5可知,隨著搖瓶轉(zhuǎn)速的增加,抑菌圈直徑呈先增加后減小的趨勢。當(dāng)搖瓶轉(zhuǎn)速為160～200 r/min時(shí),發(fā)酵液對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑迅速增加；當(dāng)搖瓶轉(zhuǎn)速為200r/min時(shí),發(fā)酵液抑菌圈直徑達(dá)到最大值,為20.45 mm。繼續(xù)增加搖瓶轉(zhuǎn)速,抑菌圈直徑開始下降。因此,選擇最佳搖瓶轉(zhuǎn)速為200 r/min。

2.2.5 培養(yǎng)溫度對(duì)發(fā)酵液抑菌活性的影響

考察培養(yǎng)溫度對(duì)抑菌圈直徑的影響,結(jié)果見圖6。由圖6可知,隨著培養(yǎng)溫度的升高,抑菌圈直徑呈先增加后減小的趨勢。當(dāng)培養(yǎng)溫度為20～28℃時(shí),發(fā)酵液對(duì)枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑迅速增加；當(dāng)培養(yǎng)溫度為28℃時(shí),發(fā)酵液抑菌圈直徑達(dá)到最大值,為20.45 mm。繼續(xù)升高培養(yǎng)溫度,抑菌圈直徑開始下降。因此,選擇最佳培養(yǎng)溫度為28℃。

圖6 培養(yǎng)溫度對(duì)抑菌圈直徑的影響Fig.6 Effect of culture temperature on inhibition zone diameter

2.3 Plackett-Burman設(shè)計(jì)確定關(guān)鍵影響因素

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用Design-Expert V 8.0.6軟件設(shè)計(jì)PB試驗(yàn)各因素與水平,PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果如表2所示,每組設(shè)置3個(gè)平行重復(fù)。

表2 Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Design and results of Plackett-Burman experiments

采用SAS9.0軟件對(duì)表2的數(shù)據(jù)進(jìn)行逐步回歸分析,得到偏回歸系數(shù)及顯著性檢驗(yàn)結(jié)果見表3。由表3可知,因素X1、X3、X4的P值分別為＜0.000 1、0.000 7、0.070 9,即因素X1、X3對(duì)響應(yīng)值Y的影響極顯著(P＞0.01),X4的P值＞0.05,但SAS 9.0軟件顯示各因素P值＜0.150 0水平均是有意義的,故將因素X4考慮進(jìn)去,作為響應(yīng)值Y影響的第3個(gè)因素。因此選擇影響抑菌圈直徑的關(guān)鍵因素為發(fā)酵時(shí)間、培養(yǎng)轉(zhuǎn)速和接種量。

表3 Plackett-Burman試驗(yàn)的偏回歸系數(shù)及顯著性檢驗(yàn)Table 3 Partial regression coefficients and significance test of Plackett-Burman experiments

2.4 響應(yīng)面設(shè)計(jì)與分析

在PB試驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上,用Design-Expert V8.0.6軟件,以抑菌圈直徑(Y)為響應(yīng)值,對(duì)發(fā)酵時(shí)間(A)、接種量(B)和搖瓶轉(zhuǎn)速(C)這3個(gè)因素進(jìn)行3因素3水平的中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì),響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表4,方差分析見表5。

表4 鏈霉菌Z331-A發(fā)酵條件優(yōu)化響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 4 Design and results of response surface experiments for fermentation conditions optimization of Streptomyces Z331-A

表5 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果方差分析Table 5 Variance analysis of response surface experiments results

運(yùn)用Design-Expert V 8.0.6軟件對(duì)表4進(jìn)行多元線性回歸和二項(xiàng)式擬合,得到發(fā)酵液抑菌活性大小響應(yīng)面模擬方程如下：

Y=24.08+0.7A+0.2B+0.26C-0.17AB-0.42AC-0.017BC-0.92A2-0.12B2-0.16C2

由表5可知,回歸模型P=0.003 2＜0.01,說明模型達(dá)到差異極顯著水平,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)可靠；模型相關(guān)系數(shù)R2為0.8580,表明其回歸方程擬合良好。模型一次項(xiàng)A、二次項(xiàng)A2差異均極顯著(P＜0.01),其他因素不顯著,由表5P值可知,3個(gè)因素對(duì)抑菌圈直徑影響大小依次為發(fā)酵時(shí)間＞搖瓶轉(zhuǎn)速＞接種量。失擬項(xiàng)P值為0.367 3＞0.05,即方程模型失擬項(xiàng)差異不顯著,表明該模型可信度高,能較好地反應(yīng)各因素與響應(yīng)值之間的關(guān)系。因此,利用該回歸方程能夠?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行擬合和預(yù)測分析。

由圖7可以直觀地觀察出,發(fā)酵時(shí)間(A)、接種量(B)、搖瓶轉(zhuǎn)速(C)這3個(gè)因素對(duì)抑菌圈直徑(Y)的影響,影響越大坡度越陡。隨著A的增加,Y呈現(xiàn)先增加再減少的趨勢,表明發(fā)酵時(shí)間有最優(yōu)值；在3個(gè)響應(yīng)面圖中其坡度最陡,表明發(fā)酵時(shí)間對(duì)抑菌圈直徑的影響最顯著,與表4方差分析結(jié)果相吻合。這3個(gè)因素之間交互作用的強(qiáng)弱可以通等高線形狀直觀地反映出來,交互作用越明顯,則等高線的橢圓形越明顯,反之就越圓。依據(jù)圖7,這3個(gè)因素的交互作用為AC＞AB＞BC,與表5方差分析結(jié)果相符。

圖7 發(fā)酵時(shí)間、接種量、搖瓶轉(zhuǎn)速交互作用對(duì)抑菌圈直徑影響的響應(yīng)面及等高線Fig.7 Response surface plots and contour line of the effects of interaction between fermentation time,inoculum and shaker speed on inhibition zone diameter

2.5 最優(yōu)發(fā)酵條件預(yù)測及試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證

運(yùn)用Design-Expert軟件對(duì)模型進(jìn)行最優(yōu)化預(yù)測,最大抑菌圈直徑為24.29 mm,得到鏈霉菌Z331-A最佳發(fā)酵條件為發(fā)酵時(shí)間7.21 d,接種量5.65%,搖瓶轉(zhuǎn)速210.18 r/min,在此發(fā)酵條件下,抑菌圈直徑預(yù)測值為24.29 mm。

為了進(jìn)一步驗(yàn)證模型預(yù)測的最佳發(fā)酵工藝條件的準(zhǔn)確性,同時(shí)考慮到實(shí)際操作,將發(fā)酵條件修正為發(fā)酵時(shí)間7.2 d,接種量5.7%,搖瓶轉(zhuǎn)速210 r/min。在此最佳發(fā)酵條件下,進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn),得到抑菌圈直徑為24.30 mm,與模型預(yù)測值相接近,而且相比優(yōu)化前的抑菌圈直徑19.20 mm提高了26.56%。表明響應(yīng)面法優(yōu)化鏈霉菌Z331-A發(fā)酵條件真實(shí)可靠,可以較大提高發(fā)酵液的抑菌活性。

3 結(jié)論

本研究從6種培養(yǎng)基中篩選獲得ISP-2培養(yǎng)基所發(fā)酵的鏈霉菌Z331-A發(fā)酵液對(duì)枯草芽孢桿菌抑菌效果最佳。以抑菌圈直徑為考察指標(biāo),在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對(duì)鏈霉菌Z331-A的發(fā)酵條件進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化。結(jié)果表明,鏈霉菌Z331-A的最佳發(fā)酵條件為發(fā)酵時(shí)間7.2 d,接種量5.7%,培養(yǎng)轉(zhuǎn)速210 r/min。在此最佳發(fā)酵條件下,抑菌圈直徑為24.30 mm,與模型預(yù)測值(24.29 mm)接近,與未優(yōu)化前(19.20 mm)相比,抑菌圈直徑提高了26.56%。為后續(xù)對(duì)該菌的開發(fā)和研究提拱了很好基礎(chǔ)。

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《中國釀造》雜志征稿啟事

《中國釀造》創(chuàng)刊于1982年,是由中國商業(yè)聯(lián)合會(huì)主管,中國調(diào)味品協(xié)會(huì)及北京食品科學(xué)研究院主辦的綜合性科技期刊。并歷次被評(píng)為全國中文核心期刊、中國科技核心期刊、《中國知網(wǎng)》重點(diǎn)收錄期刊、《萬方數(shù)據(jù)庫》全文收錄期刊、《中文科技期刊數(shù)據(jù)庫》來源期刊、中國學(xué)術(shù)期刊網(wǎng)絡(luò)出版總庫收錄期刊、美國《烏利希期刊指南》(UPD)收錄期刊、英國《食品科學(xué)文摘》(FSTA)收錄期刊、英國《國際農(nóng)業(yè)與生物科學(xué)研究中心》(CABI)收錄期刊、美國《化學(xué)文摘》(CA)收錄期刊、俄羅斯《文摘雜志》(AJ)收錄期刊、中國科學(xué)評(píng)價(jià)研究中心(RCCSE)數(shù)據(jù)庫收錄期刊,也是學(xué)位與研究生教育的中文重要期刊。

本刊主要面向全國各大高等院校、科研院所、各級(jí)黨政機(jī)關(guān)、相關(guān)企事業(yè)單位的廣大專家學(xué)者、工程技術(shù)人員、本科生、碩士博士研究生、管理人員等。

《中國釀造》主要欄目有：研究報(bào)告、專論綜述、創(chuàng)新與借鑒、經(jīng)驗(yàn)交流、分析與檢測、產(chǎn)品開發(fā)、釀造文化、海外文摘等。

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(1)新工藝、新技術(shù)、新設(shè)備在釀造行業(yè)的應(yīng)用；(2)調(diào)味品的研發(fā)創(chuàng)新與推廣應(yīng)用；(3)調(diào)味品產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)管理及產(chǎn)品質(zhì)量安全評(píng)價(jià)；(4)食品添加劑在釀造行業(yè)的應(yīng)用；(5)現(xiàn)代高新檢測技術(shù)在釀造行業(yè)的應(yīng)用；(6)釀酒產(chǎn)品開發(fā)、生產(chǎn)管理及產(chǎn)品質(zhì)量安全的控制；(7)發(fā)酵法制備酒精、氨基酸、高級(jí)醇及有機(jī)酸等工藝研究；(8)微生物發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基發(fā)酵條件優(yōu)化；(9)發(fā)酵工程菌種的篩育與人工誘變、雜交選育及基因工程改造研究；(10)生物質(zhì)能源的開發(fā)利用及規(guī)?；苽?；(11)傳統(tǒng)發(fā)酵食品生產(chǎn)工藝改進(jìn)、微生物菌種改良、發(fā)酵機(jī)理及規(guī)模化生產(chǎn)研究；(12)食品及發(fā)酵工業(yè)廢水、廢渣處理及綜合利用；(13)益生菌及功能型發(fā)酵乳制品研究與開發(fā)；(14)行業(yè)實(shí)用技術(shù)、政策、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)動(dòng)態(tài)和最新舉措等。

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