/ 上海市浦東食品藥品檢驗所

阿斯巴甜(Aspartame)是由天冬氨酸和苯丙氨酸結合而成的縮二氨酸的甲基酯，作為新型甜味劑逐漸被人們所熟悉，其應用范圍正逐漸擴大[1]。因為阿斯巴甜中含有苯丙胺酸，不適用于苯丙酮尿癥患者，因此采取科學方法準確測定食品中阿斯巴甜的含量至關重要[2]。本文通過對比新舊國標方法的不同之處，分析新國標方法的先進性和科學性。

1 實驗原理

阿斯巴甜易溶于水、甲醇和乙醇等極性溶劑而不溶于脂溶性溶劑，將不同分類的樣品經不同前處理后用水提取阿斯巴甜，提取的溶液注入高效液相色譜儀，經反相色譜分離，根據保留時間定性和峰面積比較進行定量[3][4]。

2 前處理方法的改進

2.1 細化樣品分類

對于樣品的前處理，目的就是盡量提高目標組分的回收率，舊國標GB 22254-2008[5]中，試樣的分類只有碳酸飲料類、乳飲料類、濃縮果汁類以及固體飲料，而新的國標方法GB 5009.263-2016（2017-06-23實施）[6]不僅包含了舊國標中的這四種類別，還增加了餐桌調味料、糖果類、乳制品、冷凍飲品、果凍、蔬菜及其制品、水果及其制品、食用菌和藻類、谷物及其制品、焙烤食品、膨化食品、脂肪類乳化制品、可可制品、巧克力及巧克力制品、堅果與籽類、水產及其制品和蛋制品。新國標方法將樣品分類更加細化，提取方法更加科學，更加完善。其中，新國標將碳酸飲料、濃縮果汁、固體飲料、餐桌調味料和除膠基糖果以外的其他糖果分為一類，其前處理也較為簡便。

2.2 對于樣品的制備，增加勻漿步驟

新國標中對于乳制品、冷凍飲品、果凍、蔬菜及其制品、水果及其制品、食用菌和藻類、谷物及其制品、焙烤食品、膨化食品、脂肪類乳化制品、可可制品、巧克力及巧克力制品、堅果與籽類、水產及其制品和蛋制品這些類別的樣品，均提出在提取前，用食品加工機按不同的試樣與水的質量比進行勻漿，而后稱取勻漿試樣進行提取測定。新國標增加勻漿的制備步驟，使樣品在提取過程中更加快速完全，有效提高目標組分的回收率。

2.3 對果凍中阿斯巴甜的提取單獨增加了前處理方法

新國標中細化明確了果凍中阿斯巴甜的提取，果凍基質彈滑，較難用舊國標中的方法充分提取，新國標提出勻漿稱樣，并加入80%甲醇水溶液，70 ℃水浴加熱提取，有效提高目標組分的回收率。

2.4 前處理中增加了正己烷的使用

新國標中，針對膠基糖果、脂肪類乳化制品、巧克力及巧克力制品。堅果與籽類、水產及其制品、蛋制品這些類別的食品，也分別提出加入正己烷進行前處理。舊國標中，此類樣品較難用其規(guī)定的方法充分提取，雜質干擾也比較嚴重，新國標中針對膠基類、含脂肪類物質使用正己烷，正己烷是低毒、無色的液體，不溶于水，對膠基類物質有很好的溶解能力，也對脂肪有較好的提取能力。加入正己烷，有效凈化樣品的基質干擾以及脂肪的殘留，對提高目標組分的回收率起了很大的作用。

3 色譜條件的改變

新國標中升高了柱溫箱溫度，由25 ℃升至30 ℃；流動相增加乙腈-水（20+80）的選擇；檢測波長也從208 nm改為200 nm。流動相增加乙腈-水（20+80）的選擇，可使檢測人員在做實驗時根據實驗分析條件的不同進行優(yōu)化選擇，使色譜條件更加科學、更加完善。試驗發(fā)現，相同濃度的標準物質，在相同的試驗條件下同時測定，200 nm測定時的阿斯巴甜響應值明顯大于208 nm測定時阿斯巴甜的響應值，見圖1。

圖1 在200 nm和208 nm測定時的阿斯巴甜響應值

4 標準溶液系列的制備及有效期

舊國標中阿斯巴甜標準儲備液濃度為1.00 mg/mL，置于冰箱保存，有效期為180 d，其標準使用液的系列濃度為 500 μg/mL、250 μg/mL、125 μg/mL、50.0 μg/mL、25.0 μg/mL， 置于冰箱保存， 有效期為60 d。新國標中，將阿斯巴甜標準儲備液濃度改為0.5 mg/mL，置于4 ℃左右冰箱保存，有效期為90 d，其標準使用液的系列濃度為 100 μg/mL、50 μg/mL、25 μg/mL、10.0 μg/mL、5.0 μg/mL，置于 4 ℃左右冰箱保存，有效期為30 d?？梢钥闯觯f國標中選取的使用液濃度較大，往往超過樣品所含阿斯巴甜濃度的數倍，而新國標中使用液濃度較小，基本涵蓋了樣品中所含阿斯巴甜的濃度，且有效期的縮短，保證了標準使用液的有效性，更加科學合理。

5 分析結果的表述

新國標增加了“結果保留3位有效數字”的規(guī)定，使方法數據結果更加嚴謹統(tǒng)一。

6 檢出限和定量限

舊國標中僅粗略規(guī)定樣品稱樣量為5 g、定容體積為25 mL、進樣量為20 μL時，方法檢出限為0.002 g/kg，定量限為0.006 g/kg，而新國標中，根據樣品類別的不同、前處理方法的不同，分別給定了檢出限與定量限（詳見表1），使方法更加嚴謹、規(guī)范，更具有科學性。

表1 新國標中各類食品中阿斯巴甜的檢出限和定量限

7 實驗驗證

根據新舊國標對前處理的改變，選取改動較大的果凍及膠基糖果進行實驗驗證。試驗步驟如下：選用市售含阿斯巴甜的果凍及膠基糖果-口香糖，分別根據新舊國標的前處理方法進行重復性對比驗證。

7.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀— Agilent HPLC配DAD檢測器、恒溫箱、自動進樣器以及Agilent 化學工作站；超聲波振蕩器；離心機：轉速≥4 000 r/min；甲醇；正己烷。

7.2 儀器參考條件

色譜柱—CAPCELL PAK C18 MGⅡ S5，4.6 mmI.D.×250 mm；柱溫：30 ℃；流動相：甲醇-水（40+60）；流速：0.8 mL/min；進樣量：20 μL；檢測波長：200 nm。

7.3 樣品前處理

因舊國標中，對果凍以及口香糖沒有明確的前處理方法，故選擇參照固體飲料的前處理步驟。具體條件如表2所示。

表2 新舊國標樣品前處理過程

7.4 標準曲線的繪制

根據樣品的實際情況，選取新國標中的濃度范圍配制標準曲線，具體濃度見表3。

表3 新國標中采用的標準曲線系列濃度

阿斯巴甜濃度與峰面積呈正相關，其線性回歸方程為：y= 55.87 178x，線性相關系數R為0.999 6，線性相關系數R≥0.999時可認為線性良好。

7.5 試驗結果及重復性比較

根據上述試驗條件，試驗結果及重復性比較見表4。

表4 試驗結果及重復性

試驗證明，新國標中對果凍及膠基糖果（口香糖）前處理方法的改進對阿斯巴甜提取能力有顯著提高。

8 結語

新國標對比舊國標，無論是從樣品的細化分類、前處理方式方法的改進、色譜條件的優(yōu)化、標準曲線的有效性和繪制，還是檢出限與定量限的改變，都有了更科學、更合理的改進，提高了目標組分的回收率，細化了檢出限與定量限，是目前比較完善科學的阿斯巴甜檢測方法。

[1]蔣定國，王竹天，楊大進、等.高效液相色譜法測定食品中阿斯巴甜的含量[J].中國衛(wèi)生檢驗，2007，17（6）.

[2]宋雁，樊永祥，李寧.阿斯巴甜的安全性評價進展情況[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2010，22（1）：84-87.

[3]吳燕.高效液相色譜同時測定食品中5種添加劑[J].上海預防醫(yī)學，2008，20（3）：113-115.

[4]劉郁，劉連新，燕傳勇，等.高效液相色譜測定茶飲料中的阿斯巴甜含量[J].現代食品科技，2012，28（12）：1810-1812.

[5]中華人民共和國衛(wèi)生部. GB 22254-2008食品中阿斯巴甜的測定[S].北京：中國標準出版社，2008.

[6]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會. GB 5009.263-2016食品安全國家標準 食品中阿斯巴甜和阿力甜的測定[S]. 北京：中國標準出版社，2016.