安清明，周輝通，劉 秀，李少斌，羅玉柱*，Jon G.Hickford*

(1.銅仁學(xué)院烏江學(xué)院，銅仁 554300； 2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅草食動物生物技術(shù)重點實驗室，蘭州 730070； 3.林肯大學(xué)基因標記實驗室，林肯 7646)

近年來，如何提高畜禽的生產(chǎn)性能并改善其產(chǎn)品質(zhì)量已逐漸成為動物學(xué)家們的主要研究目標，而從人類營養(yǎng)學(xué)角度來分析，畜禽脂肪組成成分的研究已成一種有效的手段。其中，脂肪組織因能夠分泌具有生物活性的脂肪因子而調(diào)節(jié)機體能量代謝，因此受到一定的關(guān)注，在脂肪因子調(diào)控過程中，包括了諸多相關(guān)基因的調(diào)控。脂聯(lián)素(Adiponetin，ADIPOQ、Acrp30或APM1)是一種脂肪細胞因子家族的成員，主要由ADIPOQ基因編碼，ADIPOQ基因最初于人類染色體上發(fā)現(xiàn)，定位于3q27，全長約17 kb，包含3個外顯子和2個內(nèi)含子[1-2]，其CDS區(qū)共編碼247個氨基酸。ADIPOQ蛋白分子量約為30 ku，主要包括4個結(jié)構(gòu)域：信號肽、可變區(qū)、N-膠原蛋白三螺旋區(qū)域和C-球狀區(qū)域。ADIPOQ主要分為兩種不同的蛋白：低分子量(LMW：low-molecular-weight)與高分子量(HMW：hight-molecular-weight)蛋白，其不同的結(jié)構(gòu)特性使得兩種不同蛋白在機體內(nèi)具有各自獨特的生物學(xué)功能[3-4]。

ADIPOQ主要通過與ADIPOQ受體(ADIPOR-1和ADIPOR-2)結(jié)合協(xié)同調(diào)節(jié)其生理功能。研究表明，ADIPOQ通過與ADIPOR相結(jié)合，能夠調(diào)節(jié)AMP激酶與PPAR配體活性，間接調(diào)節(jié)脂肪酸氧化和糖類攝取[5]，也參與胰島素的分泌調(diào)節(jié)[6]。同時，有研究表明，ADIPOQ可以通過調(diào)節(jié)PPAR-α刺激肌肉組織及腎中的脂肪酸氧化、減少甘油三酯的含量，從而改變生物體對胰島素的敏感度[7]。在家畜中，ADIPOQ基因遺傳變異對生產(chǎn)性狀具有一定影響。研究發(fā)現(xiàn)，豬ADIPOQ基因定位于13號染色體，能夠影響豬的背脂肪厚度、背最長肌脂肪酸鏈長度的相關(guān)QTL區(qū)域[8-9]，同時發(fā)現(xiàn)，啟動子區(qū)核苷酸c.-67G/A和c.-892C/T變異對豬胴體性狀及肉質(zhì)具有顯著影響[10]，內(nèi)含子g.1735A/G與豬肩部脂肪量具有顯著相關(guān)性[11]；牛ADIPOQ啟動子區(qū)核苷酸c.-176A/G與胴體性狀有相關(guān)性，c.-199C/T，c.-34G/A與背膘厚、眼肌面積具有一定相關(guān)性[12-13]。

綿羊ADIPOQ基因多態(tài)性變異已有報道，但其相關(guān)變異與綿羊生產(chǎn)性狀關(guān)聯(lián)性和性別差異關(guān)聯(lián)性的研究卻少有報道。本研究以新西蘭羅姆尼羊為研究對象，通過PCR-SSCP技術(shù)對羅姆尼羊群體進行遺傳變異及相關(guān)性分析，探究ADIPOQ基因單體型對不同性別羅姆尼羊生長性狀的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗樣品及表型測定

試驗于2014年6月—2015年8月在新西蘭林肯大學(xué)基因標記實驗室完成。1 185只新西蘭羅姆尼羊來自于新西蘭南島同一牧場的17只優(yōu)秀種公羊的子一代。羔羊出生12 h之內(nèi)佩戴耳標，測定記錄初生重、耳號、出生日期、性別和出生等級(單羔、雙羔或三羔)。3周齡左右斷尾并記錄斷尾重，同時用FTA卡收集血樣。3月齡斷奶，測定斷奶重，并計算所有羔羊斷奶前生長速度。由于在后期的相關(guān)性狀測定及單體型分析中，部分羔羊缺乏相關(guān)表型數(shù)據(jù)，因此，參與結(jié)果分析的具體羔羊數(shù)量與總數(shù)量存在一定差異。

1.2 試驗方法

1.2.1 基因組DNA提取 羔羊斷尾時用FTA卡采集血液，父本公羊從頸靜脈采血滴于FTA卡，自然晾干后置于陰涼處保存待用?；蚪MDNA采用H. Zhou等[14]所描述的兩步法提取。

1.2.2 引物設(shè)計及PCR擴增 根據(jù)綿羊全基因組序列中ADIPOQ基因序列(GenBank 登錄號：NC_019458.1)，應(yīng)用Primer 5.0自行設(shè)計2對不同區(qū)域引物(啟動子區(qū)和部分外顯子3區(qū))，用于基因多態(tài)性、單體型及相關(guān)性分析，引物由Integrated DNA Technologies(Coralville, IA, USA)合成。引物1：F：5′-TTCCTGCTTCTGATCTTGACC-3′；R：5′-CAGCCTAGAAATTGAATCAGTC-3′；引物2：F: 5′-GGTCTTCTTGTTCTCTAGGTC-3′；R：5′-TGGTCCACGTTCTGGTTCTG-3′。

PCR反應(yīng)體系(20 μL)：其中1.2 mm DNA disk模板1個，2 μL 10×buffer緩沖液，2 μL 5×Q溶液，1.2 μL 3 μmol·L-1MgCl2溶液，1.2 μL 150 μmol·L-1dNTPs，1 μL 0.25 μmol·L-1上下游混合引物，0.1 μL 0.5 UTaq聚合酶和12.5 μL ddH2O。

PCR擴增條件：94 ℃預(yù)變性2 min；94 ℃變性30 s，退火(引物1和引物2均為58 ℃)30 s，72 ℃延伸30 s，共37個循環(huán)；最后72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.2.3 PCR產(chǎn)物的SSCP檢測 在20 μL PCR擴增產(chǎn)物中加入80 μL變性緩沖液(98%去離子甲酰胺、10 mmol·L-1EDTA、0.025%二甲苯氰、0.025%溴酚藍)，經(jīng)105 ℃熱變性5 min后立即置于冰水混合物中，然后將10 μL變性產(chǎn)物上樣于不同濃度聚丙烯酰胺凝膠中，在相應(yīng)引物所需條件下進行SSCP電泳(引物1：300 V電壓17.0 ℃溫控環(huán)境電泳19 h；引物2：200 V電壓20.0 ℃溫控環(huán)境電泳19 h)。結(jié)束后根據(jù)S. O. Byun等[15]描述具體步驟進行銀染顯色，判斷相應(yīng)基因型。

1.2.4 單體型判定 若所檢測子代兩個不同區(qū)域之間的基因型有任何一段區(qū)域的基因型為純合型，可直接判定ADIPOQ基因兩段區(qū)域之間的單體型。如：子代區(qū)域1的基因型為A1A1，而區(qū)域2的基因型為A2B2，那么子代的單體型可直接推斷為A1-A2和A1-B2。若所檢測的子代兩個不同區(qū)域之間的基因型均為雜合型，那么可根據(jù)父本單體型及同一公羊生育子代單體型來判斷該子代單體型。如父本的單體型為A1-B2/B1-C2，那么子代有50%的概率繼承其中的一條單體型，同時根據(jù)同一父本產(chǎn)生后代來推斷該子代單體型。

1.3 數(shù)據(jù)分析

本研究利用Mintab (Version 16，Minitab Inc.，Pennsylavania) 一般線性混合效應(yīng)模型評估特定單體型的存在/缺失對生長性能的影響。對某一特定性狀存在(1)、缺失(0)分析模型中，單體型、家系影響、出生等級/初生重為固定因素，遵從下列模型進行最小二乘方差分析：

Yiknm=μ+Gi+Mk+Fm+Xn+eiknm

其中，Yiknm為相應(yīng)性狀表型值，μ為群體均值，Gi為家系效應(yīng)，Mk為出生等級效應(yīng)/初生重(取決于誰對模型更具影響力)，F(xiàn)m為單體型或雙體型，Xn為因素間互作效應(yīng)，eiknm為隨機誤差。

在進行特定單體型存在/缺失分析時，對P<0.2的單體型要進行互作效應(yīng)校正相關(guān)性數(shù)據(jù)。如進行ADIPOQ基因某一單體型對初生重的相關(guān)分析時，若單體型A1-A2、A1-B2和B1-C2的P值分別為0.003、0.014和0.450時，那么應(yīng)在模型中同時校正分析單體型A1-A2和A1-B2對初生重的影響P值。在分析雙體型對性狀的影響時，只對頻率大于10.00%的雙體型進行分析。所有數(shù)據(jù)均采用“平均值±標準誤”表示，P<0.05 為顯著水平，P<0.2 為有影響趨勢，P> 0.2 為無影響。

2 結(jié) 果

2.1 不同性別羔羊ADIPOQ基因單體型頻率分析

在所檢測的1 185只羔羊中，共檢測到8種由區(qū)域1中的4個等位基因(A1、B1、C1和D1；已提交GenBank，序列號為：KP903754～KP903757)和區(qū)域2中的3個等位基因(A2、B2和C2；已提交GenBank，序列號為：KP903762～KP903764)構(gòu)成的不同單體型，分別為A1-A2、A1-B2、A1-C2、B1-A2、B1-B2、B1-C2、D1-A2和D1-C2(其余推斷也應(yīng)存在的4種單體型在本試驗沒有檢測到)，單體型分型示意結(jié)果見圖1，SSCP檢測結(jié)果見圖2。本試驗所檢測到的8種單體型中A1-A2、A1-C2、B1-A2和B1-C2最為普遍，其它4種單體型較為稀少(頻率小于5.00%)，且單體型D1-A2和D1-C2只在母羔中檢測到，具體頻率見表1。

----代表本試驗檢測到的單體型；代表本試驗沒有檢測到的單體型----Represents the haplotypes detected in this study； Represents the haplotypes not detected in this study圖1 羅姆尼羊ADIPOQ基因單體型Fig.1 Haplotypes of ADIPOQ in Romney sheep

表1不同性別羔羊ADIPOQ基因橫跨區(qū)域1與區(qū)域2的單體型頻率

Table1HaplotypesfrequenciesofmaleandfemalelambsADIPOQspanningregion1toregion2

單體型Haplotype公羔頻率/%Frequencyinmalelambs母羔頻率/%FrequencyinfemalelambsA1-A237.4136.25A1-C28.598.53B1-A246.2146.87B1-C26.666.33A1-B20.300.30B1-B20.831.12D1-A20.000.30D1-C20.000.30

2.2 不同性別羔羊ADIPOQ基因單體型與生長性狀關(guān)聯(lián)性分析

本試驗所檢測到的8種單體型中，A1-B2、B1-B2、D1-A2和D1-C2在羅姆尼羊中的頻率小于5.00%，樣本較為稀少，不能用于相關(guān)性分析，因此，本試驗只對單體型A1-A2、A1-C2、B1-A2和B1-C2進行性別差異的生長性狀關(guān)聯(lián)性分析，數(shù)據(jù)分析時將所有公羔和母羔置于同一群體模型中與本試驗結(jié)果分析比較校正，將性別作為影響因素進行GLMs混合模型分析，結(jié)果表明，所有檢測單體型均對羔羊生長性狀無顯著影響(結(jié)果未列出)。

對具有完整數(shù)據(jù)及基因單體型特征的456只公羔和450只母羔進行單體型存在與缺失分析，結(jié)果表明，公羔中存在單體型A1-A2的群體具有較低的斷尾重(存在：(12.91±0.55) kg，缺失：(13.54±0.55) kg；P=0.033)，斷奶重(存在：(30.28±0.91) kg，缺失：(31.41±0.91) kg；P=0.020)和斷奶前生長速度(存在：(287.3±9.4) g·d-1，缺失：(298.6±9.4) g·d-1；P=0.026)；未發(fā)現(xiàn)單體型A1-A2與羔羊初生重有顯著相關(guān)性。其它3種單體型在公羔中均沒有發(fā)現(xiàn)與羅姆尼羊生長性狀具有顯著相關(guān)性。在母羔中，4種單體型均沒有發(fā)現(xiàn)與生長性狀具有顯著相關(guān)性(表2)。

雙體型檢測結(jié)果表明，公、母羔的生長性狀與雙體型之間均沒有顯著相關(guān)性(結(jié)果未列出)。

3 討 論

單體型(Haplotype)是指在遺傳學(xué)上同一染色體上多個基因座位或一個基因中多個位點共同連鎖的變異，具有比單核苷酸變異更高的多態(tài)性信息含量，能夠運用連鎖的多個基因或位點進行協(xié)同基因標記，因此，單體型較單個SNP位點具有更高的遺傳標記意義及可靠性[16-18]。

本研究檢測了綿羊ADIPOQ基因不同區(qū)域單體型的變異情況，同時分析了不同性別羔羊ADIPOQ基因單體型差異對生長性狀的影響。本試驗選取間隔約11 kb的兩段區(qū)域進行單體型檢測，理論上來講，兩段區(qū)域可以共建12種不同單體型，但本試驗中只檢測到8種不同單體型，與Q.M.An等[19]已報道的單體型稍有不同，Q.M.An等檢測到D1-C3的單體型在本研究中沒有檢測到與之相對應(yīng)的單體型，且另外4種單體型本試驗中亦沒有檢測到，這可能由于本研究只對單一綿羊品種(羅姆尼羊)進行單體型檢測，也可能是由于該單體型在羅姆尼羊中存在的頻率較低，本研究所選用的群體中沒有包含，或者是該單體型對綿羊的經(jīng)濟性狀有一定的影響，牧民在長期人工選擇的過程中已將含有該單體型的羊只淘汰，因此，在更多綿羊群體或種群中進一步研究綿羊ADIPOQ基因單體型的進化史和變異是必要的，其或許能更進一步證實本研究的結(jié)果。

本試驗檢測得到的10個SNPs位點中7個位于啟動子區(qū)、3個位于編碼區(qū)，雖然目前很難具體確定啟動子區(qū)域內(nèi)核苷酸突變的具體生物學(xué)功能，但已有研究表明，在人類ADIPOQ基因啟動子區(qū)域，存在許多具有一定生理學(xué)功能的位點，如SP1、SREBP、AP1及C/EBP等位點[20]。本研究在啟動子區(qū)所檢測到的突變位點與人類ADIPOQ基因檢測到的突變位點(c.-11377C/G、c.-19166T/G、c.-11426A/G和c.-11391G/A)位置極其相近，其中核苷酸突變位點c.-11377C/G已被確認存在于SP1結(jié)合位點上，且其堿基G突變導(dǎo)致SP1結(jié)合位點的改變，能夠降低ADIPOQ的生物活性[21]；而其它3個 核苷酸突變位點(c.-19166T/G、c.-11426A/G和c.-11391G/A)已被檢測與II型糖尿病及肥胖有一定的關(guān)聯(lián)性[22]。3個位于編碼區(qū)的核苷酸突變中2個核苷酸突變(c.225和c.387)為同義突變，另外1個(c.515G/A)為非同義突變，其突變導(dǎo)致了172位賴氨酸(Lys)/精氨酸(Arg)改變，且該氨基酸突變位于ADIPOQ蛋白的球狀結(jié)構(gòu)域中，其可能會改變ADIPOQ蛋白的空間結(jié)構(gòu)，進而可能會影響到蛋白的生物學(xué)功能。如已有研究表明，人類ADIPOQ基因第2外顯子rs2241766 G/T和第3外顯子rs17366743 C/T的核苷酸突變與多個人群的ADIPOQ表達水平有一定關(guān)聯(lián)性[23]，因此，本研究中發(fā)現(xiàn)的3個編碼區(qū)突變值得進一步確定其具體的生理功能。

A. ADIPOQ基因擴增區(qū)域示意圖；B. 2個不同區(qū)域的特異擴增ADIPOQ基因?qū)?yīng)SSCP示意圖；C. 所檢測2個區(qū)域SNPs位點示意圖A. Diagram showing the regions of ADIPOQ amplified; B. PCR-SSCP banding patterns for the two regions of ovine ADIPOQ amplified; C. The SNPs detected for ovine ADIPOQ in the two regions圖2 ADIPOQ基因SSCP檢測示意圖Fig.2 Diagram of SSCP detection of ADIPOQ gene

本試驗共檢測到8種單體型，且其在公羔與母羔群體之間的分布存在差異。單體型D1-A2和D1-C2只在本試驗?zāi)父崛后w中檢測到。這可能是本試驗的公羔群體數(shù)量較少，沒有檢測到該單體型，或者是由于這兩種單體型在綿羊群體中本身就存在性別差異。而單體型與生長性狀關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果表明，單體型A1-A2與公羔群體的斷尾重、斷奶重及斷奶前生長速度存在顯著關(guān)聯(lián)性，而對母羔群體的生長性狀無顯著影響，這進一步表明，ADIPOQ基因單體型在綿羊群體中存在性別差異。人類ADIPOQ

基因性別差異研究結(jié)果表明，在非洲裔美國人群體中，ADIPOQ基因變異對其在機體中表達水平與肥胖具有性別差異，其變異與非洲裔美國人群體的婦女肥胖有一定關(guān)聯(lián)性[24]。同樣，目前在一些對肌肉生長具有調(diào)控作用的基因中也發(fā)現(xiàn)其存在一定的性別差異性，如S. Reisz-Porszasz等[25]發(fā)現(xiàn)，MSTN基因只在雄性小鼠中發(fā)現(xiàn)，可能對其肌肉具有抑制作用，J. Han等[26]發(fā)現(xiàn)，MSTN基因變異在羅姆尼羊中存在性別比例差異。沈留紅等[27]發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素(ADIPOQ基因)mRNA和蛋白表達水平對奶牛犢牛的初生重有較大影響，Y. S. Lee等[28]發(fā)現(xiàn)，WFIKKN2基因變異與不同時期小鼠的肌肉重存在性別關(guān)聯(lián)性差異，J.Q.Wang等[29]發(fā)現(xiàn)，WFIKKN2基因變異與羅姆尼羊生長性狀存在性別差異。因此，可以推斷本研究分析所得ADIPOQ基因單體型對綿羊生長性狀的影響具有性別差異有一定依據(jù)，有必要進一步加大群體數(shù)量研究其變異在在性別差異中的有效機制，從而驗證本研究的結(jié)果。

單體型與生長性狀關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果表明，單體型與公羔群體斷尾重、斷奶重和斷奶前生長速度存在顯著關(guān)聯(lián)性，且存在單體型A1-A2的公羔群體較缺失群體有較低的斷尾重、斷奶重和斷奶前生長速度。若羔羊在100日齡斷奶，且忽略初生重之間的差異，那么存在單體型A1-A2的群體斷奶重較缺失群體少1.13 kg，生長速度每天少增長11.3 g，即從出生到斷奶每只綿羊平均少增長1.13 kg體重。而在實際育種生產(chǎn)過程中，一般在斷奶期屠宰體重達標的公羔，降低群體飼養(yǎng)成本提高收益，而將母羔留作繁殖母體進行群體繁殖，從而提高實際收益及育種效率。因此，本研究結(jié)果在實際生產(chǎn)中，運用單體型A1-A2的存在與否，可在綿羊育種過程中篩選出斷奶前生長速度較快的公羔群體，從而提高綿羊生產(chǎn)性能，增加經(jīng)濟收益。

4 結(jié) 論

本研究通過綿羊ADIPOQ基因單體型檢測，共發(fā)現(xiàn)ADIPOQ基因的8種單體型構(gòu)型，且其對綿羊生長性狀的影響存在性別差異，結(jié)果表明，單體型只對綿羊公羔群體生長性能存在顯著影響，該結(jié)果在生產(chǎn)育種中對提高公羔生長性能、增加屠宰產(chǎn)出具有理論指導(dǎo)意義。

參考文獻(References)：

[1] SCHERER P E, WILLIAMS S, FOGLIANO M, et al. A novel serum protein similar to C1q, produced exclusively in adipocytes[J].JBiolChem, 1995, 270(45): 26746-26749.

[2] HSUEH W C, ST. JEAN P L, MITCHELL B D, et al. Genome-wide and fine-mapping linkage studies of type 2 diabetes and glucose traits in the Old Order Amish: evidence for a new diabetes locus on chromosome 14q11 and confirmation of a locus on chromosome 1q21-q24[J].Diabetes, 2003, 52(2): 550-557.

[3] PAJVANI U B, DU X L, COMBS T P, et al. Structure-function studies of the adipocyte-secreted hormone Acrp30/adiponectin implications for metabolic regulation and bioactivity[J].JBiolChem, 2003, 278(11): 9073-9085.

[4] WANG Z V, SCHRAW T D, KIM J Y, et al. Secretion of the adipocyte-specific secretory protein adiponectin critically depends on thiol-mediated protein retention[J].MolCellBiol, 2007, 27(10): 3716-3731.

[5] YAMAUCHI T, KAMON J, ITO Y, et al. Cloning of adiponectin receptors that mediate antidiabetic metabolic effects[J].Nature, 2003, 423(6941): 762-769.

[6] KHARROUBI I, RASSCHAERT J, EIZIRIK D, et al. Expression of adiponectin receptors in pancreatic β cells[J].BiochemBiophysResCommun, 2003, 312(4): 1118-1122.

[7] YAMAUCHI T, HARA K, KUBOTA N, et al. Dual roles of adiponectin/Acrp30invivoas an anti-diabetic and anti-atherogenic adipokine[J].CurrDrugTargetsImmuneEndocrMetabolDisord, 2003, 3(4): 243-254.

[8] LIU G, JENNEN D G J, THOLEN E, et al. A genome scan reveals QTL for growth, fatness, leanness and meat quality in a Duroc-Pietrain resource population[J].AnimGenet, 2007, 38(3): 241-252.

[9] GUO T, REN J, YANG K, et al. Quantitative trait loci for fatty acid composition in longissimus dorsi and abdominal fat: results from a White Duroc × Erhualian intercross F2population[J].AnimGenet, 2009, 40(2): 185-191.

[10] CIESLAK J, FLISIKOWSKA T, SCHNIEKE A, et al. Polymorphisms in the promoter region of the adiponectin (ADIPOQ) gene are presumably associated with transcription level and carcass traits in pigs[J].AnimGenet, 2013, 44(3): 340-343.

[11] DAI L H, XIONG Y Z, DENG C Y, et al. Association of the A-G polymorphism in porcine adiponectin gene with fat deposition and carcass traits[J].Asian-AustralasJAnimSci, 2006, 19(6): 779-783.

[12] MORSCI N S, SCHNABEL R D, TAYLOR J F. Association analysis ofadiponectinandsomatostatinpolymorphisms on BTA1 with growth and carcass traits in Angus cattle[J].AnimGenet, 2006, 37(6): 554-562.

[13] SHIN S, CHUNG E. Novel SNPs in the bovineADIPOQandPPARGC1Agenes are associated with carcass traits in Hanwoo (Korean cattle)[J].MolBiolRep, 2013, 40(7): 4651-4660.

[14] ZHOU H, HICKFORD J G H, FANG Q. A two-step procedure for extracting genomic DNA from dried blood spots on filter paper for polymerase chain reaction amplification[J].AnalBiochem, 2006, 354(1): 159-161.

[15] BYUN S O, FANG Q, ZHOU H, et al. An effective method for silver-staining DNA in large numbers of polyacrylamide gels[J].AnalBiochem, 2009, 385(1): 174-175.

[16] MORRIS R W, KAPLAN N L. On the advantage of haplotype analysis in the presence of multiple disease susceptibility alleles[J].GenetEpidemiol, 2002, 23(3): 221-233.

[17] ZHOU H T, HICKFORD J G H, FANG Q, et al. Allelic variation of the ovine Toll-like receptor 4 gene[J].DevCompImmunol, 2007, 31(2): 105-108.

[18] GONG H, ZHOU H T, YU Z D, et al. Identification of the ovine keratin-associated protein KAP1-2 gene (KRTAP1-2)[J].ExpDermatol, 2011, 20(10): 815-819.

[19] AN Q M, ZHOU H T, HU J, et al. Haplotypes and sequence variation in the ovine adiponectin gene (ADIPOQ)[J].Genes, 2015, 6(4): 1230-1241.

[20] BARTH N, LANGMANN T, SCH?LMERICH J, et al. Identification of regulatory elements in the human adipose most abundant gene transcript-1 (apM-1) promoter: role of SP1/SP3 and TNF-α as regulatory pathways[J].Diabetologia, 2002, 45(10): 1425-1433.

[21] ZHANG D Y, MA J, BRISMAR K, et al. A single nucleotide polymorphism alters the sequence of SP1 binding site in the adiponectin promoter region and is associated with diabetic nephropathy among type 1 diabetic patients in the Genetics of Kidneys in Diabetes Study[J].JDiabetesComplications, 2009, 23(4): 265-272.

[22] CHUNG H F, LONG K Z, HSU C C, et al. Adiponectin gene (ADIPOQ) polymorphisms correlate with the progression of nephropathy in Taiwanese male patients with type 2 diabetes[J].DiabetesResClinPract, 2014, 105(2): 261-270.

[23] GU H F. Biomarkers of adiponectin: plasma protein variation and genomic DNA polymorphisms[J].BiomarkInsights, 2009, 4: 123-133.

[24] RIESTRA P, GEBREAB S Y, XU R H, et al. Gender-specific associations betweenADIPOQgene polymorphisms and adiponectin levels and obesity in the Jackson Heart Study cohort[J].BMCMedGenet, 2015, 16: 65.

[25] REISZ-PORSZASZ S, BHASIN S, ARTAZA J N, et al. Lower skeletal muscle mass in male transgenic mice with muscle-specific overexpression of myostatin[J].AmJPhysiolEndocrinolMetab, 2003, 285(4): E876-E888.

[26] HAN J, ZHOU H, FORREST R H, et al. Effect of Myostatin (MSTN) g+6223G > A on production and carcass traits in New Zealand Romney Sheep[J].Asian-AustralasJAnimSci, 2010, 23(7): 863-866.

[27] 沈留紅, 江 濤, 巫曉峰, 等. 奶牛胎盤脂聯(lián)素、瘦素、內(nèi)脂素與犢牛初生重相關(guān)性研究[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報, 2017, 48(1): 185-192.

SHEN L H, JIANG T, WU X F, et al. The correlation between adiponectin, leptin, visfatin in placenta and calf birth weight[J].ActaVeterinariaetZootechnicaSinica, 2017, 48(1): 185-192. (in Chinese)

[28] LEE Y S, LEE S J. Regulation of GDF-11 and myostatin activity by GASP-1 and GASP-2[J].ProcNatlAcadSciUSA, 2013, 110(39): E3713-E3722.

[29] WANG J Q, ZHOU H T, FANG Q, et al. Effect of variation in ovineWFIKKN2 on growth traits appears to be gender-dependent[J].SciRep, 2015, 5: 12347.