劉 林，羅文學(xué)，官思成，彭 永，李 成，劉永建

（四川農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，成都 611130）

煙草（Nicotiana tabacum）是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物，煙草已經(jīng)成為美國(guó)第6種重要作物；在地方經(jīng)濟(jì)發(fā)展、國(guó)家財(cái)政累積等方面煙草行業(yè)的重要性突出，許多國(guó)家資金收入也來(lái)源于煙草行業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。我國(guó)煙葉生產(chǎn)約占世界總量的三分之一，是世界上最大的煙草生產(chǎn)國(guó)和消費(fèi)國(guó)，2005年，全世界煙葉產(chǎn)量預(yù)計(jì)為503.9萬(wàn)t，其中烤煙產(chǎn)量將達(dá)到387.34萬(wàn)t，我國(guó)烤煙產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的46.78%，預(yù)計(jì)可達(dá)181.2萬(wàn)t[1]。目前，我國(guó)已形成以烤煙為主體，白肋煙、香料煙等類型齊全多樣的煙草類群。保證煙草生產(chǎn)質(zhì)量的前提是優(yōu)良種質(zhì)的使用，我國(guó)煙草種質(zhì)資源雖然豐富，但種質(zhì)資源挖掘和創(chuàng)新力度不夠、過(guò)度依賴骨干系等是目前育種上面臨的問(wèn)題[2]。單一育種目標(biāo)的定向選擇導(dǎo)致親本集中在少數(shù)核心種質(zhì)資源上[3]，豐富的種質(zhì)資源及合理的親本選配是育種計(jì)劃成功的關(guān)鍵[4]，煙草遺傳多樣性的測(cè)定在品種鑒定和育種計(jì)劃中具有很高的應(yīng)用潛力。

煙草種質(zhì)資源遺傳多樣性與親緣關(guān)系分析中廣泛應(yīng)用分子標(biāo)記技術(shù)，SSR分子標(biāo)記相對(duì)其他分子標(biāo)記技術(shù)存在一些顯著優(yōu)點(diǎn)，如穩(wěn)定性好、信息量豐富、操作簡(jiǎn)便等[5]。與其他作物相比，煙草SSR分子標(biāo)記技術(shù)的研究起步較晚，直到2007年，G.Bindler等[6]首次報(bào)道了煙草的微衛(wèi)星標(biāo)記并利用這些標(biāo)記構(gòu)建了遺傳圖譜，總共282個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記擴(kuò)增的293個(gè)SSR位點(diǎn)被定位到煙草24個(gè)連鎖群（染色體）上，并公布了278對(duì)煙草SSR引物。此后，SSR分子標(biāo)記在煙草種質(zhì)資源遺傳多樣性與親緣關(guān)系中的研究才得以實(shí)現(xiàn)。劉勝傳等[7]利用SSR分子標(biāo)記對(duì)32份不同類型的煙草種質(zhì)進(jìn)行遺傳多樣性分析，建議盡可能選擇遺傳距離大的品種進(jìn)行雜交育種；徐軍等[8]利用8個(gè)SSR標(biāo)記在80份普通煙草種質(zhì)中共檢測(cè)到85個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，8個(gè)SSR標(biāo)記可以完全區(qū)分80份煙草種質(zhì)，表明SSR標(biāo)記完全適用于普通煙草種質(zhì)鑒定。張雪廷等[9]利用SSR引物對(duì)38份晾曬煙種質(zhì)資源的遺傳關(guān)系進(jìn)行了分析，30對(duì)SSR引物共檢測(cè)到173個(gè)等位基因位點(diǎn)，遺傳相似系數(shù)（GS）的變化范圍為0.140～0.928，平均為0.534，表明38份晾曬煙的遺傳多樣性豐富，遺傳差異較大，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)；聚類結(jié)果顯示遺傳相似系數(shù)為0.165時(shí)，美國(guó)從煙草起源地收集的材料Ti245和Ti112能與其他36份晾曬煙栽培品種區(qū)分開(kāi)，表明SSR標(biāo)記能從分子水平上揭示晾曬煙種質(zhì)資源的遺傳背景和親緣關(guān)系。

本文從278對(duì)煙草SSR引物中篩選出分布在21個(gè)連鎖群上的56對(duì)穩(wěn)定性高、多態(tài)性好的引物，對(duì)搜集的59份烤煙種質(zhì)進(jìn)行遺傳差異分析，從分子水平上揭示烤煙種質(zhì)之間的遺傳距離，以便為充分發(fā)掘、利用烤煙種質(zhì)資源，合理選配親本和高效育種等提供重要理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試材料

參試烤煙材料共59份，分別來(lái)自中國(guó)、美國(guó)、津巴布韋、巴西等國(guó)家（見(jiàn)表1），均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所提供。

1.2 DNA提取

本研究采用CTAB改良法提取DNA[10]，將DNA晾干后加入100 μL無(wú)菌水，放在常溫下待DNA沉淀溶解后加入0.1 μL RNase，常溫下放置24 h，然后放于4℃冰箱中保存，或置于-20℃或-70℃冰箱中長(zhǎng)期保存。

1.3 SSR引物

本試驗(yàn)所用的SSR引物序列均來(lái)自G.Bindler等[6]于2007年公布的引物，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行引物篩選，從280對(duì)SSR引物中選出56對(duì)穩(wěn)定性高、多態(tài)性好的SSR引物，均由寶生物工程（大連）有限公司合成。

1.4 PCR擴(kuò)增

擴(kuò)增體系為 20 μL：含 25 ng 的 DNA，1.5 U Taq DNA聚合酶，MgCl2在體系中的濃度為1.5 mmol/L，濃度為200 μmol/L的dNTPs，正反向引物的濃度均為 0.05 μmol/L。

擴(kuò)增程序：94℃預(yù)變性3 min；94℃變性1 min，55℃退火 1 min，72℃延伸 2 min，40個(gè)循環(huán)；72℃延伸7 min；4℃保存。

用6%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳來(lái)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物，電泳緩沖液為1×TBE，恒壓300 V，溴酚藍(lán)離膠底部2～3 cm處結(jié)束電泳，然后銀染，拍照保存。

表1 供試煙草材料Table 1 The selected flue-cured tobacco material

續(xù)表

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

選擇帶型清晰且穩(wěn)定性好的電泳圖譜，清晰且可重復(fù)出現(xiàn)的條帶記為“1”，相同遷移位點(diǎn)上無(wú)條帶記為“0”，建立數(shù)據(jù)矩陣。

按Nei&Li的公式[12]計(jì)算供試材料間的遺傳距離：

其中，Nij為材料i和j共有的擴(kuò)增條帶數(shù)；Ni為材料i的擴(kuò)增條帶數(shù)；Nj為材料j的擴(kuò)增條帶數(shù)。把距離矩陣保存成txt文件，用MEGA6.0[13]構(gòu)建樹(shù)狀聚類圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 擴(kuò)增結(jié)果

利用上述56對(duì)SSR引物對(duì)59份參試烤煙種質(zhì)（見(jiàn)表1）進(jìn)行擴(kuò)增（引物的擴(kuò)增結(jié)果見(jiàn)圖1），SSR反應(yīng)擴(kuò)增的片段長(zhǎng)度在50～500 bp范圍內(nèi)，共檢測(cè)到等位基因位點(diǎn)271個(gè)，每個(gè)標(biāo)記檢測(cè)到的位點(diǎn)數(shù)為2～12個(gè)，平均多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)為4.8個(gè)；其中241個(gè)位點(diǎn)具有多態(tài)性，多態(tài)性位點(diǎn)的比例為88.93%，每個(gè)標(biāo)記檢測(cè)到的多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)為1～9個(gè)，平均多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)為4.3個(gè)，檢測(cè)到的多態(tài)性位點(diǎn)最多的引物是 PT20289，為 9 個(gè)，引物 PT30307、PT30107、PT30292和PT30480擴(kuò)增的多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)最少，只有 1個(gè)。引物 PT30307、PT30098、PT30107和PT30140擴(kuò)增位點(diǎn)的多態(tài)性比率分別為33.3%、37.5%、33.3%和37.5%，其他引物擴(kuò)增位點(diǎn)的多態(tài)性比率均高于或等于50.0%。引物的PIC值變化范圍為 0.532～0.931，PCI值平均為 0.792，PIC 值最高的引物是PT20289，為0.931。這些多態(tài)性引物不均勻地分布在染色體上，其中具有差異的標(biāo)記較多的染色體是10和23（見(jiàn)表2）。

2.2 遺傳距離

由SSR數(shù)據(jù)估算出烤煙種質(zhì)間的遺傳距離，59份種烤煙種質(zhì)的遺傳距離在0.029～0.419之間，平均遺傳距離為0.214，大型黃金與NC82的遺傳距離較大，為0.419；Narrow Leaf Orinoco與Broad Leaf Orinoco的遺傳距離最小，為0.029。

2.2.1 不同地理來(lái)源烤煙的遺傳距離

為了比較不同地理來(lái)源之間的遺傳差異，將59份烤煙種質(zhì)進(jìn)行分組，比較各組間平均遺傳距離以及組內(nèi)平均遺傳距離（見(jiàn)表3），中國(guó)烤煙種質(zhì)平均遺傳距離最大為0.239，美國(guó)烤煙種質(zhì)平均遺傳距離為0.186，津巴布韋最小為0.122。不同地理來(lái)源烤煙種質(zhì)之間的平均遺傳距離在0.168～0.223之間，中國(guó)與美國(guó)烤煙品種之間的平均遺傳距離較大為0.223，中國(guó)與津巴布韋烤煙品種之間的平均遺傳距離為0.207，美國(guó)和津巴布韋烤煙品種之間的平均遺傳距離較小為0.168。

圖1 引物PT20287的擴(kuò)增結(jié)果Figure 1 Amplification results of PT20287

表2 56對(duì)SSR引物名稱、所在連鎖群、多態(tài)性信息含量、多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)及多態(tài)性比率Table 2 The name of 56 pairs of SSR primer，linkage group，number of polymorphic loci，the percentage of polymorphic loci and PIC of primer

表3 各組間及組內(nèi)平均遺傳距離Table 3 The average genetic distance between groups

2.2.2 烤煙選育品種與地方品種的遺傳距離比較

為了比較烤煙選育品種與地方品種之間的遺傳差異，根據(jù)選育方式將美國(guó)和中國(guó)的烤煙種質(zhì)進(jìn)行分組，比較各組間平均遺傳距離以及組內(nèi)平均遺傳距離（見(jiàn)表4）。美國(guó)烤煙選育品種和地方品種的平均遺傳距離分別為0.194和0.145，中國(guó)烤煙選育品種和地方品種的平均遺傳距離分別為0.202和0.289；美國(guó)選育品種和地方品種之間的平均遺傳距離較小為0.183，中國(guó)選育品種和地方品種之間的平均遺傳距離較大為0.271。

表4 各組間及組內(nèi)平均遺傳距離Table 4 The average genetic distance between groups

2.3 聚類結(jié)果

為了更直觀了解 59份烤煙種質(zhì)間的遺傳關(guān)系，利用56個(gè)SSR標(biāo)記產(chǎn)生的遺傳距離矩陣按UPGMA方法構(gòu)建了聚類圖（見(jiàn)圖2）。由圖2可以看出，第一等級(jí)劃分（L1取值為GD=0.13），可將59份烤煙種質(zhì)劃分為1個(gè)大類群、2個(gè)小類群和1個(gè)由單一烤煙種質(zhì)形成的獨(dú)立個(gè)類。第一大類為來(lái)自美國(guó)、中國(guó)和津巴布韋等6個(gè)國(guó)家的54份烤煙種質(zhì)，第二小類群包含一個(gè)選育品種中煙14和一個(gè)地方品種鎮(zhèn)雄烤煙，第三小類群包括2個(gè)烤煙地方品種，即凈葉黃和大型黃金，獨(dú)立個(gè)類是來(lái)自美國(guó)的Pofit Granville。第二等級(jí)劃分（L2取值為GD=0.09），可將54份烤煙種質(zhì)劃分為2個(gè)大類群，3個(gè)小類群和9個(gè)由單一烤煙種質(zhì)形成的獨(dú)立個(gè)類。①第一大類群（II1）共23份烤煙種質(zhì)，分別為Kutsaga 110、Kutsaga 51E、K326、Coker187-Hicks、Brand B、Virginia Toyer、Speight G28、Dixie Bright 101、云煙 2 號(hào)、中煙86、云煙87、中煙 103、峨山烤煙、貴煙1號(hào)、云煙116、云煙 110、云煙 119、MS 云煙 85、PVH1452、川煙 1 號(hào)、NC102、MS 云煙 87、MS Y01；②第二大類群（II2）包括 13 份烤煙種質(zhì)，分別為 NC82、Hicks 55、Coker 319、Coker 298、Yellow Orinoco、Vesta 33、Narrow Leaf Orinoco、Broad Leaf Orinoco、Hicks（Broad Leaf）、Hicks、Bright Yellow、Bell 15、小黃金；③第一小類群（II3）包括 K394、Vesta 64、紅花大金元、MS Y02 這 4份烤煙種質(zhì)；④第二小類群（II4）包括3個(gè)烤煙種質(zhì)，即NC2326、Oxford 26和柳葉尖2017；⑤第三小類群（II3）包括Ti448A以及由Ti 448A對(duì) MS Coker 176回交轉(zhuǎn)育的不育材料MS Y03；⑥9個(gè)獨(dú)立個(gè)類中包含5個(gè)地方品種，分別為Virginia Bright Leaf、豎葉子0987、Yellow Mammoth、永定401和小黃金0006，以及 Coker 258、Special 402、中煙 90 和云煙97這4個(gè)選育品種。

3 討論與結(jié)論

3.1 SSR標(biāo)記能有效反映烤煙種質(zhì)資源的遺傳差異

H.S.Moon等[14]利用46個(gè)SSR標(biāo)記對(duì)54份煙草材料進(jìn)行遺傳多樣性分析，其中包括7份普通煙草種質(zhì)或者品種，44份野生煙草種質(zhì)和3份合成雙二倍體材料，共檢測(cè)等位基因位點(diǎn)529個(gè)，平均每個(gè)SSR標(biāo)記檢測(cè)到11.5個(gè)等位基因。H.S.Moon等[15]利用69對(duì)煙草SSR引物對(duì)117份美國(guó)烤煙品種進(jìn)行遺傳多樣性分析，共檢測(cè)等位基因位點(diǎn)294個(gè)，每個(gè)標(biāo)記檢測(cè)到的等位基因位點(diǎn)數(shù)為2～12個(gè)，平均為4.26個(gè)，引物的PIC值變幅在0.009～0.862之間。H.S.Moon等[16]利用70個(gè)SSR標(biāo)記分析702份煙草材料，共檢測(cè)到等位基因位點(diǎn)1 031個(gè)，每個(gè)標(biāo)記檢測(cè)到的等位基因位點(diǎn)數(shù)為2～41個(gè)，平均為14.7個(gè)。何其芳等[17]利用SSR標(biāo)記技術(shù)分析了50份不同地理來(lái)源煙草種質(zhì)材料的遺傳多樣性，20對(duì)SSR引物共檢測(cè)到81個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，50份煙草種質(zhì)之間相似系數(shù)的變化范圍為0.53～0.97，平均每對(duì)引物檢測(cè)的多態(tài)位點(diǎn)數(shù)為4.1；PIC值的變幅為0.139～0.944，平均為0.548。本研究利用56對(duì)SSR引物對(duì)59份烤煙種質(zhì)進(jìn)行擴(kuò)增，共檢測(cè)出241個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，每個(gè)標(biāo)記檢測(cè)到的等位基因位點(diǎn)數(shù)為1～9個(gè)，平均為4.3個(gè)。本研究與H.S.Moon等[15]、何其芳等[17]的研究結(jié)果相似，而與H.S.Moon等[14，16]的研究結(jié)果存在較大差異，平均每個(gè)標(biāo)記檢測(cè)的等位基因數(shù)約是本試驗(yàn)的3倍，是由于H.S.Moon等[15]搜集到煙草材料種類多、數(shù)量大、地域廣，我們的試驗(yàn)材料雖然數(shù)量較大但種類比較單一，大部分烤煙種質(zhì)都是來(lái)自美國(guó)和中國(guó)。本研究SSR引物的PIC值變化范圍為0.532～0.931，平均約為0.793，PIC值最高的引物是PT20289，最低的是PT30292，56對(duì)SSR引物的PIC含量均高于0.5，說(shuō)明這些引物能鑒別煙草遺傳差異性。56個(gè)SSR標(biāo)記不均勻地分布在煙草24個(gè)連鎖群中，集中分布于 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、16、17、18、19、21、22、23 和 24 號(hào)連鎖群上，其中10和23號(hào)連鎖群均含有6個(gè)多態(tài)性標(biāo)記，4、17、21、22和24號(hào)連鎖群均只含有1個(gè)多態(tài)性標(biāo)記；試驗(yàn)所篩選出的56對(duì)SSR引物是Bindler針對(duì)煙草物種開(kāi)發(fā)的一系列微衛(wèi)星標(biāo)記，56個(gè)SSR標(biāo)記位點(diǎn)遍布煙草物種的21個(gè)連鎖群，覆蓋率達(dá)87.5%，說(shuō)明該分子標(biāo)記能夠較準(zhǔn)確的檢測(cè)出供試烤煙種質(zhì)的遺傳差異。上述結(jié)果表明SSR標(biāo)記能夠有效地反映烤煙種質(zhì)資源的遺傳差異。

圖2 基于SSR數(shù)據(jù)繪制供試材料間的聚類圖Figure 2 Dendrogram derived from cluster analysis based on SSR analysis method among the selected material

3.2 烤煙種質(zhì)資源遺傳基礎(chǔ)相對(duì)狹窄

G.Bindler等[6]利用SSR標(biāo)記對(duì)煙草品種的親緣關(guān)系進(jìn)行分析，16份普通煙草品種間的遺傳相似系數(shù)的變化范圍為0.212～0.918，聚類結(jié)果顯示，白肋煙、烤煙和香料煙分別聚為一類，只有深色晾曬煙沒(méi)有聚為一個(gè)類群。葉蘭欽等[18]發(fā)現(xiàn)云南主栽烤煙品種間的遺傳距離狹窄，13個(gè)品種之間遺傳距離的變化范圍為0.009 0～0.428 6，平均遺傳距離為0.223 7；可將13個(gè)品種劃分為一大類群和3個(gè)由單一烤煙種質(zhì)形成的獨(dú)立個(gè)類，第一大類群包括云煙系列、K326、K346以及G28，3個(gè)獨(dú)立各類分別是NC82、V2、紅花大金元。聶瓊等[19]利用22對(duì)番茄和辣椒的SSR引物對(duì)烤煙進(jìn)行遺傳差異分析，24份烤煙材料的遺傳相異系數(shù)在0.344 5～0.862 6之間；聚類結(jié)果顯示，24份材料可分為4大類，其聚類結(jié)果與實(shí)際親緣關(guān)系基本一致。吳興富等[20]利用48對(duì)分布在24條連鎖群上的SSR引物對(duì)烤煙品種的親緣關(guān)系進(jìn)行分析，33份烤煙品種間的遺傳相似性系數(shù)（GS）介于0.84～0.96之間，平均相似系數(shù)為0.90，表明33份烤煙品種間的遺傳差異較??；聚類結(jié)果顯示，在GS分別為0.894和0.910時(shí)可清晰地將美國(guó)引進(jìn)及合作選育的27份品種與國(guó)內(nèi)主栽品種區(qū)分開(kāi)。本研究中59份種烤煙種質(zhì)的遺傳距離介于0.029～0.419之間，平均遺傳距離為0.214，最大的遺傳距離不超過(guò)0.5，這與葉欽蘭等[18]、吳興富等[19]的研究結(jié)果相似，表明這些烤煙品種親緣關(guān)系較近、遺傳基礎(chǔ)狹窄，其中Narrow Leaf Orinoco與Broad Leaf Orinoco之間的遺傳距離最小，為0.029，這兩個(gè)品種都來(lái)自同一個(gè)原始種Orinoco。本研究中中國(guó)烤煙種質(zhì)的平均遺傳距離比美國(guó)、津巴布韋大，津巴布韋烤煙種質(zhì)的平均遺傳距離最小，可能是品種選育過(guò)程中偏向于某一骨干親本的使用；對(duì)選育品種和地方品種的比較發(fā)現(xiàn)中國(guó)地方品種的平均遺傳距離最大，美國(guó)地方品種最小，選育品種和中國(guó)地方品種之間的平均遺傳距離較大，中國(guó)烤煙地方品種是在自然條件下經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期自然選擇和人工選擇所形成的生態(tài)類型，國(guó)內(nèi)地方品種資源豐富，遺傳差異大，而美國(guó)地方品種都來(lái)自同一個(gè)原始種Orinoco，因此遺傳差異小。

聚類結(jié)果顯示在GD為0.13時(shí)能將部分地方品種區(qū)分開(kāi)；GD為0.09時(shí)，能大致將國(guó)內(nèi)烤煙種質(zhì)和國(guó)外引進(jìn)烤煙種質(zhì)區(qū)分開(kāi)，聚類結(jié)果與實(shí)際親緣關(guān)系一致，這與吳興富等[19]的研究結(jié)果相同，例如MS Y03與Ti448A聚為一類，MS Y01是Ti448A對(duì)MS Coker 176回交轉(zhuǎn)育的不育材料；但是仍有部分烤煙種質(zhì)如K326、Speight G28和Dixie Bright 101未區(qū)分開(kāi)，是由于我國(guó)南方烤煙選育的絕大部分品種主要來(lái)源于K326、紅花大金元，北方烤煙育種大多數(shù)使用G28、凈葉黃和紅花大金元等主體親本，種質(zhì)資源引進(jìn)以及利用優(yōu)良種質(zhì)雜交育種造成不同地理來(lái)源的煙草種質(zhì)遺傳背景混合，而且不同國(guó)家使用的優(yōu)良品種顯示出類似的遺傳背景；聚類結(jié)果顯示烤煙材料并沒(méi)有完全按照地域來(lái)源區(qū)分開(kāi)，雖然烤煙材料來(lái)源于不同地域，但烤煙育種中使用的骨干親本基本相似，美國(guó)優(yōu)質(zhì)品種都是直接或間接來(lái)源于Orinoco[2]，我國(guó)目前推廣的種植品種絕大部分有美國(guó)品種親源，因此不同地域來(lái)源的烤煙不能區(qū)分開(kāi)；H.S.Moon等[15]發(fā)現(xiàn)微衛(wèi)星等位基因位點(diǎn)數(shù)總體趨勢(shì)是逐漸減少的，系譜法育種通過(guò)定向選擇減少不利等位基因頻率，有些等位基因也會(huì)因遺傳漂變而丟失，這種育種實(shí)踐中消極的一面就是導(dǎo)致現(xiàn)代種群內(nèi)遺傳變異大大減少，遺傳變異水平較低或降低可能會(huì)限制潛在重要農(nóng)藝性狀的遺傳改良。本研究與前人研究結(jié)果相同，烤煙品種之間的親緣關(guān)系很近、遺傳背景相似，存在遺傳基礎(chǔ)狹窄的問(wèn)題。

3.3 對(duì)烤煙新品種選育的指導(dǎo)意義

目前育種工作主要是系統(tǒng)選育和雜交育種等方法進(jìn)行，我國(guó)雜交育種過(guò)程中親本選配通常使用國(guó)外引進(jìn)的優(yōu)質(zhì)多抗品種以及國(guó)內(nèi)推廣優(yōu)良品種。國(guó)內(nèi)烤煙品種金星6007、凈葉黃和紅花大金元是我國(guó)育種中使用最多的親本，由金星6007育成延煙1號(hào)、中煙14、革新3號(hào)、中煙15等品種，由凈葉黃育成單育2號(hào)、中煙86、許金4號(hào)、慶勝2號(hào)等品種，由紅花大金元育成中煙103、中煙104、南江3號(hào)、中煙101、云煙2號(hào)、遼煙11號(hào)、中煙9203等品種[21-23]；Speight G-28、K326和NC89等美國(guó)引進(jìn)品種是我國(guó)主栽烤煙品種品質(zhì)性狀的骨干親本，由G28育成云煙85、云煙87、云煙97、秦?zé)?1號(hào)、秦?zé)?6、吉煙7號(hào)、中煙90、中煙98和G80等品種，由K326育成K346、RG17、貴煙 4 號(hào)、秦?zé)?95、中煙 201 和 KRK26等品種，由NC89育成的烤煙品種有貴煙11、秦?zé)?號(hào)、秦?zé)?5、豫煙3號(hào)、中煙102等[23-24]。親本組配除了國(guó)外引進(jìn)品種與國(guó)內(nèi)推廣品種或地方品種外，還可以是我國(guó)南方烤煙品種與北方烤煙品種組配，中煙103是中國(guó)煙草遺傳研究（北方）研究中心從紅花大金元自然群體中獲得變異株，經(jīng)系統(tǒng)選育而成[25]；秦?zé)?01是南方品種MS云煙97與北方品種秦?zé)?6組配而成的雄性不育雜交種。育種過(guò)程中在親本選配方面不僅要考慮親本的地理來(lái)源，更要考慮親本的遺傳距離大小[26]。中國(guó)農(nóng)科院煙草研究所以Speight G-28為母本，以抗赤星病品種凈葉黃為父本進(jìn)行雜交，育成中煙86[27]，本研究中Speight G-28和凈葉黃之間的遺傳距離為0.228，遺傳距離較大；云煙2號(hào)是用紅花大金元和Speight G-28雜交選育而成[28]，紅花大金元和Speight G-28之間的遺傳距離為0.220，遺傳距離較大；云煙85與其姊妹種云煙87是用紅花大金元與Speight G-28雜交選育的云煙2號(hào)和K326雜交，經(jīng)系譜選擇培育而成[29-30]，云煙2號(hào)和K326之間的遺傳距離為0.158，遺傳差異相對(duì)較小，是由于云煙2號(hào)的親本之一是Speight G-28，而K326和Speight G-28的親本都含有Coker 139的親源。從主栽品種親本來(lái)源可以看出，親本使用集中、遺傳基礎(chǔ)狹窄是制約我國(guó)烤煙育種發(fā)展的主要因素。

3.4 結(jié)論

本研究中我國(guó)地方品種表現(xiàn)出較大的遺傳差異，應(yīng)深入研究地方品種性狀，加大國(guó)內(nèi)地方種質(zhì)資源的發(fā)掘、利用，拓寬煙草遺傳背景，烤煙育種親本組配應(yīng)選擇遺傳差異大的烤煙品種，比如國(guó)外引進(jìn)優(yōu)良種質(zhì)與國(guó)內(nèi)地方種質(zhì)組配、國(guó)內(nèi)優(yōu)良種質(zhì)與地方品種組配，這些地方種質(zhì)提供了寶貴的基因庫(kù)，為中國(guó)烤煙育種計(jì)劃提供了寶貴的種質(zhì)資源。因此，遺傳差異研究為煙草品種改良、雜交育種的親本選配和提高育種效率提供了理論依據(jù)。

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