張三粉，王麗芳，杜 琳，宋 潔，馮小慧，康博洋，崔 艷，駱 洪

［內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院資源環(huán)境與檢測技術(shù)研究所 農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估實驗室（呼和浩特），內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031］

隨著居民生活水平的日益提高，牛奶已經(jīng)成為人們?nèi)粘Ｉ钪械闹匾称分唬Ｄ藤|(zhì)量安全也逐漸成為全社會普遍關(guān)注的焦點(diǎn)問題。菌落總數(shù)是牛奶質(zhì)量安全的風(fēng)險因子之一，在擠奶、儲存、運(yùn)輸、生產(chǎn)、銷售等各個環(huán)節(jié)中都有污染的風(fēng)險，一旦污染可能導(dǎo)致食源性感染甚至中毒。

目前，生鮮乳中菌落總數(shù)檢測方法主要包括國標(biāo)法和測試片法。國標(biāo)法具有良好的準(zhǔn)確度和靈敏度，但操作繁瑣；測試片法所需的器材體積小、重量輕，方便運(yùn)輸攜帶，且不需要滅菌，具有操作方便和快捷的特點(diǎn)。該研究旨在通過采用統(tǒng)計學(xué)方法比較Peelplate 3M測試片法和國標(biāo)法對生鮮乳樣品菌落總數(shù)測定結(jié)果的差異，探討測試片法替代國標(biāo)法的可行性；在該基礎(chǔ)上，對Peelplate 3M測試片法中樣本不同培養(yǎng)時間對檢測結(jié)果的影響進(jìn)行分析，以期為生產(chǎn)實踐中科學(xué)選取生鮮乳菌落總數(shù)的測定方法提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品及來源

奶罐奶樣品分別采集自內(nèi)蒙古呼倫貝爾市（37 個批次）、通遼市（35 個批次）、呼和浩特市（30個批次），主要取自運(yùn)輸環(huán)節(jié)；乳頭奶：45批次。

表1 呼倫貝爾市生鮮乳樣品中菌落總數(shù)不同檢測方法的測定結(jié)果分析 份，萬個CFU/mL

表2 通遼市生鮮乳樣品中菌落總數(shù)不同檢測方法的測定結(jié)果分析 份，萬個CFU/mL

1.2 儀器設(shè)備

無菌均質(zhì)器（SCIENI-11L）購自寧波新芝生物科技有限公司；調(diào)速振蕩器（HY-8）購自常州國華電器有限公司；生化培養(yǎng)箱（SHP-150型）購自上海精密實驗設(shè)備有限公司；超凈工作臺（YJ-875）購自蘇州凈化設(shè)備公司；高壓滅菌鍋（MY-54A）購自上海新諾儀器設(shè)備有限公司。

1.3 培養(yǎng)基

平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基、無菌生理鹽水均購自北京陸橋技術(shù)股份有限公司，Peelplate 3M測試片由美國3M微生物公司提供。

1.4 采樣方法

對于生鮮乳收購站的儲奶罐，采樣前先開動機(jī)械式攪拌器攪拌5 min；對于沒有配備機(jī)械式攪拌設(shè)備的儲奶罐，采樣前先用人工攪拌器探入灌底，采取從下至上的方式攪拌30次以上。樣品充分混勻后，用液態(tài)乳鏟斗從表面、中部、底部3點(diǎn)采樣，將采集到的樣品混合至4 L塑料容器中，充分混勻后，用采樣瓶分裝，根據(jù)檢測內(nèi)容和指標(biāo)要求，每份樣品不少于100 mL。

1.5 生鮮乳中菌落總數(shù)檢測方法

1.5.1 國標(biāo)法：參照GB 4789.2—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定》［1］，具體步驟如下：在無菌操作下，對生鮮乳樣品進(jìn)行稀釋：用10 mL滅菌吸管吸取樣品25 mL，緩慢注入225 mL的生理鹽水中，樣品稀釋液記為10-1液體。吸取10-1樣品液1 mL，沿管壁緩慢注入9 mL稀釋液中，依次制成3個稀釋度的樣品液。從制備最初的稀釋液至傾倒培養(yǎng)時間不宜超過15 min。

分別取 10-3、10-4、10-5稀釋度的樣品液1 mL傾注接種。每個梯度每種培養(yǎng)基做2個平板，同時做空白對照。待瓊脂凝固后倒置培養(yǎng)37℃，48 h后進(jìn)行菌落計數(shù)。

1.5.2 Peelplate 3M測試片法：采用無菌操作方法，按照國標(biāo)法制備稀釋梯度溶液。將測試片置于平坦表面處，揭開上層膜。使用吸管將1 mL梯度稀釋溶液垂直滴加于測試片中央，用模板壓下，切勿扭轉(zhuǎn)壓板。緩慢落下上層膜，靜置至少1 min以使培養(yǎng)基凝固。底部向上36℃分別培養(yǎng)24 h和48 h，對不同培養(yǎng)時間下各平板的菌落進(jìn)行計數(shù)。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)利用Excel軟件進(jìn)行初步整理。應(yīng)用SPSS軟件中的方差分析法對Peelplate 3M測試片法和國標(biāo)法的菌落總數(shù)測定結(jié)果進(jìn)行比較，同時比較Peelplate 3M測試片法中樣品培養(yǎng)24 h和48 h的菌落總數(shù)測定結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 呼倫貝爾市生鮮乳樣品中菌落總數(shù)不同檢測方法的測定結(jié)果比較

從表1可以看出，國標(biāo)法檢測結(jié)果為0.08萬個CFU/mL～26.5萬個CFU/mL，平均值為4.51萬個 CFU/mL；Peelplate 3M測試片法檢測結(jié)果為0.03萬個CFU/mL～16.0萬個CFU/mL，平均值為2.67萬個CFU/mL；方差分析結(jié)果表明，2種方法的檢測結(jié)果差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 通遼市生鮮乳樣品中菌落總數(shù)不同檢測方法的測定結(jié)果比較

從表2可以看出，國標(biāo)法檢測結(jié)果為0.05萬個CFU/mL～91.0萬個CFU/mL，平均值為4.67萬個 CFU/mL；Peelplate 3M測試片法檢測結(jié)果為0.05萬個CFU/mL～95.0萬個CFU/mL，平均值為4.74萬個CFU/mL；方差分析結(jié)果表明，2種方法的檢測結(jié)果差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 呼和浩特市生鮮乳樣品中菌落總數(shù)不同檢測方法的測定結(jié)果比較

表3 呼和浩特市生鮮乳樣品中菌落總數(shù)不同檢測方法的測定結(jié)果分析 份，萬個CFU/mL

表4 測試片法不同培養(yǎng)時間牛奶中菌落總數(shù)測定結(jié)果分析 份，萬個CFU/mL

從表3可以看出，國標(biāo)法檢測結(jié)果為0.21萬個CFU/mL～2.5萬個CFU/mL，平均值為1.03萬個CFU/mL；Peelplate 3M測試片法檢測結(jié)果為0.07萬個CFU/mL～4.2萬個CFU/mL，平均值為0.78萬個CFU/mL；方差分析結(jié)果表明，2種方法的檢測結(jié)果差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 Peelplate 3M測試片法不同培養(yǎng)時間牛奶中菌落總數(shù)測定結(jié)果比較

從表4可以看出，Peelplate 3M測試片法樣品培養(yǎng)24 h時，菌落總數(shù)測定結(jié)果為0.35萬個CFU/mL～183.0萬個 CFU/mL，平均值為102.99萬個CFU/mL；培養(yǎng)48 h時，菌落總數(shù)測定結(jié)果為0.30萬個CFU/mL～188.0萬個CFU/mL，平均值為115.12萬個CFU/mL；方差分析結(jié)果表明，樣品培養(yǎng)24 h和48 h測定結(jié)果差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

從呼倫貝爾市、通遼市、呼和浩特市共102批次奶罐生鮮乳樣品菌落總數(shù)檢測結(jié)果來看：中東部地區(qū)生鮮乳的菌落總數(shù)平均值為0.78萬個CFU/mL～4.74萬個CFU/mL，小于美國和歐盟平均水平（10萬個/mL），達(dá)到了我國優(yōu)質(zhì)乳菌落總數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)（10 萬個/mL）。 許振偉等［2］研究報道，上海地區(qū)生鮮乳菌落總數(shù)為0.011萬個CFU/mL～110萬個CFU/mL，而該研究中測定結(jié)果的最大平均值為4.74萬個CFU/mL，低于上海地區(qū)；達(dá)列亞·阿合買提［3］研究報道，烏魯木齊地區(qū)生鮮乳中菌落總數(shù)為0.1萬個CFU/mL～160萬個CFU/mL，最大值也高于該研究結(jié)果的最大平均值；比爾來西肯·賽都力等［4］的研究結(jié)果表明，伊寧地區(qū)生鮮乳中菌落總數(shù)為23萬個CFU/mL～64萬個CFU/mL，最大值也高于該研究結(jié)果；黑龍江省獸藥飼料監(jiān)察所2011年發(fā)布的檢測報告表明，黑龍江地區(qū)運(yùn)輸車生鮮乳中菌落總數(shù)為0.36萬個CFU/mL～460萬個CFU/mL［5］，最大值也高于該研究結(jié)果。綜上提示，內(nèi)蒙古中東部地區(qū)生鮮乳衛(wèi)生狀況良好。

該研究結(jié)果表明，生鮮乳菌落總數(shù)檢測國標(biāo)法和Peelplate 3M測試片法的菌落總數(shù)測定結(jié)果差異不顯著（P＞0.05）。國標(biāo)法操作煩瑣、費(fèi)時，測試片法檢出率高，操作簡便，占用空間小，特別適用于實驗空間較小的實驗室及野外操作。以采集的45份乳頭奶稀釋液為樣本，對培養(yǎng)24 h和48 h后的測定結(jié)果進(jìn)行比較，方差分析結(jié)果表明，2個培養(yǎng)時間的測定結(jié)果差異不顯著（P＞0.05），提示在使用Peelplate 3M測試片法時，培養(yǎng)24 h即可對樣品進(jìn)行菌落計數(shù)。

4 結(jié)論

內(nèi)蒙古中東部地區(qū)生鮮乳中細(xì)菌污染風(fēng)險??；國標(biāo)法和Peelplate 3M測試片法測定生鮮乳中菌落總數(shù)結(jié)果沒有顯著性差異，建議實踐生產(chǎn)中推廣應(yīng)用測試片法；應(yīng)用Peelplate 3M測試片法測定生鮮乳中菌落總數(shù)時，樣品培養(yǎng)24 h即可獲得可靠的測定結(jié)果。

參考文獻(xiàn)：

［1］中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會，國家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定：GB 4789.2—2016［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.

［2］許振偉，韓奕奕，鄭小平，等.生鮮乳中硫氰酸鈉和菌落總數(shù)的風(fēng)險評估研究［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2013，40（S1）：18-22.

［3］達(dá)列亞·阿合買提.新疆生鮮乳菌落總數(shù)和部分理化指標(biāo)檢測［J］.中國畜牧獸醫(yī)文摘，2013，29（10）：52-53.

［4］比爾來西肯·賽都力，王一明，阿曼土爾，等.伊寧市區(qū)生鮮牛乳中微生物污染程度檢測與分析［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2014（13）：209-211.

［5］黑龍江省獸藥飼料監(jiān)察所.2011年黑龍江省生鮮乳中菌落總數(shù)監(jiān)測情況［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2011（12）：53-54.