張鋼,林毅樞#,王強(qiáng)
1北京大學(xué)第三醫(yī)院海淀院區(qū)(北京市海淀醫(yī)院)泌尿外科,北京 100080
2解放軍第三〇九醫(yī)院泌尿外科,北京 100091
膀胱癌是泌尿系統(tǒng)上皮來(lái)源惡性腫瘤中發(fā)病率最高的疾病,流行病學(xué)研究顯示膀胱癌的發(fā)病率可達(dá)223/10萬(wàn)~455/10萬(wàn)[1]。膀胱癌的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,包括遺傳因素、基因突變或分子生物學(xué)水平的相關(guān)改變等。乙醛脫氫酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)為過(guò)氧化因子家族成員,其能夠通過(guò)對(duì)膀胱移行上皮細(xì)胞的促進(jìn)增殖及凋亡抑制作用,增加膀胱癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),加劇膀胱腺癌或者透明細(xì)胞癌等的發(fā)生率[2]。已有的相關(guān)臨床研究揭示了ALDH1在膀胱癌患者中的異常表達(dá)情況,認(rèn)為高表達(dá)ALDH1是促進(jìn)膀胱癌患者不良預(yù)后的重要因素[3-4],但缺乏對(duì)于ALDH1與膀胱癌患者臨床病理特征的關(guān)系研究。為了進(jìn)一步揭示ALDH1在促進(jìn)膀胱癌發(fā)病過(guò)程中的作用,本研究收集手術(shù)后切除的膀胱癌組織標(biāo)本100例,探討了ALDH1的表達(dá)與膀胱癌患者臨床分期、癌細(xì)胞分化程度等的關(guān)系,現(xiàn)報(bào)道如下。
回顧性分析2014年12月至2016年8月于北京市海淀醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)治療的100例膀胱癌患者的臨床資料,收集患者手術(shù)后切除的膀胱癌標(biāo)本100例。納入標(biāo)準(zhǔn):①膀胱癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)的標(biāo)準(zhǔn);②組織標(biāo)本來(lái)源于膀胱癌患者實(shí)施手術(shù)后的標(biāo)本;③術(shù)前未接受放化療、免疫治療;④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):①臨床資料缺失嚴(yán)重,無(wú)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;②合并其他部位的腫瘤疾病;③復(fù)發(fā)性膀胱癌患者。膀胱癌患者中,男67例,女33例;年齡41~82歲,平均(65.1±11.7)歲;臨床分期:Ta期 9例,Tis期 22例,T1期 18例,T2期 25例,T3期20例,T4期6例;病理學(xué)分級(jí):Ⅰ級(jí)18例、Ⅱ級(jí)24例,Ⅲ級(jí)58例。選取相應(yīng)的癌旁正常膀胱組織40例作為對(duì)照。
采用石蠟切片脫蠟至水,采用離子水進(jìn)行反復(fù)洗滌,加入牛奶液體封閉抗體,封閉時(shí)間為5 min,加入ALDH1蛋白抗體(鼠來(lái)源,購(gòu)自美國(guó)Abcam公司),37℃孵育2 h,采用磷酸鹽緩溶沖液沖洗3次,滴加熒光染色標(biāo)記的二抗抗體(購(gòu)自美國(guó)Abcam公司),37℃孵育30 min,加入磷酸鹽緩沖溶液沖洗5 min,連續(xù)沖洗3次,采用南京凱基生物制劑公司生產(chǎn)的顯色劑進(jìn)行顯色,封片,鏡下觀察。
免疫組化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):ALDH1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞漿,染色呈黃色、棕黃色、褐色。①根據(jù)細(xì)胞的染色強(qiáng)度評(píng)分:無(wú)色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,褐色、黑色為3分;②根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分:無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0分,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例占11%~50%為2分,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例占51%~75%為3分,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例﹥75%為4分。兩種積分相乘,總分﹤3分為陰性(-),≥3分為陽(yáng)性,其中3~5分為弱陽(yáng)性(+),6~9分為陽(yáng)性(++),﹥9分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。
采用SPSS 16.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P﹤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
膀胱癌組織中ALDH1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為42.00%,明顯高于癌旁正常膀胱組織的5.00%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.150,P﹤0.01)。(表1、圖1)
表1 不同組織中ALDH1蛋白的表達(dá)情況
圖1 不同組織中ALDH1蛋白的表達(dá)情況(免疫組化染色,×400)
有脈管浸潤(rùn)、有神經(jīng)浸潤(rùn)、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T2~4期膀胱癌組織中ALDH1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率均高于無(wú)脈管浸潤(rùn)、無(wú)神經(jīng)浸潤(rùn)、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ta~1期的膀胱癌組織,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)。(表2)
表2 ALDH1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與膀胱癌患者臨床特征的關(guān)系[n(%)]
目前臨床上膀胱癌的總體治療有效率不足25%[2],包括手術(shù)或者聯(lián)合放化療等綜合性治療措施的臨床病情緩解率均較低。同時(shí),對(duì)于膀胱癌的早期發(fā)病缺乏有效的篩查指標(biāo),雖然CA125等上皮腫瘤糖蛋白成分能夠在一定程度上提高膀胱癌的診斷率,但其篩查的靈敏度或者特異度等的局限性仍然較為明顯。本次對(duì)于分子生物學(xué)相關(guān)指標(biāo)的研究,具有下列幾個(gè)方面的顯著意義:①能夠?yàn)榘螂装┑姆肿釉\斷學(xué)提供新的研究方向;②能夠?yàn)榻沂景螂装┑陌l(fā)病原因提供理論基礎(chǔ),并為后續(xù)臨床藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)提供治療靶點(diǎn)。
近年來(lái),分子生物學(xué)水平的異常被認(rèn)為是影響惡性腫瘤發(fā)生的核心因素,分子水平的表達(dá)調(diào)控異常增加了癌細(xì)胞過(guò)度擴(kuò)增的風(fēng)險(xiǎn),導(dǎo)致癌細(xì)胞的正常分化或者促凋亡過(guò)程明顯失常[5-6]。ALDH1是核糖體修飾因子,其對(duì)于核糖體羧基末端的修飾作用能夠提高染色體DNA的錯(cuò)配風(fēng)險(xiǎn),并抑制基因錯(cuò)配修復(fù)因子cyc活性。ALDH1的高表達(dá)提高了癌細(xì)胞對(duì)于血管內(nèi)皮或者淋巴管內(nèi)皮的黏附能力,對(duì)于惡性腫瘤的進(jìn)展具有一定的促進(jìn)作用[7-8]。同時(shí),ALDH1對(duì)于泌尿系統(tǒng)移行上皮細(xì)胞的細(xì)胞核增殖、細(xì)胞周期的調(diào)控或者癌細(xì)胞的變形能力等的影響,能夠增加膀胱癌病灶組織對(duì)于鄰近正常組織的浸潤(rùn),促進(jìn)膀胱癌臨床分期的進(jìn)展[9-10]?;仡檱?guó)內(nèi)外已有的相關(guān)研究,部分研究者在探討ALDH1對(duì)惡性腫瘤發(fā)生的影響時(shí)發(fā)現(xiàn),ALDH1能夠促進(jìn)卵巢癌或者甲狀腺癌等惡性腫瘤的發(fā)病,但在膀胱癌中的研究并不充分。
本研究發(fā)現(xiàn),在膀胱癌組織中,ALDH1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁正常膀胱組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.150,P﹤0.01),提示ALDH1蛋白的表達(dá)可能與膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān),ALDH1蛋白的高表達(dá)能夠通過(guò)以下幾個(gè)方面促進(jìn)惡性腫瘤的病情進(jìn)展[11-13]:①ALDH1蛋白的高表達(dá)促進(jìn)了癌細(xì)胞細(xì)胞周期中G1/S期的比例,導(dǎo)致癌細(xì)胞DNA擴(kuò)增速度的改變;②ALDH1蛋白影響到了癌細(xì)胞分化凋亡抑制因子的表達(dá),抑制了早期膀胱移行上皮細(xì)胞的分化成熟,導(dǎo)致癌細(xì)胞的凋亡減少。Masaoka等[14]研究者探討了小樣本量的中晚期膀胱癌患者的免疫組化資料,發(fā)現(xiàn)在膀胱癌病灶組織的中心部分可見(jiàn)明顯的ALDH1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率的上升,且患者的遠(yuǎn)期生存預(yù)后越差,病程越長(zhǎng),ALDH1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率越高。免疫組化染色分析可見(jiàn),ALDH1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)主要定位于膀胱癌細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)內(nèi),且癌細(xì)胞的分化程度越低,癌細(xì)胞的異型性越明顯,ALDH1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率越高,但也發(fā)現(xiàn)部分癌細(xì)胞中ALDH1蛋白的陽(yáng)性表達(dá),提示其可能還影響到了癌細(xì)胞間信息的傳遞。在探討ALDH1蛋白與膀胱癌患者臨床病理特征的關(guān)系過(guò)程中發(fā)現(xiàn),在發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中,ALDH1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率較高,這主要考慮與ALDH1蛋白對(duì)于淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子的激活,或者對(duì)于分化轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的影響有關(guān)。同時(shí),在有脈管浸潤(rùn)、有神經(jīng)浸潤(rùn)或者臨床分期較晚的膀胱癌患者中,ALDH1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率同樣較高,這提示ALDH1對(duì)于神經(jīng)元或者組織間質(zhì)成分中的引流管等均具有一定的親和力,而其對(duì)于臨床分期的影響可能與其對(duì)于膀胱鄰近綜上所述,正常組織器官的浸潤(rùn)有關(guān)。
本研究的創(chuàng)新性在于探討了ALDH1蛋白與膀胱癌患者神經(jīng)浸潤(rùn)或者脈管浸潤(rùn)的關(guān)系。ALDH1蛋白在膀胱癌組織中呈高表達(dá),且與膀胱癌患者的脈管浸潤(rùn)、神經(jīng)浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期有關(guān),其可能在膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用。
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