,,, , ,,,

1.浙江省平湖市第二人民醫(yī)院外科,平湖 314201; 2.同濟(jì)大學(xué)附屬上海市東方醫(yī)院胃腸肛腸外科,上海 200120

結(jié)腸癌作為我國常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率逐年升高[1]。根治性手術(shù)為主的綜合治療是目前主要的治療手段,但仍存在腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的風(fēng)險。因此,迫切需要找到在術(shù)前能客觀反映腫瘤臨床病理分期的指標(biāo)以全面判斷手術(shù)風(fēng)險和預(yù)后。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells,CTCs)是指在腫瘤患者外周血液中可檢測到的腫瘤細(xì)胞,具有高度活力和高轉(zhuǎn)移潛能,能在合適條件下在其他器官內(nèi)增殖并導(dǎo)致腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。近年,CTCs與腫瘤臨床病理分期相關(guān)性引起高度重視,通過檢測外周血中CTCs可為客觀判斷腫瘤患者的臨床病理分期和預(yù)后提供依據(jù)[2-3]。本研究通過檢測結(jié)腸癌患者術(shù)前外周血中CTCs,分析其與術(shù)后臨床病理分期之間的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

隨機(jī)抽取平湖市第二人民醫(yī)院2015年1月—2016年12月新入院結(jié)腸癌患者。入組標(biāo)準(zhǔn):(1)年齡、性別不限;(2)結(jié)腸鏡檢查并經(jīng)組織學(xué)活檢確診為結(jié)腸癌;(3)入組前未接受任何化學(xué)藥物、放射、免疫制劑、中醫(yī)中藥等抗腫瘤治療;(4)簽署知情同意書。記錄這些患者的術(shù)后臨床病理資料,包括腫瘤大小、浸潤深度、神經(jīng)脈管侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。并以同時期住院的肛瘺、混合痔、結(jié)腸息肉等良性病變患者作為對照組,患者病變組織均經(jīng)病理確診。

1.2 CTCs檢測

于術(shù)前1天經(jīng)患者肘靜脈抽血7.5 mL,用肝素抗凝,應(yīng)用CellSearch系統(tǒng)(美國強(qiáng)生公司)檢測外周血中CTCs數(shù)量。CTCs判斷標(biāo)準(zhǔn):(1)光鏡下有完整的細(xì)胞核,細(xì)胞呈圓形、橢圓形或長形,細(xì)胞長徑>10 μm;(2)熒光下細(xì)胞形態(tài)及邊緣完整,熒光染色標(biāo)準(zhǔn)anti-CK8/CK18/CK19抗上皮細(xì)胞表面抗原陽性,anti-CD45抗白細(xì)胞表面抗原陰性;(3)細(xì)胞核DAPI核染色陽性,細(xì)胞核直徑大于8 μm,并且核形狀不規(guī)則;(4)細(xì)胞核染色與其相應(yīng)細(xì)胞膜染色部位大于50%以上。

1.3 觀察指標(biāo)

分析結(jié)腸癌患者外周血中CTCs與腫瘤大小、侵犯深度、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均用 SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,χ2檢驗或Fisher精確概率法分析CTCs與腫瘤侵犯深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等相關(guān)性;P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

結(jié)腸癌患者共32例,男18例,女14例,年齡32～81歲,平均(65.28±12.67)歲。其中,13例結(jié)腸癌患者術(shù)前外周血中檢出CTCs,陽性率40.6%。10例對照組外周血中均未檢出CTCs,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

2.2 結(jié)腸癌患者外周血CTCs與臨床病理相關(guān)性

結(jié)腸癌患者外周血CTCs陽性與患者年齡、性別、腫瘤是否神經(jīng)侵犯無關(guān),但與腫瘤浸潤深度、TNM分期、脈管侵犯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1結(jié)腸癌患者外周血CTCs和臨床病理間聯(lián)系
Tab.1RelationshipbetweenCTCsinperipheralbloodandclinicopathologicalfeaturesinpatientswithcoloncancer

項目例數(shù)陽性數(shù)(陽性率/%)P值年齡/歲<65188(44．4)≥65145(35．7)>0．05性別男187(38．9)女146(42．9)>0．05浸潤深度T110(0)T251(20)T3125(41．7)T4147(50)<0．05TNM分期Ⅰ期10(0)Ⅱ期82(25)Ⅲ期157(46．7)Ⅳ期84(50)<0．05神經(jīng)侵犯(+)198(42．1)(-)135(38．5)>0．05脈管侵犯(+)209(45)(-)124(33．3)<0．05

2.3 不同浸潤深度對CTCs陽性率影響

浸潤程度深 (T3+T4) 患者的CTCs陽性檢出率顯著高于浸潤深度較淺 (T1+T2) 患者(P<0.05),見表2。

表2 結(jié)腸癌浸潤深度與CTCs陽性率的比較Tab.2 Comparison of CTCs positive rates in patients with different infiltration depths of colon cancer

2.4 不同TNM分期對CTCs陽性檢出率影響

TNM分期高(Ⅲ+Ⅳ)患者CTCs陽性檢出率顯著高于TNM分期低(Ⅰ+Ⅱ)患者(P<0.05),見表3。

表3 不同TNM分期結(jié)腸癌患者CTCs陽性率比較Tab.3 Comparison of CTCs positive rates in patients with different TNM stages of colon cancer

3 討論

癌微轉(zhuǎn)移是腫瘤惡性特征之一,與腫瘤臨床病理分期、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)、預(yù)后緊密相關(guān)。原發(fā)灶部分腫瘤細(xì)胞具有高度侵襲能力,可通過侵犯血管周圍基質(zhì)、突破基底膜進(jìn)入血循環(huán)而成為CTCs。一旦CTCs離開血循環(huán)進(jìn)入其他臟器局部組織,逃脫機(jī)體免疫監(jiān)視,存活并發(fā)生克隆增殖,最終將形成肉眼可見的腫瘤轉(zhuǎn)移灶。CTCs在外周血中數(shù)量稀少,據(jù)報道一般每107～108個正常外周血細(xì)胞中約含有1個CTC[4-5]。以往由于檢測技術(shù)限制,只能檢測外周血腫瘤標(biāo)志物如癌胚抗原、CD153、CD199、CD125、CD724、細(xì)胞角蛋白(cytokinases,CKs)等。

CTCs檢測是近年興起的一項臨床新技術(shù),它通過CellSearch系統(tǒng)、微流控芯片等技術(shù)直接檢測外周循環(huán)血中腫瘤細(xì)胞數(shù)量。據(jù)報道,肺、乳腺、肝、胃、結(jié)直腸癌等多種實體瘤患者外周血中都能檢測到CTCs,且CTCs惡性度與原發(fā)腫瘤細(xì)胞大致相同[2];CTCs存在與腫瘤分期有明顯相關(guān)性,CTCs數(shù)越多患者面臨遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移負(fù)荷越重,未來發(fā)生轉(zhuǎn)移灶越多[6-7];且CTCs與腫瘤微轉(zhuǎn)移也密切相關(guān)[8]。

本研究中結(jié)腸癌患者外周血中能夠檢測到CTCs,且與患者臨床腫瘤病理分期高度相關(guān),TNM分期越晚,CTCs陽性率越高,與文獻(xiàn)報道一致。但有幾個現(xiàn)象應(yīng)在今后的研究中加以重視:(1)結(jié)腸癌患者外周血中CTCs檢測總陽性率不高。(2)少數(shù)腫瘤浸潤較淺、分期較早的結(jié)腸癌患者也能檢測到CTCs,這可部分解釋臨床上少數(shù)結(jié)腸癌患者雖病理分期不晚、甚至進(jìn)行了規(guī)范化療,但很快遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象,或許與CTCs存在有一定關(guān)系。(3)個別TNM分期很晚甚至出現(xiàn)肝臟轉(zhuǎn)移患者,其CTCs陰性,提示目前的CTCs檢測技術(shù)還不盡完善并可能存在假陰性現(xiàn)象,或與CTCs在循環(huán)血中數(shù)量極少、分布不均、隨機(jī)單次采血檢測CTCs有難度和偶然性有關(guān)。

另外,CTCs與患者預(yù)后相關(guān)性也值得探討。有報道,外周血CTCs、CK20 mRNA陽性胃癌患者的預(yù)后比那些CK20陰性者差[8]。一項meta分析結(jié)果表明,CTCs與循環(huán)DNA檢測對胃癌患者預(yù)后判斷也有重要參考價值。因此,CTCs陽性與結(jié)腸癌患者預(yù)后相關(guān)性也有待日后深入研究。

[1] 沈韌斌.腹腔鏡下直腸及乙狀結(jié)腸癌根治術(shù)44例臨床分析[J].外科研究與新技術(shù),2014,3(3):174-176.

[2] Baccelli I,Schneeweiss A,Riethdorf S,et al.Identification of a population of blood circulating tumor cells from breast cancer patients that initiates metastasis in a xenograft assay[J].Nat Biotechnol,2013,31(6):539-544.

[3] Zhang ZY,Ge HY.Micrometastasis in gastric cancer[J].Cancer Lett,2013,336(1):34-45.

[4] Krebs MG,Metcalf RL,Carter L,et al.Molecular analysis of circulating tumor cells—biology and biomarkers[J].Nat Rev Clin Oncol,2014,11(3):129-144.

[5] Alix-Panabieres C,Pantel K.Challenges in circulating tumor cell research[J].Nat Rev Cancer,2014,14(9):623-631.

[6] Hou JM,Greystoke A,Lancashire L,et a1.Evaluation of circuluting tumor cells and serological cell death biomarkers in small cell lung cancer patients undergoing chemotherapy[J].Am J Pathol,2009,175(2):808-816.

[7] Katoh M,Neumaier M,Kezam R.Correlation of circulating tumor cells with tumor size and metastatic load in a spontaneous lung metastasis model[J].Antieaneer Res,2004,24(3a):1421-1425.

[8] Pantel K,Alix-Panabieres C.Functional studies on viable circulating tumor cells[J].Clin Chem,2016,62(2):328-334.