譚冠文，趙江瑞，孫抗

（1.信陽職業(yè)技術學院，河南 信陽 464000；2.信陽職業(yè)技術學院附屬醫(yī)院，河南 信陽 464000）

妊娠糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是指在妊娠期間首次發(fā)生或發(fā)現(xiàn)的任何程度的糖耐量受損；屬于妊娠期常見但嚴重的并發(fā)癥，不僅威脅到母體健康，還會大大增加嬰兒成年后心血管疾病的發(fā)病風險[1-3]。但是目前GDM的發(fā)病機制尚未完全明確，研究顯示GDM可能與環(huán)境、飲食結構和遺傳因素相關，且目前胰島素信號通路異常所致的胰島素抵抗（insulin resistance，IR）被認為是GDM發(fā)病的主要機制之一[4-6]。此外，炎癥反應在生理性IR向GDM發(fā)展的過程中起至關重要的作用[7]。視黃醇結合蛋白4（retinol binding protein 4，RBP4）是一種脂肪細胞因子，廣泛分布于人體血清、尿液及腦脊液中[8]。研究顯示[8-9]，RBP4可降低胰島素敏感性、加重炎癥反應，目前已可作為一種血清學指標，進行心血管疾病的早期篩查及檢測，但其在妊娠糖尿病中作用并沒有明確系統(tǒng)的研究。蛋白質核因子-κB（nuclear factorκB，NF-κB）同樣作為一種炎癥反應因子，可參與調控多種基因的表達，進而影響相關疾病的病理生理進程[10-11]。本研究檢測妊娠糖尿病患者血清中RBP4、NF-κB、空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）、空腹血胰島素（fasting insulin，F(xiàn)ins）等指標的變化，并分析其與穩(wěn)態(tài)模式評估胰島素抵抗（HOMA-IR）之間的相關性，為妊娠糖尿病的早期診療提供實驗依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 病例納入標準按照2010年國際妊娠合并糖尿病研究組織推薦的GDM診斷標準[12]，即空腹血糖、進糖后1 h、進糖后2 h的上限分別為5.1、10.0和8.5 mmol/L。所有孕婦均行口服葡萄糖耐量實驗：實驗中有2項或2項以上≥上限值，則診斷為GDM；實驗結果陰性者為正常（標準）葡萄糖耐量。所有孕婦均單胎首次妊娠。

1.1.2 排除標準妊娠前有糖尿病、高血壓及其他內外科慢性病病史；合并其他高血壓疾病或內分泌代謝性疾病者，如：妊娠高血壓、甲狀腺功能亢進（甲亢）及皮質醇增多癥等；有服用特殊藥物及影響糖代謝藥物史的患者；有煙酒等不良嗜好者。

1.2 臨床資料

依據(jù)納入及排除標準，選取2014年12月-2016年12月在本院產(chǎn)科產(chǎn)檢的104例孕婦，同時依據(jù)其糖耐量檢測結果分為妊娠糖尿?。╣estational diabetes mellitus group ，GDM）組和妊娠非糖尿?。╪ormal glucose tolerance pregnancy，NGT）組。其中，GDM組共46例。年齡25～28歲，平均（28.92±1.9）歲；孕周20～28周，平均（26.16±1.26）周。NGT組共58例。年齡23～29歲，平均（28.31±2.14）歲；孕周20～28周，平均（26.43±1.51）周。收集并錄入研究對象的一般臨床資料，以供后續(xù)實驗分析。本研究通過醫(yī)院倫理委員會審核備案，且所有入選對象均簽署知情通知書。

1.3 主要試劑

NF-κB活性檢測試劑盒（購自上?；鶢栴D生物科技有限公司），RBP4定量檢測試劑盒（購自美國R&D公司）。

1.4 ELISA測定RBP4水平及NF-κB活性

清晨空腹狀態(tài)下，采集研究對象外周靜脈血5 ml，離心（2 500 r/min）10 min分離血清，并將血清置入-20℃冰箱中冷凍保存?zhèn)溆?。RBP4水平及NF-κB活性采用ELISA檢測，依據(jù)試劑盒說明書進行操作，簡述如下：待測樣品及酶標板取出后室溫平衡30 min，標記后向相應微孔中加入標準品或待測樣品，溫育30 min后洗板5次；加HRP-標記的抗體，溫育30 min后洗板5次；加底物37℃避光孵育15 min顯色；加終止液并用酶標儀檢測各孔在450 nm的光密度值。

1.5 IR評估

采用葡萄糖氧化酶法檢測FBG水平，采用放射免疫法測定Fins的水平，而后采用HOMA-IR進行IR評估。計算公式：HOMA-IR=Fins×FBG/22.5。

1.6 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，采用t檢驗，相關性分析采用Pearson相關分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組孕婦一般臨床資料比較

兩組孕婦的一般臨床資料見附表，統(tǒng)計學分析顯示：GDM組與NGT組孕婦在年齡、孕期、體重指數(shù)（body mass index，BMI）、舒張壓（diastolic blood pressure，DBP）及收縮壓（systolic blood pressure，SBP）等方面比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。見附表。

附表 兩組一般臨床資料 （±s）

附表 兩組一般臨床資料 （±s）

組別 年齡/歲 妊娠/周 BMI/（kg/m2） SBP/mmHg DBP/mmHg NGT 28.31±2.14 26.43±1.51 21.92±2.11 128.7±9.62 79.77±9.01 GDM 28.92±1.9 26.16±1.26 23.18±2.63 132.43±10.2 81.32±7.68 t值 0.385 0.236 0.431 0.514 0.352 P值 0.891 0.934 0.692 0.418 0.904

2.2 兩組血清糖代謝情況及HOMA-IR值比較

GDM組患者血清中FBG的含量（6.92±1.02）mmol/L高于NGT組（4.20±0.55）mmol/L（t=2.789，P=0.007）；而GDM組和NGT組孕婦血清中Fins的含量分別為（11.98±1.67）和（10.89±1.58）mIU/L，差異無統(tǒng)計學意義（t=0.562，P=0.389）；此外GDM組患者的HOMA-IR值（3.74±0.96）高于NGT組的（2.04±0.23）（t=2.104，P=0.012），呈明顯的胰島素抵抗。

2.3 血清中RBP4的水平及其與HOMA-IR的相關性分析

GDM組患者血清中RBP4的水平（70.08±6.39）mg/L高于NGT組（47.31±9.07）mg/L，兩者差異有統(tǒng)計學意義（t=2.904，P=0.002）。經(jīng)Pearson等級相關分析發(fā)現(xiàn)RBP4的水平與HOMA-IR值之間無相關（r=0.268，P=0.376）。

2.4 血清中NF-κB的活性及其與HOMA-IR的相關性分析

GDM組患者血清中NF-κB的活性（3.73±0.92）ng/ml高于NGT組（1.05±0.17）ng/ml，兩者差異有統(tǒng)計學意義（t=3.272，P=0.001）。經(jīng)Pearson等級相關分析發(fā)現(xiàn)NF-κB的活性與HOMA-IR值之間呈正相關（r=0.755，P=0.003）。

2.5 血清中RBP4水平和NF-κB活性之間的相關性分析

GDM患者血清中RBP4水平和NF-κB活性之間呈正相關（r=0.752，P=0.003）。

3 討論

研究顯示，孕婦激素水平發(fā)生變化，特別是促進脂肪分解的激素水平增加，可導致體內炎癥因子的分泌、糖代謝及脂質代謝的異常，并出現(xiàn)胰島素抵抗[6，12-13]。本研究對所有納入孕婦的血清糖代謝水平進行統(tǒng)計學分析，結果顯示GDM組血清中FBG的含量升高；而兩組研究對象血清中Fins的含量無差異；此外GDM組的HOMA-IR值高于NGT組，出現(xiàn)胰島素抵抗。本結果與早期的研究具有一致性。

胰島素抵抗的發(fā)生，不僅涉及到體內糖代謝異常，也涉及到脂質代謝的異常。RBP4是一種核受體輔助因子，可影響視黃酸受體及視黃醇受體所調節(jié)的基因表達過程，并導致脂質的異常代謝[14-15]。近年來，許多學者對RBP4在妊娠糖尿病中的作用進行大量研究，所得結果卻不盡相同。DU等[16]對76例中國婦女進行的相關研究顯示RBP4在GDM患者血清中的表達水平升高，且與TG和HDL的表達具有相關性，可影響體內脂質代謝過程。KHOVIDHUNKIT等[17]對泰國婦女進行的研究則顯示RBP4在妊娠糖尿病患者及正常孕婦血清中的表達水平并無差異。造成不一致結果的原因可能是樣本量或是種族、地區(qū)的差異。本研究通過對46例妊娠糖尿病患者和58例妊娠非糖尿病孕婦的對照研究發(fā)現(xiàn)，妊娠糖尿病患者血清中RBP4的水平升高。經(jīng)Pearson相關性分析發(fā)現(xiàn)RBP4的水平與HOMA-IR值之間無相關。由此可認為，RBP4水平的升高對判斷妊娠糖尿病具有重要的參考意義，但血清RBP4水平與胰島素抵抗之間無關。

此外，本研究還檢測NF-κB在妊娠糖尿病中的可能作用，結果顯示，GDM組血清中NF-κB的活性高于NGT組。NF-κB作為信號轉導路徑的樞紐，一旦激活即可通過相應的正反饋機制，加速炎癥反應的發(fā)生[18]；而持續(xù)的炎癥反應正是妊娠糖尿病的發(fā)病機制之一。故血清中NF-κB活性的升高可作為診斷妊娠糖尿病的生物標志物。早期有研究認為，炎癥因子可通過激活JNK通路或NF-κB通路引起胰島素抵抗[19-20]，本研究經(jīng)Pearson等級相關分析發(fā)現(xiàn)NF-κB的活性與HOMA-IR值之間呈正相關。本結果從側面證實NF-κB參與調控妊娠糖尿病胰島素抵抗的發(fā)生，在妊娠糖尿病發(fā)病中起著的重要作用；但是NF-κB信號通路的異常在妊娠糖尿病中的具體作用及相關作用機制還有待進一步深入的研究。此外，研究結果還顯示，GDM患者血清中RBP4水平和NF-κB活性之間呈正相關，說明兩者之間可能存在某種形式的協(xié)同作用，可共同作為妊娠糖尿病的診斷指標。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)妊娠糖尿病組患者血清中RBP4、NF-κB、FBG及HOMA-IR等指標的表達水平均呈升高趨勢，且NF-κB的活性與HOMA-IR呈正相關，可能參與影響妊娠糖尿病患者胰島素抵抗的發(fā)生；此外，RBP4與NF-κB的水平呈正相關，兩者可協(xié)同作為今后妊娠糖尿病診斷的重要參考指標，并有望為其治療提供潛在的靶點。

[1] DUGAS C, PERRON J, KEARNEY M, et al. Postnatal prevention of childhood obesity in offspring prenatally exposed to gestational diabetes mellitus:where are we now[J]. Obes Facts, 2017,10(4):396-406.

[2] POULAKOS P, MINTZIORI G, TSIROU E, et al. Comments on gestational diabetes mellitus: from pathophysiology to clinical practice[J]. Hormones (Athens), 2015, 14(3): 335-344.

[3] GUILLéN M A, HERRANZ L, BARQUIEL B, et al. Influence of gestational diabetes mellitus on neonatal weight outcome in twin pregnancies[J]. Diabet Med, 2014, 31(12): 1651-1656.

[4] CHASAN-TABER L. Life style interventions to reduce risk of diabetes among women with prior gestational diabetes mellitus[J].Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol, 2015, 29(1): 110-122.

[5] BENTLEY-LEWIS R, DAWSON D L, WENGER J B, et al.Placental histomorphometry in gestational diabetes mellitus: the relationship between subsequent type 2 diabetes mellitus and race/ethnicity[J]. Am J Clin Pathol, 2014, 141(4): 587-592.

[6] KUSUNOKI Y, KATSUNO T, NAKAE R, et al. Insulin resistance and β-cell function influence postprandial blood glucose levels in Japanese patients with gestational diabetes mellitus[J].Gynecol Endocrinol, 2015, 31(12): 929-933.

[7] PANTHAM P, AYE I L, POWELL T L. Inflammation in maternal obesity and gestational diabetes mellitus[J]. Placenta, 2015, 36(7):709-715.

[8] PARK S E, LEE N S, PARK J W, et al. Association of urinary RBP4 with insulin resistance, inflammation, and microalbuminuria[J].Eur J Endocrinol, 2014, 171(4): 443-449.

[9] ZABETIAN-TARGHI F, MAHMOUDI M J, REZAEI N, et al. Retinol binding protein 4 in relation to diet, inflammation,immunity, and cardiovascular diseases[J]. Adv Nutr, 2015, 6(6):748-762.

[10] YUAN Y L, LIN B Q, ZHANG C F, et al. Timosaponin B-II ameliorates palmitate-induced insulin resistance and inflammation via IRS-1/PI3K/Akt and IKK/NF-κB pathways[J]. Am J Chin Med, 2016, 44(4): 755-769.

[11] KE B, ZHAO Z, YE X, et al. Inactivation of NF-κB p65 (RelA)in liver improves insulin sensitivity and inhibits cAMP/PKA pathway[J]. Diabetes, 2015, 64(10): 3355-3362.

[12] FEI B B, LING L, HUA C, et al. Effects of soybean oligosaccharides on antioxidant enzyme activities and insulin resistance in pregnant women with gestational diabetes mellitus[J]. Food Chem, 2014(158): 429-432.

[13] LI D D, SU D Y, XUE L, et al. Relationship between a lipoprotein lipase gene polymorphism in placental tissue and insulin resistance in patients with gestational diabetes mellitus[J]. Genet Mol Res, 2015, 14(3): 7751-7758.

[14] KOTNIK P, FISCHER-POSOVSZKY P, WABITSCH M. RBP4:a controversial adipokine[J]. Eur J Endocrinol, 2011, 165(5): 703-711.

[15] ZABETIAN-TARGHI F, MAHMOUDI M J, REZAEI N, et al. Retinol binding protein 4 in relation to diet, inflammation,immunity, and cardiovascular diseases[J]. Adv Nutr, 2015, 6(6):748-762.

[16] DU M, WANG B, LIANG Z, et al. The Relationship between retinol-binding protein 4 concentrations and gestational diabetes mellitus in Chinese women[J]. Gynecol Obstet Invest, 2016,81(2): 174-180.

[17] KHOVIDHUNKIT W, PRUKSAKORN P, PLENGPANICH W,et al. Retinol-binding protein 4 is not associated with insulin resistance in pregnancy[J]. Metabolism, 2012, 61(1): 65-69.

[18] ZHANG H, SUN S C. NF-κB in inflammation and renal diseases[J]. Cell Biosci, 2015(5): 63.

[19] PRIYANKA A, SINDHU G, SHYNI G L, et al. Bilobalide abates inflammation, insulin resistance and secretion of angiogenic factors induced by hypoxia in 3T3-L1 adipocytes by controlling NF-κB and JNK activation[J]. Int Immunopharmacol, 2017(42):209-217.

[20] CYPHERT T J, MORRIS R T, HOUSE L M, et al. NF-κB-dependent airway inflammation triggers systemic insulin resistance[J]. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol, 2015,309(9): R1144-1152.