王淑妍，黃春鑫，李璐，張慧芝，張士嶺

表皮生長因子受體（EGFR）廣泛表達于多種腫瘤細胞中，使腫瘤細胞發(fā)生過表達，并引起突變導(dǎo)致腫瘤細胞生長的失控、侵襲性增加。人表皮生長因子受體2（HER2）屬于表皮生長因子受體家族中的一員，在許多惡性腫瘤表達異常增高，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，是癌癥的預(yù)后的重要指標，目前針對HER2蛋白的靶向治療藥物在臨床應(yīng)用中取得了顯著療效。筆者利用免疫組化方法檢測胰腺導(dǎo)管腺癌組織中EGFR及HER2蛋白表達的狀態(tài)，探討在胰腺導(dǎo)管腺癌中EGFR與HER2蛋白表達是否存在相關(guān)性，為胰腺導(dǎo)管腺癌個體化分子靶向治療提供更充足的依據(jù)?，F(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2014年 7月至2017年6月間寧波市臨床病理診斷中心確診的胰腺導(dǎo)管腺癌標本65份（65例患者）。其中男31例，女34例；年齡31～81歲（其中＜60歲者30例，≥60歲者35例），中位年齡62.50歲；高分化6例，中分化31例，低分化28例；腫瘤直徑為1.6～9.52cm（其中＜3cm者20例，≥3cm者45例）；胰腺周圍組織浸潤者44例，無浸潤者21例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者35例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者30例；有肝轉(zhuǎn)移者4例，無肝轉(zhuǎn)移者61例。以胰腺導(dǎo)管腺癌組織為實驗組，癌旁組織為對照組。

1.2 方法 所有標本均經(jīng) 10%甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，連續(xù)切片厚3～5 m，常規(guī)HE染色及免疫組化染色。免疫組化采用EnVision二步法，用羅氏Ventana Benchmark XT全自動免疫組化儀染色，一抗EGFR（5B7）及GS（4B5）均購自羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司，染色步驟按照試劑盒和抗體說明書操作。以PBS替代一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判定 EGFR及HER2的陽性部位均位于細胞膜（封三彩圖4），其中EGFR的免疫組化結(jié)果判定參照以下標準：無特異性膜染色或＜10%的癌細胞膜染色為（－），≥10%的癌細胞有完整或不完整膜染色為（+）；按照染色強度，分別判定為（+）、（2+）和（3+）。HER2 免疫組化結(jié)果判定參考《胃癌HER2檢測指南》[1]推薦：無特異性膜染色或＜10%的癌細胞膜染色為（－）；≥10%的腫瘤細胞微弱或隱約可見膜著色，僅有部分細胞膜著色染色為（+）；≥10%的腫瘤細胞有弱到中度的基底側(cè)膜、側(cè)膜或完全性膜著色為（2+）；≥10%的腫瘤細胞基底側(cè)膜、側(cè)膜或完全性膜強著色為（3+）。胰腺導(dǎo)管腺癌HER2表達顯示更強的異質(zhì)性，癌細胞的不完全性膜著色比較常見（封三彩圖5～6）。

1.4 統(tǒng)計方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采用2檢驗或Fisher精確概率法，相關(guān)性檢驗采用Pearson檢驗。＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

表1 EGFR、HER2在胰腺導(dǎo)管腺癌組織中的表達與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

2 結(jié)果

2.1 EGFR在65例胰腺導(dǎo)管腺癌組織中的陽性率為61.5%（40/65），陰性率為38.5%（25/65)，其中36.9%（24/65）為（+），20.0%（13/65）為（2+），4.6%(3/65）為（3+）。對照組中 EGFR陽性率為23.1%（15/65），均為（+），兩者差異有統(tǒng)計學意義（2=19.7，P＜ 0.05）。而 HER2蛋白表達陽性其中有7例樣本EGFR蛋白表達陽性，在胰腺導(dǎo)管腺癌中EGFR蛋白表達與 HER2蛋白成正相關(guān)（r=0.249，P ＜ 0.05）。在胰腺導(dǎo)管腺癌組織中的陽性率為12.3%（8/65），陰性率為 87.7%（55/65），其中 9.2%（6/65）為（+），3.1%（2/65）為（2+）。對照組中HER2陽性率為0，兩者差異有統(tǒng)計學意義（P=0.00）。

2.2 EGFR、HER2在胰腺導(dǎo)管腺癌組織中的表達與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系EGFR蛋白表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、胰周浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及肝轉(zhuǎn)移均無關(guān)（均P＞0.05）。HER2蛋白表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、分化程度均無關(guān)（均P＞0.05），但與胰周浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肝轉(zhuǎn)移均有關(guān)（均P＜0.05）。見表1。

2.3 在65例胰腺導(dǎo)管腺癌患者組織中有40例EGFR蛋白表達陽性，8例HER2蛋白表達陽性，兩者表達差異有統(tǒng)計學意義（ 2=29.25，P＜0.05）。8例HER2

3 討論

EGFR家族屬于酪氨酸激酶受體大家族，包括 EGFR(ErbB1)、HER2/neu（ErbB2）、HER3（ErbB3）和 HER4（ErbB4）。EGFR基因定位于染色體7p12，由 1186個氨基酸殘基構(gòu)成的170kD跨膜糖蛋白，在胰腺癌中EGFR對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展也起重要作用[2-3]。本研究結(jié)果表明，EGFR在胰腺導(dǎo)管腺癌組織中表達率為61.5%，在癌旁組織中的表達率為23.1%，兩者表達差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；EGFR蛋白表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、胰周浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及肝轉(zhuǎn)移均無關(guān)（均P＞0.05），與國內(nèi)外報道基本一致[4-5]。

HER2屬于EGFR家族由HER2基因編碼的絡(luò)氨酸蛋白激酶，具有自動磷酸化作用。HER2的過表達通過啟動多種轉(zhuǎn)移機制及影響上皮細胞鈣黏蛋白合成等增加腫瘤細胞的惡性程度及遷移能力，通過影響基質(zhì)金屬蛋白酶的表達促進腫瘤細胞的浸潤，在MAPK、PI3K/Akt等信號通路上對血管內(nèi)皮生長因子調(diào)控腫瘤細胞的生長與轉(zhuǎn)移[6]。研究表明，胰腺癌中HER2蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，特別是在有肝轉(zhuǎn)移的病例中更易檢測到HER2蛋白表達和基因擴增[7]。在本研究中，具有肝轉(zhuǎn)移的6例胰腺導(dǎo)管腺癌組織中均檢測到 HER2蛋白表達。有研究表明，增加HER2的表達，則增加腫瘤發(fā)生和癌細胞轉(zhuǎn)移潛能，其表達程度與細胞的侵襲性相關(guān)，表達強的胰腺癌具有更強的侵襲性[8]；本次研究中也發(fā)現(xiàn)10例 HER2蛋白表達的樣本有9例發(fā)生胰周浸潤。和EGFR蛋白表達相似，HER2蛋白表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、分化程度均無關(guān)（均 P＞0.05），這可能與腫瘤的形成及發(fā)展受多因素影響有關(guān)。

本實驗結(jié)果顯示胰腺導(dǎo)管腺癌組織中HER2和EGFR蛋白表達具有正相關(guān)性，但HER2蛋白表達陽性率顯著低于EGFR蛋白表達陽性率，且不表達于癌旁組織中；這表明HER2蛋白表達具有一定的腫瘤特異性。在乳腺癌的研究中已證實 HER2可以成為腫瘤治療的靶標，在胰腺導(dǎo)管腺癌的靶向治療中HER2也具有成為靶標的可能[9]。

綜上所述，在胰腺導(dǎo)管腺癌診治中EGFR不能作為一個獨立的預(yù)測因素來判斷腫瘤的分化、浸潤以及轉(zhuǎn)移，結(jié)合HER2的檢測預(yù)測腫瘤的惡性程度、浸潤轉(zhuǎn)移及預(yù)后可能會更有效；并且針對HER2陽性的患者，尤其是失去手術(shù)機會的患者進行靶向治療，可能會使今后一部分胰腺導(dǎo)管腺癌患者的死亡風險降低。

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